이 프로토콜은 폴리버블을 사용하여 작은 분자와 단백질이 될 수 있는 화물 안정성을 유지하는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 용매와의 탄소 상호 작용을 감소시킬 수 있습니다. 이 새로운 기술은 비효율적인 운송 및 저장 시설로 인해 백신 기능이 종종 손상될 수 있기 때문에 개발도상국의 백신 커버리지를 개선하는 데 사용할 수 있습니다. 폴리버블을 제작하려면 먼저 밀리리터 이송 파이펫 1개를 사용하여 0.92 밀리리터 유리 바이알에 10%CMC의 800마이크로리터를 추가합니다.
PCLTA를 합성하려면 14킬로달톤 PCL의 밀리리터당 1, 000그램을 DCM 의 200 마이크로리터에 혼합하십시오. PLGADA를 합성하려면 5킬로달톤 PLGADA밀리리터당 1, 000그램을 클로로폼 200마이크로리터에 혼합합니다. 광리니티에이터와 관심 있는 폴리머 혼합물을 0.005 대 1 비율로 혼합하고 생성된 용액의 200 마이크로리터를 0.016 인치의 내직경을 가진 디스펜싱 스테인리스 스틸 튜브에 연결된 주사기 펌프에 장착된 1밀리리터 유리 주사기로 적재한다.
마이크로 모터를 사용하여 폴리머 튜브의 전방 및 후방 움직임을 제어하고, 유리 유리병의 10%CMC에 폴리머를 주입하여 폴리버블을 형성하고 254 나노미터 파장에서 60초 동안 254나노미터 파장에서 폴리버블을 치료한 다음, 30초 동안 액체 질소의 폴리버블을 동결한 후 01밀리오에서 0밀리오버를 동결한다. 폴리버블 내에서 관심있는화물의 중심을 위해, 수동으로 폴리 버블에화물 혼합물의 두 마이크로 리터를 주입하기 전에화물의 점도를 높이기 위해 하룻밤 회전에 5 %CMC와화물을 혼합. 모든 화물이 주입되었을 때, 재치료, 플래시 동결 및 주입 된 폴리 버블을 단지 입증 한 대로 lyophilize.
다음 아침, 포셉을 사용하여 폴리버블을 말린 CMC로부터 분리하고 탈온화된 물로 폴리버블을 세척하여 잔류 CMC를 제거합니다. 그런 다음 폴리버블을 반으로 자르고 공초점 현미경으로 반쪽을 이미지하여 화물이 중심이 되도록 합니다. 소분자 화물 방출의 경우, 적절한 잠복기 길이에 대해 PBS의 400 마이크로리터에서 400 마이크로리터의 폴리버블을 배양한다.
각 실험 시점에서 상체를 수집하고 바이알에 신선한 PBS의 400 마이크로 리터를 추가합니다. 그런 다음 플레이트 판독기를 사용하여 수집된 수퍼나탄의 형광 강도를 정량화합니다. 근적외선 활성화를 위해 폴리머 용액을 1 대 9 비율로 소수성 금 나노 막대와 혼합하고 0.005 대 1 비율로 사진 이니티에이를 추가하십시오.
결과 혼합물을 10%CMC의 800 마이크로리터를 함유한 0.92 밀리리터 유리 바이알에 주입하고 입증된 바와 같이 자외선 아래의 폴리버블을 치료한다. 입증된 바와 같이 플래시 동결 및 lyophilization 후, 탈이온화 된 물로 폴리 버블을 씻고 적절한 잠복기 동안 37섭씨에서 PBS의 400 마이크로 리터로 캐리어를 배양하십시오. 인큐베이션의 끝에서, PLGADA 폴리 버블에 대한 4 주 3 시간 동안 일주일에 3 시간 및 PCL-PCLTA 폴리 버블에 대한 14 주 동안 8 암페어에서 801 나노 미터 근적외선 레이저로 폴리 버블을 활성화하기 전과 후에 폴리 버블의 전방 찾고 적외선 이미지를 얻을 수 있습니다.
각 실험 시점에서 상체를 수집하고 바이알에 신선한 PBS의 400 마이크로 리터를 추가합니다. 그런 다음 레이저 활성화 전후의 다발성기 사이의 온도 차이를 전방 적외선 이미지의 온도 값에 따라 계산합니다. 10%CMC 기반 수성 용액을 첨가하면 폴리버블 구형의 성공적인 유지보수를 위한 완전한 폴리버블 서스펜션이 생성됩니다.
CMC가 없는 경우 폴리버블에 화물을 주입하면 누출이 발생하며 결과적으로 폴리버블 내에서 화물 유지가 부족합니다. 이러한 누출을 해결하기 위해, PCLTA의 점도는 삼각측량으로 폴리카폴락톤을 절제한 후 분리된 탄산칼륨을 사용하여 증가할 수 있으며 화물의 점도는 화물을 5%CMC로 혼합하여 증가시킬 수 있다. PLGADA 폴리버블의 점도는 화물의 중심을 용이하게하기에 충분하며 탄산칼륨을 통한 변조가 필요하지 않습니다.
폴리버블 주입 전에 트레할로오스와 함께 또는 없이 HIV gp120/41 항원과 혼합한 후 항체의 결합 효율에 통계적으로 유의한 차이가 관찰되지 않는다는 점에 유의한 차이가 없다. 지연 된 버스트 릴리스는 37 섭씨에서 배양 된 폴리 버블과 5 일째에 50 섭씨에서 배양 된 폴리 버블에 대해 19 일 중반에 acriflavine이있는 PLGADA 폴리 버블에서 관찰됩니다. 또한, PLGADA 폴리버블 및 PCL 및 PCLTA 폴리버블은 금 나노 막대를 함유하고 있으며 여러 번 레이저 활성화가 성공적으로 이루어질 수 있다.
폴리버블을 형성할 때는 시약을 빛으로부터 보호하고 즉시 솔루션을 사용하십시오. 이 기술을 개발한 후 이 프로세스를 자동화하여 폴리버블 생산을 확장하고자 했습니다.
