يسمح هذا البروتوكول بدراسة سرطان البنكرياس في موقع الأنسجة الأصلية ، مع تقليل الالتهاب أثناء حقن الخلايا السرطانية ويوفر طريقة عالية الإنتاجية لتوليد أفواج كبيرة من الفئران. باستخدام التوجيه بالموجات فوق الصوتية، يتم القضاء على الحاجة إلى جراحة البطن. في أيدينا، UG-OTIM لديه معدل أقل بكثير من بذر الجدار البريتوني مقارنة بزرع العظام التقليدية.
UG-OTIM تنتج الأورام التي تُكَتَلِب السمات النسيجية والمناعةية التي تتميز بها البيئة الدقيقة للورم البنكرياسي، وبالتالي يمكن استخدامها للتحقيق في تركيبات علاجية جديدة في بيئة ذات صلة سريرياً. قمنا بتطوير هذا البروتوكول لعلاج الأورام المناعية وعلاجات بيولوجيا السرطان ، ولكن يمكن استخدامه في مجالات بحثية أخرى ، بما في ذلك التحقيقات في وظائف البنكرياس العادية أو حالات المرض مثل مرض السكري. التصوير بالموجات فوق الصوتية في الوقت الحقيقي من إدخال إبرة والحقن هو جزء لا يتجزأ من هذه الطريقة.
لذلك مظاهرة بصرية من هذه الخطوة أمر بالغ الأهمية لتقنية السليم. قبل أن تبدأ العملية, نعلق خط خلية الدكتولية غدي البنكرياس من مصلحة في حجم مناسب من العقيمة, برنامج تلفزيوني الباردة على الجليد. وضع أقفاص على درجة حرارة درجة حرارة 37، وتنظيف شامل مجلس الوزراء السلامة البيولوجية، وغرفة التعريفي ومرحلة الموجات فوق الصوتية مع التعقيم المناسب.
تعيين وظيفة الاحترار من مرحلة الموجات فوق الصوتية إلى 37 درجة مئوية وبعد تحريض التخدير، وتطبيق مرهم على عيون الحيوان الأول. ضع الفأرة في إعادة شغل الظهر على مرحلة الموجات فوق الصوتية، وقوم بتأمين الأطراف العلوية والسفلية إلى المسرح بشريط. استخدام مطبّق تلميح القطن العقيمة لتطبيق طبقة سخية من كريم إزالة الشعر إلى الربع الأيسر العلوي من البطن على منطقة الطحال إلى خط الوسط.
بعد دقيقة واحدة، استخدم وسادة شاش جاف لإزالة الشعر بلطف قبل إزالة كريم إزالة الشعر الزائد مع شاش رطب المالحة. ثم ضع الماوس في واحدة من الأقفاص الجديدة النظيفة على أكثر دفئا. لزرع الخلايا الورمية الموجهة بالموجات فوق الصوتية، قم بضبط منصة الموجات فوق الصوتية بحيث يكون السطح موازياً للأرضية، والوقوف إلى الجانب الأيسر من الحيوان مع رأس الفأرة مواجه إلى اليمين.
ضبط موقف محول بحيث يتم الحصول على صورة البطن عرضية، وتأمين أطراف الماوس إلى منصة مع الشريط. خفض بلطف محول للاتصال بالبطن الماوس وضبط محول حتى البنكرياس مرئية واضحة. تحديد موقع الكلى اليسرى والطحال لتوفير توجه دقيق في تجويف البطن.
عندما تم تحديد موقع الحقن، تحميل 29 غيج 1/2 حقنة الأنسولين بوصة مع 25 ميكرو لتر من تعليق خلية الورم، ومسح طرف إبرة مع وسادة إعداد الكحول العقيمة. استخدام ملقط حافة حادة لفهم جلد الماوس والجدار البريتوني لزيادة التوتر في موقع الحقن. عقد الحقنة في زاوية 25 إلى 45 درجة تقريبا إلى سطح منصة الموجات فوق الصوتية، تقدم ببطء الإبرة من خلال الجلد والجدار البريتوني.
تأكد من أن الإبرة قد ثقبت من خلال الجدار البريتوني قبل استخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية لتوجيه الإبرة مباشرة إلى البنكرياس. عندما تكون الإبرة في مكانها، قم بضخ الخلايا السرطانية ببطء. تشكيل بولوس السائل داخل البنكرياس سوف يكون واضحا في البنكرياس حقن بشكل صحيح عن طريق الموجات فوق الصوتية.
مرة واحدة وقد تم حقن كامل حجم التعليق، ويمكن ملاحظة بولية السوائل عن طريق الموجات فوق الصوتية، وعقد الحقنة جدا لا يزال لعدة ثوان قبل سحب ببطء الإبرة من بطن الماوس، مع الحرص على عدم إزعاج الخلايا المحقونة. ثم ضع الفأر في قفص جديد ونظيف على أكثر دفئا مع مراقبة حتى الشفاء الكامل. وضع إبرة السليم في البنكرياس, بما في ذلك عمق إبرة وزاوية خطوة حاسمة في هذا البروتوكول.
التصور من البول السائل يساعد على تأكيد حقن الورم ناجحة. السيطرة على عمق الحقن هو الجانب الأكثر صعوبة. نصيحتي هي الممارسة مع حقن تريبامبو وتأكيد بولوس السوائل عن طريق كل من الموجات فوق الصوتية و necropsy.
رصد زرع الورم ومعدل النمو عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية الأسبوعية يكشف الأورام التي يتم احتواؤها داخل حدود البنكرياس طوال الفترة التجريبية بأكملها. حقن ورم تتر عالية يؤدي إلى نسبة أعلى من الحيوانات تحمل الورم بعد ثلاثة أسابيع من الحقن مقارنة مع مجموعة تيتر منخفضة. على الرغم من التأخير في بداية الورم, معدل نمو الورم عموما لا يختلف كثيرا بين الجرعات اثنين.
وبالمثل، في حين أن معدل البقاء على قيد الحياة بين الفوجين لا يختلف اختلافا كبيرا، فإنها تميل إلى الاتجاه نحو تحسين طفيف البقاء على قيد الحياة في مجموعة تيتر منخفضة. كما تنتج مجموعة تيتر عالية نسبة أكبر من الفئران مع الأورام التي هي غير قابلة للانتهاز في الدراسات ما قبل السريرية، من قبل أربعة أسابيع بعد الحقن. عند التضحية ، فإن التشريح الإجمالي لأورام نموذج زرع ورم العظام الموجه بالموجات فوق الصوتية مشابه للأورام التلقائية لفيلق حماية البترول وتحليلها يوضح وجود نمط من الهياكل القناةية غير الطبيعية التي تشبه في كلا النموذجين ، وتلخص مورفولوجيا المرض البشري.
في كلا النموذجين ، يتم اختراق الأورام بشكل سيئ من قبل الخلايا التائية ، ولكنها مخترقة للغاية بواسطة الضامة. تذكر أن تمسك بالمحاقن بزاوية مناسبة للسماح بدخول سلس إلى البنكرياس، وأن تتأكد من أن الإبرة في البنكرياس قبل المضي في الحقن. يمكن رصد نمو الورم ويمكن حصاد الأورام للتحليل عن طريق استئصال الخلايا أو الكيمياء المناعية لتحديد تأثير التدخل.
