Beyinde dang virüsü enfeksiyonu gördüğünüz bir hastalık modelinin bu protokolü nöropatogenez ile ilişkili viral ve konak vektörleri taranması için bir in vivo platform haline gelir. Önceki modellerin aksine, bizim modeller düşük viral titre ile enfeksiyon araçları kullanmak, ensefalik benzeri hastalık üreme indüksiyon için immünobeceriksiz Kanser Araştırma Enstitüsü emzirme fareler enfekte etmek. Prosedürü gösteren Ting-Jing Shen, benim laboratuvarımdan doktora adayı olacak.
Enfeksiyon prosedürünü başlatmadan önce, adapte olmayan dang virüsü iki stokseyreltmek, bir kez 10 beşinci plak oluşturan birimleri rpmi 1640 orta konsantrasyon40 mikrolitre başına. Sonra, seyreltilmiş virüs 10 mikrolitre ile 30 gauge iğne ile donatılmış bir 0.3 mililitre şırınga yükleyin. Ve bir 0.3 mililitrelik şırınga 30 ölçü iğnesi ile donatılmış, hayvan başına 30 mikrolitre virüs.
Virüsün interserebral teslimi için, yavaşça eğilimli bir pozisyonda yedi günlük emzirme Kanser Araştırma Enstitüsü fare dizginlemek ve lambda alana seyreltilmiş virüsün 10 mikrolitre hacmi enjekte başparmak ve işaret parmağı arasında oracle basın, sagittal ve lambdoid sütür kesiştiği. Intercerebral enjeksiyonsonra, bir supine pozisyonda fare tutmak için başparmak ve işaret parmağı kullanın, ve yavaşça intraperitoneally, seyreltilmiş virüsün 30 mikrolitre hacmi enjekte, murine karın içine. Hastalığın ilerlemesini puanlama için, akut viral ensefalit benzeri hastalıkların derecesine göre, her bir aşılanmış fare günlük sıfır dan beş puan atamak ve her grupta günlük test puanları standart sapma ortalama artı ve eksi kullanarak, bir eğri tabanlı rakam olarak her gün için puanları arsa.
Sahte, orta sadece aşılanmış farelerde ölçülen vücut ağırlığı değişiklikleri ile karşılaştırıldığında, dang virüsü aşılanmış hayvanlar deneme sırasında her zaman vücut ağırlığında bir azalma sergilerler. Buna ek olarak, dang virüsü enfekte hayvanlar kambur sırt duruşları önemli bir artış göstermektedir, limbik nöbetler, limbik güçsüzlük, felç, ve ölüm sahte aşılanmış hayvanların gösterdiği belirtilere göre. Gerçekten de, dang virüsü sıçanlarda sahte aşılanmış hayvanlarda gözlenmez sağkalım oranlarında zamana bağlı bir azalma sergileyen, farelerde akut viral ensefalit benzeri hastalıkların ilerlemesini gösteren merkezi sinir sistemi içinde dang virüsü bulaşıcı bir model kurulmasını doğrulayan.
Yanlış bölgede delinme, skor ve virüs çözeltisinin kafa dışında taşması sonucu iğne tıkanmasına neden olabilir, bu da başarısız enjeksiyon ve başarısız bir enfeksiyona neden olabilir. İşlemden sonra, beyin örnekleri patolojik hasar, immün hücre infiltrasyonu ve viral replikasyon analizi için hematoksilin ve eozin boyama akış sitometrisi ve plak oluşumu tahlilleri için hasat edilebilir. Bizim immünobeceriksiz murine modeli, dang virüsü enfeksiyonu patojenik mekanizmaları keşfetmek için bir platform sağlar, dang virüsü aşıları gelişimi için, veya anti-dang virüsü ilaçları.
Dang virüsü bir biyogüvenlik düzeyi iki patojen, ve, bu nedenle, bu virüs ile tüm deney nitelikli bir hayvan biyogüvenlik düzeyi iki laboratuvarda tamamlanmalıdır.
