פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים לבחון את ההשפעות של מתח כרוני על תגובה מאמץ בעכברים זכריים ונבחנים. היתרון של טכניקה זו הוא שעכברים זכריים ונשרים יכולים בו זמנית לעבור פרדיגמת תבוסה חברתית כרונית מאומתת המאפשרת להשוות ישירות התנהגויות תגמול. מבחינה היסטורית, מחקר פרה-קליני להפרעות במצב הרוח השתמש במשימות התנהגותיות הכרוכות בהימנעות בסביבות מאיימות.
עם זאת, משימות תגמול ומוטיבציה, כגון בחירה הקשורה למאמץ, עשויות להציע רלוונטיות תרגום רבה יותר. כדי להכין את פתרון הרכב, להמיס 3.375 גרם של בטא ציקלודקסטרין ב 750 מיליליטר של מי ברז במיכל זכוכית העליון בורג ליטר אחד. כדי להכין את פתרון קורטיקוסטרון, להמיס 3.375 גרם של בטא ציקלודקסטרין ב 750 מיליליטר של מי ברז, ואחריו תוספת של 26.25 מיליגרם של קורטיקוסטרון.
ממיסים את הקורטיקוסטרון בתמיסה באמבט מים נקי קולי במשך כ -30 דקות ב 40 קילוהרץ עד הנוזל מדגים מראה ברור, ולאחר מכן למלא את בקבוקי המים של הרכב ואת קבוצת העכבר קורטיקוסטרון עם הפתרונות המתאימים להקליט את נפח הנוזל הנצרך פעמיים בשבוע. כדי להתרגל לעכברים למבוך ה-Y, יום לאחר מחסור במזון, מניחים מספר גדול של כדורי מזון מבוססי דגנים 20 מיליגרם בכובעים של שני צינורות צנטריפוגה 50 מיליליטר ולמקום כובע אחד בקצה כל זרוע של מבוך Y, ולאחר מכן למקם עכבר בתיבת ההתחלה של מבוך Y עם מחיצת תיבת ההתחלה במקום במשך כמה שניות לפני הסרת המפריד ומאפשר לעכבר לחקור את Y-מבוך עבור 15 דקות. לאחר יומיים של מגורים Y-מבוך, מקום כדורי בכובע עבור זרוע תגמול גבוה וממקם שני כדורי בכובע לזרוע תגמול נמוך.
עבור ניסיון בחירה כפוי תגמול גבוה, לחסום את הגישה לזרוע תגמול נמוך למקם את העכבר בתיבת ההתחלה במשך כמה שניות לפני הסרת המפריד, המאפשר לעכבר 60 שניות להיכנס לזרוע תגמול גבוה לצרוך את כדורי זמין. עבור משפט בחירה כפוי פרס נמוך, לחסום את הגישה לזרוע הפרס הגבוה. לאימון בחירה חופשית, התחילו כל מפגש עם ניסוי בחירה אחד גבוה ונמוך בזרוע אחת לפני השלמת 10 ניסויי בחירה חופשית.
אפשר לעכבר לבחור כל זרוע מבוך. לאחר שהעכבר נסע לקצה הזרוע לכובע כדורי, מניחים מחיצת זרוע מאחורי העכבר, נועלים את החיה עד שהיא צורכת את כדורי. שיא איזו זרוע נבחרה עבור כל 10 ניסויי בחירה חופשית מדי יום.
לאחר שעכבר בחר את זרוע התגמול הגבוהה עבור 7 מתוך 10 ניסויים ביום אימון בחירה חופשית, הנח מחסום של 10 ס"מ באמצע הזרוע הפרס הגבוהה במבוך ה- Y ובצע לפחות שני מבחני בחירה כפויים בזרוע גבוהה ונמוכה עם המחסום במקום. לאחר השלמת כל ארבעת המבחנים, מניחים את העכבר בתיבת ההתחלה ומאפשרים לעכבר לבחור זרוע עבור 10 ניסויי בחירה חופשית עם מחסום 10 ס"מ לזרוע הפרס הגבוהה במקום. למחרת, הרגל ולבדוק את העכבר כפי שהוכח, אבל להשתמש במחסום 15 ס"מ בזרוע תגמול גבוה.
למחרת, בחן את העכבר עם מחסום 20 ס"מ כפי שהוכח. לבדיקות מאמץ כרוניות של תבוסה חברתית לא מפלילה, יש ליישר את הכלובים של זכרי CD1 עם זכרים ונקבות C57BL/6J עם כלובי CD1 בחזית וכלובי C57BL/6J הסמוכים לעכברים הזכרים CD1 בחדר התבוסה החברתית. כדי להתחיל את המשפט, מקם זכר בוגר אחד ועכבר ניסיוני אחד בוגר C57BL/6J לתוך הכלוב הביתי של כל זכר תוקפן CD1 למפגש תבוסה חברתית של חמש דקות ולהקליט את השהיית ההתקפה ואת תדירות ההתקפה עבור בעלי חיים ניסיוניים זכר ונקבה כאחד.
בסוף הפגישה, להעביר את העכבר זכר C57BL/6J לתוך הכלוב של זכרי CD1 שוכנים במשותף מופרדים על ידי מחסום פלקסיגלס מחורר ברור. הפרד את העכברים התוקפים CD1 ו- C57BL/6 נקבה עם מחסום פלקסיגלס מחורר ברור דומה. למפגש בקרה, מקם עכבר נקבת בקרה אחד בכלוב הביתי של עכבר C57BL/6 זכר בקרה אחד.
לאחר חמש דקות, מניחים מחיצת פרספקס מחוררת ברורה בין בעלי החיים. בסוף הניסוי הראשון, לסובב את העכברים במשך תשעת מפגשי התבוסה הנותרים, כך שכל זוג זכר ונקבה C57BL/6 הוא סובב כלוב אחד שמאלה כדי לספק אינטראקציה חדשה עם עכברי CD1 הרומן עבור כל מפגש. קורטיקוסטרון כרוני ועכברי לחץ כרוניים ללא אפליה של תבוסה חברתית מפגינים משקל גוף ממוצע מופחת בהשוואה לבעלי חיים ברכב ובקרה.
עכברים אלה גם צרכו פחות מתכוון כלוב בית מעבדה אוכל. עכברים המנוהלים על ידי כלי רכב וקורטיקוסטרון צורכים כמות דומה של נוזלים במשך ארבעה שבועות של טיפול ושלושה שבועות של בדיקות התנהגות. מתח תבוסה חברתית כרונית ללא אפליה מייצר פנוטיפ לא אדפטיבי בעכברים רגישים בהשוואה לעכברים גמישים או שולטים שאינם חשופים ללחץ תבוסה חברתית כרוני שאינו מפלה ומציג ירידה בזמן שבילה באזור האינטראקציה המכיל עכבר CD1 חדשני.
הן קורטיקוסטרון כרוני והן עכברי לחץ כרוניים שאינם מפלים בתבוסה חברתית מייצרים שינוי בתגובה המאמץ כאשר גובה המחסום עולה ל -15 ו -20 ס"מ. השהיית זרוע תגמול גבוהה ונמוכה עם מחסום 15 ס"מ אינה מושפעת על ידי ממשל קורטיקוסטרון והיא דומה עבור שתי הקבוצות עם זרועות תגמול נמוכות וגבהות. חשוב לציין, אם קורטיקוסטרון כרוני או מתח תבוסה חברתית כרונית לא מפלה פוגע בלמידה של המשימה מחסום Y-maze, עכברים אלה עלולים להיכשל להגיע לקריטריון באימונים בחירה חופשית, המשפיעים על פרשנות תוצאת המחסום הבאים.
בנוסף, ניתן להשתמש במשימת האינטראקציה החברתית כדי לשכבות את העכברים לאוכלוסיות עמידות ורגישות, כמו גם על ידי מין. בעת ביצוע המשימה מחסום Y-מבוך, זה קריטי כדי להקליט הן את הזרוע שנבחרה ואת ההשהיה כדי להגיע לתגמול גלולת מזון בכל משפט בודדים. התנהגויות חשובות ורלוונטיות אחרות הקשורות לתגמול, כגון פיחות בתוצאות או יחס פרוגרסיבי, יכולות להתבצע בעקבות התבוסה החברתית הכרונית של קורטיקוסטרון או פרוטוקולי תבוסה חברתית כרוניים שאינם מפלים.
