פרוטוקול זה יכול לעזור לשמור על יציבות המטען, אשר יכול להיות גם מולקולות קטנות וחלבונים, באמצעות פוליבובל, אשר בתורו יכול להפחית את אינטראקציות הפחמן עם הממס. טכניקה חדשנית זו יכולה לשמש כדי לשפר את כיסוי החיסון במדינות המתפתחות כמו פונקציות החיסון יכול לעתים קרובות להיות בסכנה בשל מתקני תחבורה ואחסון יעילים. כדי להמציא את הפוליבוטים, השתמש תחילה בפיפטת העברה של מיליליטר כדי להוסיף 800 מיקרוליטרים של 10%CMC לבקבוקון זכוכית 0.92 מיליליטר.
לסנתז PCLTA, לערבב 1, 000 גרם למיליליטר של 14 קילודלטון PCL ב 200 microliters של DCM. כדי לסנתז PLGADA, לערבב 1, 000 גרם למיליליטר של חמישה קילודלטון PLGADA לתוך 200 microliters של כלורופורם. מערבבים פוטואיניטטור עם תערובת פולימר של עניין ביחס 0.005 ל 1 ולהעמיס 200 microliters של הפתרון וכתוצאה מכך לתוך מזרק זכוכית מיליליטר אחד רכוב על משאבת מזרק מחובר צינור נירוסטה מחלק עם קוטר פנימי של 0.016 אינץ '.
באמצעות מנוע מיקרו כדי לשלוט בתנועה קדימה ואחורה של צינור הפולימר, להזריק את הפולימר לתוך 10% CMC בבקבוקון הזכוכית כדי ליצור את הפוליבלים ולרפא את הפוליבלים תחת אור אולטרה סגול באורך גל של 254 ננומטר במשך 60 שניות בשני וואט לס"מ מרובע, ואז פלאש להקפיא את הפוליבוטים בחנקן נוזלי במשך 30 שניות ו lyophilize את המובילים לילה ב 0.01 מיליבר ואקום במינוס 85 מעלות צלזיוס. כדי לרכז את המטען של עניין בתוך פוליבול, לערבב את המטען עם 5%CMC בסובב לילה כדי להגדיל את צמיגות המטען לפני הזרקת ידנית שני microliters של תערובת המטען לתוך הפוליבול. כאשר כל המטען הוזרק, לרפא מחדש, להקפיא פלאש, ו lyophilize פוליבובל מוזרק כפי שהוכח רק.
למחרת בבוקר, להשתמש במטליות כדי להפריד את הפוליבובל מן CMC מיובש לשטוף את הפוליבובל עם מים deionized כדי להסיר כל CMC שיורית. לאחר מכן חותכים את הפוליבובל לשניים ומדמיין את החצאים על ידי מיקרוסקופיה קונפוקלית כדי להבטיח שהמטען מרוכז. לשחרור מטען מולקולה קטנה, הדגירה את הפוליבובלים עם acriflavine ממורכז ב 400 microliters של PBS ב 37 מעלות צלזיוס עבור אורך הדגירה המתאים.
בכל נקודת זמן ניסיונית, לאסוף את supernatant ולהוסיף 400 microliters של PBS טרי לבקבוקון. לאחר מכן השתמש בקורא לוחות כדי לכמת את עוצמת הפלואורסצנטיות של העל-טבעי שנאסף. להפעלה כמעט אינפרא אדום, מערבבים את פתרון הפולימר עם מוטות ננו זהב הידרופוביים ביחס של 1 עד 9 ומוסיפים יוזם תמונות ביחס של 0.005 ל- 1.
להזריק את התערובת וכתוצאה מכך לתוך בקבוקון זכוכית 0.92 מיליליטר המכיל 800 microliters של 10%CMC לרפא את הפוליבובלים תחת אור אולטרה סגול כפי שהוכח. לאחר הקפאה הבזק lyophilization כפי שהוכח, לשטוף את הפוליבובלים עם מים deionized ולהדגיר את המובילים ב 400 microliters של PBS ב 37 מעלות צלזיוס לתקופת הדגירה המתאימה. בסוף הדגירה, לקבל תמונת אינפרא אדום במבט קדימה של פוליבול לפני ואחרי הפעלת פוליבולים עם לייזר 801 ננומטר ליד אינפרא אדום בשמונה אמפר במשך חמש דקות שלוש פעמים בשבוע במשך ארבעה שבועות עבור פוליבולים PLGADA ו 14 שבועות עבור פוליבולים PCL-PCLTA.
בכל נקודת זמן ניסיונית, לאסוף את supernatant ולהוסיף 400 microliters של PBS טרי לבקבוקון. לאחר מכן לחשב את הבדלי הטמפרטורה בין פוליבלים לפני ואחרי הפעלת לייזר מבוסס על ערכי הטמפרטורה של תמונות אינפרא אדום מסתכל קדימה. התוספת של פתרון מים מבוסס CMC 10%CMC גורמת להשעיה מלאה של פוליבול לתחזוקה מוצלחת של כדוריות הפוליבול.
הזרקת מטען לתוך הפוליבובל בהעדר CMC גורמת לדליפת כתוצאה מהיעדר החזקת מטען בתוך הפוליבובל. כדי לטפל דליפה זו, צמיגות של PCLTA ניתן להגדיל באמצעות אשלגן קרבונט מבודד לאחר סוף מכסה polycaprolactone עם triacrylate ואת צמיגות המטען ניתן להגדיל על ידי ערבוב המטען עם 5%CMC. צמיגות הפוליבובלים של PLGADA מספיקה כדי להקל על מרכז המטען ואינו דורש אפנון באמצעות אשלגן קרבונט.
שים לב כי אין הבדל מובהק סטטיסטית ביעילות מחייבת של הנוגדן נצפתה לאחר ערבוב אנטיגן HIV gp120/41 עם ובלי trehalose לפני הזרקת פוליבול. שחרורי פרץ מעוכבים נצפו בפוליבלים PLGADA עם acriflavine באמצע ביום 19 עבור פוליבלים דגירה ב 37 מעלות צלזיוס וביום החמישי עבור פוליבלים דגירה ב 50 מעלות צלזיוס. בנוסף, פוליבולים PLGADA ו- PCL ו- PCLTA פוליבולים המכילים מוטות ננו זהב ניתן להפעיל בהצלחה לייזר מספר פעמים.
בעת יצירת פוליבלים, אנא לנקוט כדי להגן על reagents מפני האור וגם להשתמש בפתרונות מיד. לאחר פיתוח טכנולוגיה זו, רצינו גם לחקור את הפיכת תהליך זה לאוטומטי עד כדי במעלה ייצור הפוליבובל.
