מודל זה של סרטן רירית הרחם VX2 עם גרורות בלוטות הלימפה retroperitoneal ניתן להשתמש כדי ללמוד טכנולוגיה לניתוח מונחה תמונה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא אמינה, פשוטה, והיא יוצרת התפשטות גרורתית עקבית, המחקה את הדפוס של סרטן רירית הרחם האנושית. בסך הכל, זוהי טכניקה פשוטה.
עם זאת, תרגול הת תפר לפני הניסיון ליצור את המודל יעזור להפוך את התהליך קל יותר. הדגמה חזותית של טכניקה זו חשובה, בכך שהיא מסייעת להדגים את הצעדים הכירורגיים המעורבים בהקמת מודל. הדגמת ההליך עם הארלי צ'אן ואני אהיה לילי דינג, טכנאית מהמעבדה שלנו.
כדי להכין בתאי VX2 מופצים במבחנה להזרקה, התחל על ידי חימום בקבוקונים קפואים של תאי VX2 ב חרוז 37 מעלות צלזיוס או אמבט מים למשך דקה אחת. כאשר התאים הפשיר, למשוך את מתלי התא בצינור 15 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של מדיום תרבות. מסיסים את התאים בצנטריפוגה.
תן את הכדור לתשעה מיליליטר של מדיום. מעבירים את התאים לבקבוק תרבות גדול לצורך דגירה ב-37 מעלות צלזיוס מבלי לרעוד, בודקים את התאים מדי יום לצורך התבלבלות באמצעות מיקרוסקופיה קלה. כאשר התאים הגיעו 80%confluency, להוסיף שלושה מיליליטר של 0.2% טריפסין לבקבוק ולהחזיר את התאים לאנקובטור תרבות התא במשך חמש דקות.
כאשר התאים התנתקו, להעביר את ההשעיה התא צינור חרוט כדי לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה. לשטוף את גלולת התא שלוש פעמים עם תשעה מיליליטר של PBS טרי לכל לשטוף. לאחר הכביסה האחרונה, להשתמש מחדש את התאים PBS טרי לספירה לפני דילול ארבע פעמים 10 לשבעה תאים VX2 למיליליטר של ריכוז PBS בצינור חרוט חדש על קרח.
כדי להכין בתאי VX2 מופץ vivo להזרקה, להפשיר קפוא אחד על ידי אחד סנטימטר VX2 בלוקים הגידול ולהשתמש אזמל כדי לטחון את דגימות הרקמה בצלחת תרבות. מעבירים את שברי הרקמה למסנן של 70 מיקרומטר ומוסיפים אליקוטים קטנים של עד מיליליטר מתווי המלח המאוזנים של האנק, או HBSS, כדי להבטיח שכל התאים יועברו דרך המסננת. לאחר מכן לספור את התאים לפני דילול ההשעיה התא ל 1 פעמים 10 לשבעה תאים VX2 למיליליטר של ריכוז HBSS בצינור סטרילי על קרח.
לאחר שאישרו חוסר תגובה לגירוי, מניחים את הארנבת הניו זילנדית הלבנה שהומתה בתצב הגב על שולחן הניתוחים. גזור את השיער מעל האגן והבטן, ולהשתמש שלושה שלבים כירורגית העור הכנה כדי לנקות את העור החשוף. חובש כובע כירורגי ומסכת פנים, לשפשף את הידיים עם חיטוי לפני לשים על שמלה סטרילית וכפפות כירורגיות סטריליות.
ציון דרך החלק העליון של עצם הערווה לעטוף את השדה הכירורגי עם וילונות לפרוטומיה, משאיר אזור חמישה על חמישה סנטימטרים של הבטן התחתונה חשוף. לאחר מכן, השתמש בלהב אזמל מספר 11 כדי להפוך חתך של 2.5 ס"מ לגולגולת בסנטימטר אחד לפאניס הסימפיזה דרך העור והרקמות התת עוריות. חסון את fascia rectus ול לנתח את שרירי rectus באופן מאוחר יותר כדי לחשוף את צפק הבסיסית.
אשר כי פני השטח ברור של המעי או איברי בטן אחרים. הזן בחדות את peritoneum כדי לזהות את שלפוחית השתן ולטאטא אצבע כפפה מעולה, אחורי, ומאוחר יותר מעל לשיא של שלפוחית השתן כדי לאתר את קרני הרחם. מוציאים את קרני הרחם דרך חתך הבטן כדי לנוח על דופן הבטן.
השתמש תפר 3-0 קלוע לספיגה לבצע רצועות תפר יחיד של כל קרן הרחם, כ 1.5 עד שני סנטימטרים distal אל צוואר הרחם ופשוט מתווך לעורקי הרחם. ואז לקשור את התפרים בנוחות כדי לכלול את קרני הרחם דיסטלי. כדי לחסן את מיומטריום עם ההשעיה התא VX2 שהוכן בעבר, לטעון מזרק אחד מיליליטר מצויד מחט 27-מד עם מיליליטר אחד של תאים.
לאט להזריק 0.5 מיליליטר של ההשעיה התא במשך דקה אחת לתוך כל קרן הרחם proximal לאתר התפר בין התפר ואת צוואר הרחם. לאחר מכן להחיל לחץ על אתר הזרקת myometrial במשך 30 שניות כדי למזער את דליפת התא. בדוק את אתרי ההזרקה והתפר לתקציר לפני הצבת קרני הרחם בחזרה לתוך הבטן.
לסגירת דופן הבטן העמוקה, זהה את פספוס החתך הצידון ולהשתמש מלחציים כירורגיים כדי לתפוס את שריר רקטוס צפק fascia. לעגן את התפר על ידי הצבת תפר פוליפילמנט 3-0 נספג, שטחי עמוק על חצי שעה של החתך, ועמוק לשטחי על השני. באמצעות התפר המצורף, להפוך את תפרים פועל בניצב החתך דרך השכבות של דופן הבטן, עובד צעד חכם לאורך החתך מצד לצד לפני קשירת התפר וחיתוך הקצוות הרופפים.
לסגירת דופן בטן שטחית, השתמש בתפר פוליפילמנט תת-עורי קבור 3-0 לספיגה כדי לתפור עמוק לשטחי בצד אחד של החתך ושטחי לעומק בצד השני. לאחר קשירת התפרים, השתמש בתפרים המעוגנים כדי לבצע תפרים רצים בשכבה העורית במקביל החתך, עובד צעד חכם לאורך החתך מצד לצד. לקשור את התפרים ולהסיר את הקצוות הרופפים.
יש למרוח דבק כירורגי על החתך הסגור כדי לפייס את קצוות העור. לאחר מכן, מניחים את החיה על שמיכה חמה עם חמצן ומעקב, עד שהחיה ערנית ומצליחה לשבת באופן עצמאי. בעת הקמת מודל זה, מנה של פעמיים 10 לשבעת התאים לכל קרן הרחם הצליחה בארבעה ארנבים, בזמן ממוצע של 45 ימים מחיסון לניסוי ולכן נקבעה כמינון ההזרקה האופטימלי עבור מודל VX2 התרבותי.
עבור מודל VX2 המופצת ב-Vivo, שנוצר בהצלחה ב-16 ארנבים עם זמן ממוצע מחיסון לניסוי של 29 ימים, חמש כפול 10 לשש התאים לכל קרן רחם נקבע כמינון ההזרקה האופטימלי. כל הדגמים הביאו לשינוי גרורתי מוצלח של בלוטות הלימפה retroperitoneal. כמו כן, גידולים ובלוטות לימפה גרורתיות מתאים VX2 מתורבתים נראו דומים לגידולים של תאי VX2 המופצים ב- vivo על ידי ניתוח היסטולוגי, עם תאים מוכתמים בצפיפות נצפו בשריר הפולש ויוצרים מבנים דמויי בלוטות עם דמויות מיטוטיות פתולוגיות רבות.
מניחים את התפר המדיאלי לעורק הרחם כדי למנוע דימום מנקב כלי ולדאוג לחדור את התאים לתוך מיומטריום ולא חלל רירית הרחם. יש לדאוג להשתמש בטכניקה סטרילית נכונה במהלך יצירת המודל כדי למנוע זיהום שלאחר הניתוח כדי להגן על עצמך עם חומר בריום במהלך הניתוח.
