פרוטוקול זה הוא אחת ההדגמות הראשונות של היישום הישיר של רעש חשמלי לנוירונים בודדים בפרוסות רקמות. על מנת לבחון תגובות עצביות לגירויים חשמליים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא, כי אנחנו מסוגלים להעריך קבוצה מסוימת של פרמטרים גירוי על נוירונים בודדים.
טכניקה זו מאפשרת אופטימיזציה של פרמטרי גירוי כדי למקד סוגים מסוימים, עצביים פונקציונליים. יש לכך השלכות על פיתוח טיפולים טובים יותר עבור חוסר מתפקד איזון. לפני תחילת מיצוי גזע המוח, Equilibry s-ACSF עם CARPOGEN ו לקרר את הפתרון במינוס 80 מעלות צלזיוס במשך 25 דקות עד תרחיף קרח נוצר.
לאחר שהתמיסה התקררה, השתמשו בסכין גילוח מעוגל מספר 22 כדי לבצע חתך עור קשתי בגולגולת של עכבר שחור C-57 בן שלושה עד חמישה שבועות ולהשתמש בקצה המחודד של זוג מספריים סטנדרטיים כדי לבצע חתך קטן, החל מהלמבדה, לאורך התפר הסגיטלי. באמצעות זוג עיקול רדוד פירסון פון Jours, בזהירות לשקף את עצמות קוקודית exoccipital מתוקן, וריחוף את המוח בקרח קר s-ACSF. לאחר מכן, לבודד את המוח נובע המוח מן המוח הקדום ואת עטוף בוני שלה באמצעות מספר 11 סכין גילוח ישר כדי לחתוך את גופרית exoccipital קוטלית ועל negula caudal.
הר את הגחון גזע המוח מבודד למטה על בלוק פוליסטירן טרפזי לחתוך באופן סוטה, ולהשתמש בפיסת נייר טישו כדי להסיר כל נוזל עודף מסביב לרקמה נותח. השתמש בדבק cyanoacrylate כדי לתקן את בלוק פוליסטירן לשלב החיתוך עם rostral גזע המוח המצורפת למטה. השתמש במהירות מתקדמת של 0.16 מילימטרים לשנייה משרעת רטט של שלושה מילימטרים כדי להשיג 200 פרוסות רוחב מיקרומטר של MVN.
לאחר מכן השתמש פיפטה קצוצה פלסטיק להעביר את פרוסות הרקמה על דיסק נייר מסנן incarbinginated ACSF ב 25 מעלות צלזיוס לפחות 30 דקות. עבור אלקטרופיזיולוגיה של מהדק תא שלם, תחילה למשוך פיפטים מיקרו עם התנגדות סופית כי י לנוע בין שלושה עד חמישה מגה אום כאשר מלא בתמיסה פנימית מבוססת אשלגן והניח באמבטיה. כדי להשיג הקלטות מהדק טלאי שלם מתאי עצב בודדים ב- MVN, העבר פרוסת רקמה אחת מתא הדגירה לתא ההקלטה של הגדרה אלקטרופיזיולוגית סטנדרטית, ולהשתמש בחוט ניילון על משקל בצורת U כדי לאבטח את הפרוסה.
יש לבלבל ללא הרף את תא ההקלטה ב-ACSF מוגז ב-25 מעלות צלזיוס בקצב זרימה של שלושה מיליליטר לדקה ולמלא מיקרו פיפטה בת פתרון פנימי. החל כמות קטנה של לחץ חיובי באמצעות פיפטה כדי לדחוף פסולת מן קצה פיפטה. באמצעות מטרה בה הספק נמוך יותר, לאתר את MVN לפני המעבר כוח גבוה כדי לאתר נוירונים בודדים בתוך MVN.
לפני פריצת הרקמה עם פיפטה, להחיל כמות קטנה של לחץ חיובי כדי לדחוף פסולת מן קצה פיפטה, ולהשתמש מניפולטור מיקרו כדי להזיז את פיפטה לכיוון הנוירון שנבחר. גומה קטנה אמורה להיווצר על הממברנה העצבית. לשחרר את הלחץ החיובי, ולהחיל כמות קטנה של לחץ שלילי.
לאחר שהושג חותם ג'יגה אום אחד, יש להפעיל לחץ שלילי עדין קצר וחד על מחזיק הפיפסה דרך יציאת היניקה כדי לקרוע את הממברנה וליצור תצורה של תא שלם. לאחר מכן השג הקלטות מהדק נוכחיות של תא שלם בהתאם לפרוטוקולים סטנדרטיים. כדי להחיל רעש סטוכסטי וסינוסואידי על נוירונים בודדים של גרעין שיוויץ המדיאלי, הגדר את טווח משרעת משלושה עד 24 אמפר פיקו כדי לקבוע את הסף העצבי ואת שיעור הירי ולקבץ את התמריצים הגבוהים והתחתונים יותר כדי לקבוע את סף החושים.
לאחר מכן, לחשב את שיעור הירי הממוצע על פני 10 התקופה השנייה, שבמהלכה הצעד הנוכחי depolarizing יוזרק עבור כל רמה נוכחית בודדת. השתמש בערכי קצב הירי הממוצעים כדי ליצור קצב ירי לעומת ההתוויה הנוכחית. לאחר מכן לבצע ניתוח רגרסיה ליניארית כדי לקבוע את שיפוע הקו של התאמה הטובה ביותר כדי לקבוע את הרווח העצבי.
לא רעש סינוזואידי ולא סטוכסטי משנה את שיעורי ירי הבזיליקום של נוירוני MVN בהשוואה לשליטה ללא הקלטות רעש. בניסוי זה, רמת הרעש שנבחרה של 6 אמפי פיקו היא תת סף, כפי שניתן לראות כי קצב הירי הממוצע מתחיל לעלות מסף הניסוי של 12 אמפי פיקו. סף זה נקבע באופן אובייקטיבי על ידי קיבוץ רמות הגירוי מעל ומתחת לסף הניסיוני.
הרווח העצבי הוערך על ידי חשוף את הנוירונים לחבילה של צעדים נוכחיים depolarizing מאפס עד 50 אמפוליוס ב 10 מרווחי פיקו אמפולציה עם ובלי רעש. אכן, רעש סינוסואידי סטוכסטי מיושם משרעת תת סף של שישה אמפיקו אמפיק יכול לשנות את הרווח של נוירונים MVN. הפרמטרים גירוי הוקמה ניתן להחיל על העצב לחדש את הנוירונים בודדים כדי לספק גירויים נטורליסטיים יותר.
