Этот протокол болезни модели вы видите инфекции вируса денге в головном мозге стать in vivo платформы для скрининга вирусных и принимающих векторов, связанных с нейропатогенезом. В отличие от предыдущих моделей, наши модели используют инструменты инфекции с низким вирусным titer, чтобы заразить иммунокомпетентного Института исследований рака сосание мышей для энцефалитической индукции деторождения болезни. Демонстрацией процедуры будет Тьинг-Цзин Шен, кандидат наук из моей лаборатории.
Перед началом инфекционной процедуры разбавляют неприспособленный вирус денге двумя бульонами, до одного раза от 10 до пятого бляшка, образуя единицы на 40 микролитров средней концентрации RPMI 1640. Затем загрузите один 0,3 миллилитровый шприц, оснащенный иглой 30 калибра с 10 микролитров разбавленного вируса. И один 0,3 миллилитровый шприц, оснащенный иглой 30 калибра, с 30 микролитров вируса на животное.
Для межцеребальной доставки вируса, нажмите оракул между большим и указательным пальцами, чтобы мягко ограничить семь дней старый сосание Институт исследований рака мыши в подверженном положении и ввести 10 микролитер объем разбавленного вируса в области лямбды, на пересечении sagittal и овсяного шва. После межцеребальной инъекции используйте большой и указательный пальцы, чтобы держать мышь в положении на спине, и осторожно интраперитонически, ввиснуть 30 микролитра объем разбавленного вируса, в живот мурина. Для оценки прогрессирования заболевания, назначить балл от нуля до пяти к каждому привитой мыши ежедневно, в соответствии с классом острого вирусного энцефалита, как болезни, и участок оценки за каждый день, как кривая основе фигуры, используя среднее плюс и минус стандартное отклонение ежедневных тестов в каждой группе.
По сравнению с изменениями массы тела измеряется в макет, средний только привитых мышей, вирус денге привитых животных демонстрируют снижение массы тела в каждый момент времени во время судебного разбирательства. Кроме того, вирус денге инфицированных животных демонстрируют значительное увеличение горбуна осанки, лимбические припадки, лимбической слабости, паралича и смерти по сравнению с симптомами отображается макет привитых животных. Действительно, инфицированные денге мыши демонстрируют зависимое от времени снижение выживаемости, которое не наблюдается у инсценированных привитых животных, что подтверждает создание инфекционной модели вируса денге в центральной нервной системе, которая демонстрирует прогрессирование острых вирусных заболеваний, похожих на энцефалит у мышей.
Прокол неправильного сайта может привести к блокировке иглы счетом и переполнению раствора вируса за пределами головы, что приводит к неудачной инъекции и неудачной инфекции. После процедуры, образцы мозга могут быть собраны для патологического повреждения, инфильтрации иммунных клеток, и вирусный анализ репликации гематоксилин и эозин окрашивания потока цитометрии, и образование бляшек анализ, соответственно. Наша иммунокомпетентная модель мурина обеспечивает платформу для изучения патогенных механизмов инфицирования вирусом денге, для разработки вакцин против вируса денге или препаратов против вируса денге.
Вирус денге является патогеном уровня биобезопасности 2, и, как таковой, все эксперименты с этим вирусом должны быть завершены в квалифицированной лаборатории биобезопасности животных уровня 2.
