脳内のデング熱ウイルス感染を見る疾患モデルのこのプロトコルは、神経病原症に関連するウイルスおよび宿主ベクターをスクリーニングするためのin vivoプラットフォームになります。以前のモデルとは異なり、私たちのモデルは、脳症様疾患の生殖誘導のためにマウスを吸う免疫能力のあるがん研究所に感染するために、低ウイルス価を有する感染症のツールを使用しています。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の博士候補生であるティンジン・シェンです。
感染手順を開始する前に、非適合デング熱ウイルスを2つのストックに希釈し、RPMI 1640培地濃度の40マイクロリットル当たり10〜5番目のプラーク形成単位に1回にする。次に、10マイクロリットルの希釈ウイルスを搭載した30ゲージ針を装備した1つの0.3ミリリットルの注射器をロードする。そして、1匹の0.3ミリリットルの注射器は、動物あたり30マイクロリットルのウイルスを備えた30ゲージ針を装備した。
ウイルスの脳間送達のために、親指と人差し指の間のオラクルを押して、7日前の癌研究所のマウスを起こしやすい位置に静かに拘束し、矢状およびラムドイド縫合糸の交差点で、希釈されたウイルスの10マイクロリットル量をラムダ領域に注入する。脳間注射後、親指と人差し指を使用してマウスを圧ピン位置に保持し、腹腔内にやさしく、30マイクロリットルの希釈ウイルスを注入し、マウス腹部に注入する。病気の進行のスコアリングのために、急性ウイルス性脳炎のような病気のグレードに応じて、毎日接種された各マウスにゼロから5のスコアを割り当て、各グループの平均プラスとマイナスの標準偏差を使用して、曲線ベースの図として各日のスコアをプロットします。
模擬で測定された体重変化と比較して、接種マウスのみを媒質化し、デングウイルス接種動物は試験中の各時点で体重の減少を示す。さらに、デング熱ウイルス感染動物は、模擬接種動物によって表示される症状と比較して、ハンチ背勢、辺縁発作、辺縁性の衰弱、麻痺、および死亡の有意な増加を示す。実際、デング熱感染マウスは、模擬接種動物では観察されない生存率の時間依存的な減少を示し、マウスにおける急性ウイルス性脳炎様疾患の進行を示す中枢神経系内のデング熱ウイルスの感染モデルの確立を確認する。
間違った部位の穿刺は、スコアによる針の閉塞と頭部外のウイルス溶液のオーバーフローをもたらし、注射の失敗および感染の失敗をもたらす。手順に従って、脳サンプルは、病理学的損傷、免疫細胞浸潤、およびヘマトキシリンおよびエオシン染色フローサイトメトリー、およびプラーク形成アッセイによるウイルス複製分析のためにそれぞれ採取することができる。免疫担当マウスモデルは、デング熱ウイルス感染の病原性メカニズム、デング熱ウイルスワクチン、または抗デング熱ウイルス薬の開発のための病原性メカニズムを探索するためのプラットフォームを提供します。
デング熱ウイルスは、2つの病原体のバイオセーフティレベルであり、そのため、このウイルスに関するすべての実験は、資格のある動物バイオセーフティレベル2の実験室で完了すべきである。
