שיטה זו מייצגת חלק מפרוטוקול רבייה גדול יותר לשימור אקס סיטו המשמש לייצור המוני במעבדה של פרפרים בסיכון. הוא ממחיש כיצד ניתן להתאים שיטות בסיסיות של גיולד למחקר מדעי כדי לסייע בטיפול בפערי נתונים התנהגותיים, היסטוריה של החיים או נתונים אקולוגיים מרכזיים. השיטות הספציפיות שהוצגו להערכת זמן פיתוח הזחל ומספר stadia הזחל יש ישימות רחבה רבייה שימור פרפר אחרים או תוכניות מחקר.
טכניקה זו היא גישה יעילה לתיעוד מדדי היסטוריית החיים של פרפר בסכנת הכחדה כגון מספר כוכבי זחל, משך שלבי התפתחות וגודל כל שלבי החיים. ייעלנו את הפרוטוקול שלנו כך שניתן יהיה להגדיל את הפרודוקטיביות והיעילות במעבדה, דבר חשוב במיוחד בעת איסוף נתונים במסגרת זמן קצרה. שיטה זו דורשת דמיון ותשומת לב לפרטים הקטנים כדי למנוע נזק לאורגניזם, גם אם זחלי הפרפר קטנים מאוד במיוחד כבינונים.
הדגמת ההליך תהיה יעקב הורנפלדט, סטודנט לתואר ראשון מהמעבדה שלנו. כדי להתחיל, השתמשו במברשת צבע קטנה בצבעי גמלים כדי להזיז ולבודד בזהירות זחל אחד ולמקם אותו תחת מיקרוסקופ לנתח בצלחת פטרי. טובלים שערה אחת של עט החרק בצבע זוהר לא רעיל של צבע מנוגד לזה של הזחל, ומכניסים בזהירות טיפה אחת קטנה של צבע על גב הזחל.
אחרי 30 שניות, הצבע מתייבש. בעזרת מברשת צבע גמלים קטנה בצבעי מים, מניחים כל זחל בודד במיכל חלק פלסטיק ברור של שתי אונקיות משלו המכיל בערך 1-3 עלים קטנים של חומר מארח מסוף טרי, וכותבים מזהה ייחודי על ה ומכסה. אבטח היטב את המכסה.
בדקו בזהירות כל זחל מדי יום. עם מדפים, להסיר את העלים ולהגדיר אותם על משטח לבן. בדוק את ה ואת המכסה ברור.
בדוק את העלים תחת מיקרוסקופ ניתוח לנוכחות של exuviae זחל כמוסות ראש. כאשר נצפתה אקסוביה של זחל, מוציאים אותה מהגביע ומ מניחים אותה בבקבוקון מלא ב-0.2 מיקרוליטרים של גליצרין. סמן את החלק העליון של המכסה ואת הצד עם מספר הזחל, תאריך molt, ואת כמוסת הראש.
מניחים את exuvia הזחל ואת קפסולת הראש הקשורים במכסה חלק פלסטיק ברור, ולשים כמה טיפות של אתנול בו. שימו לב לגירוש הזחל תחת מיקרוסקופ לנתח. אם קפסולת ראש הזחל כבר מופרדת מהאקסוביה, מניחים טיפת גליצרין על קצה מדפים אנתימולוגיים מחודדים ונוגעים בעדינות בכמוסת הראש לגליצרין.
מניחים את קפסולת הראש בצינור המיקרוצנטריפוגה המשויך. אם קפסולת הראש עדיין מחוברת לגירוש הזחל, השתמש במטלפות מחודדות וסיכה לחרק כדי להפריד את קפסולת הראש מהאקסוביה של הזחל. ברגע שהוא מופרד להשתמש בטכניקת גליצרין להרים את קפסולת הראש.
לאחר כל מולה, צבעו מחדש את הזחלים והקליטו את תאריכי התיל. בכל יום, השתמש calipers דיגיטלי כדי למדוד את אורך הגוף הכולל מהראש אל קטע הבטן האחרון של כל זחל. קח שלוש מדידות והקליט את הממוצע של השלושה יחד עם התאריך והשעה.
בדוק את הפלסטיק המתאימה כדי לוודא שאין עובש. הסר את כל frass ופסולת מארח ישנה ולהוסיף חומר מארח טרי לפי הצורך. תחזיר את הזחל לגביע.
שמור על כוסות תחת טמפרטורת מעבדה בין 27 ל 32 מעלות צלזיוס עבור פעילות זחל אופטימלית ופיתוח. שמור על המצב עד שכל הזחלים יגיעו לכוכב הסופי שלהם ויתחילו את שלב ההכנה. כאשר הזחלים מפסיקים להאכיל, הופכים צבע ירקרק-חום עמום אחיד, מאבדים את השברונים שלהם, ולעתים קרובות משוטטים מהמארח, מניחים פיסת נייר גלית קטנה בפח.
לאחר שכל זחל יש גור מלא למדוד את אורכו הכולל ולתרשם את תאריך הגור. זהו ההתכה האחרונה של כל אדם. בדוק את הגלם מדי יום.
כאשר הם גדלו לפרפרים, השתמש במטחנים כדי להחזיק את הפרפר הבוגר ולפוצץ בעדינות על הכנפיים כדי לחשוף את צבע פני השטח של הכנף העליונה. נראה שלזכרים יש כחול בכל הכנפיים והנקבות הצטמצמו בכחול ומבט כתום על הכנף האחורית. רשום את תאריך האקלוזה ואת המין של כל פרפר בוגר שנוצר.
כדי למדוד את אורך אקורד הכנף של כל פרפר בעדינות להחזיק את הפרפר עם מדפים ולהשתמש calipers דיגיטלי. במקרה הפרפר הוא פעיל מדי כדי להימדד למקם אותו במקרר במשך 30 שניות או פחות ולנסות שוב. פרוטוקול זה אפשר מחקר מכוון ואיסוף נתונים נרחב על פערי נתונים מרכזיים רבים החשובים לשיפור שיטות הרבייה וההתרבות הטובות ביותר במעבדה.
הנה ארבע קפסולות הראש שנאספו עבור אדם אחד. לרוב הזחלים היו ארבעה מולים עם כל שלב חיים לא בוגר פחות מחמישה ימים. נקבות התפתחו בדרך כלל מהר יותר בכל שלבי ההמה בהשוואה לזכרים.
למרות שזה לא היה השפעה משמעותית עם ערך p ב 0.625. צעד זה הוא מאוד מוקפד במיוחד כאשר הזחלים הם יילמונים בקע טרי. חשוב לזכור להשתמש במיקרוסקופ במהלך שלב זה כדי לוודא שהצבע מוחל על המקום המתאים על גב הזחל.
ניתן להרחיב שיטות אלה כדי לסייע בהערכת שיעורי ההישרדות בשלב ההתפתחותי, ביצועים דיפרנציאליים על מארחי זחל מרובים, כמו גם לסייע לחוקרים לפרש טוב יותר נתונים מהשטח. שיטה פשוטה זו ממחישה כיצד עם תכנון קטן שיטות בסיסיות של אורגניזם ניתן להתאים בקלות למחקר מדעי. לאחר מכן ניתן להשתמש בתוצאות כדי לסייע ליידע, ואולי להסתגל, שיטות ex situ כדי לשפר את ההצלחה.
