이 프로토콜은 연구원이 남성과 여성 마우스 모두에서 노력 한 반응에 만성 스트레스의 효과를 검사 할 수 있습니다. 이 기술의 장점은 남성과 여성 마우스 모두 동시에 보상 행동을 직접 비교할 수 있도록 검증 된 만성 사회적 패배 패러다임을 겪을 수 있다는 것입니다. 역사적으로, 기분 장애에 전임상 연구는 위협 환경의 회피를 포함 하는 행동 작업을 활용 했다.
그러나 노력 관련 선택과 같은 보상 및 동기 부여 작업은 더 많은 번역 관련성을 제공할 수 있습니다. 차량 용액을 준비하려면 3.375그램의 베타 사이클로덱스트린을 1리터 스크류 상단 유리 용기에 750밀리리터의 수돗물에 녹입니다. 코르티코스테론 용액을 준비하려면 3.375 그램의 베타 사이클로덱스트린을 750 밀리리터의 수돗물에 녹여 26.25 밀리그램의 코르티코스테론을 첨가합니다.
초음파 청정 수조에서 약 30 분 동안 액체가 맑은 외관을 보여줄 때까지 코티코스테론을 용액으로 녹인 다음 차량 및 코르티코스테론 마우스 그룹의 물병을 적절한 솔루션으로 채우고 일주일에 두 번 소비되는 액체의 양을 기록하십시오. 마우스를 Y-미로로 습관화하려면, 음식 박탈 다음날, 20 밀리그램 곡물 기반 식품 펠릿의 큰 숫자를 두 개의 50 밀리리터 원심분리기 튜브의 캡에 놓고 Y-미로의 각 팔의 끝에 하나의 캡을 놓고, 시작 상자 디바이더가 있는 Y-미로의 시작 상자에 마우스를 넣고 15마우스를 제거하기 전에 마우스를 제자리에 놓고 마우스를 15마우스를 탐험할 수 있도록 합니다. 분. Y-미로 습관의 이틀 후, 높은 보상 팔에 대 한 모자에 펠 릿에 대 한 배치 하 고 낮은 보상 팔에 대 한 모자에 두 개의 펠 릿을 배치.
높은 보상 강제 선택 평가판을 위해, 낮은 보상 팔에 대한 액세스를 차단하고 칸막이를 제거하기 전에 몇 초 동안 시작 상자에 마우스를 배치, 마우스가 사용할 수있는 펠릿을 소비하는 높은 보상 팔을 입력 60 초 허용. 낮은 보상 강제 선택 재판을 위해, 높은 보상 팔에 대한 액세스를 차단합니다. 무료 선택 교육을 위해 10 개의 무료 선택 시험을 완료하기 전에 1 개의 높은 팔과 하나의 낮은 팔 강제 선택 시험으로 각 세션을 시작합니다.
마우스가 미로 암 중 하나를 선택하도록 허용합니다. 마우스가 팔끝까지 팔끝까지 이동하면 팔 칸막이를 마우스 뒤에 놓고 펠릿을 섭취할 때까지 동물에 잠급니다. 매일 10개의 무료 선택 시험에서 어떤 팔을 선택하지 않는지 기록합니다.
마우스가 무료 선택 훈련 일에 10 번의 시험 중 7 개에 대한 높은 보상 팔을 선택하면 Y-미로의 높은 보상 팔 중간에 10 센티미터 장벽을 놓고 장벽이있는 적어도 두 개의 높고 낮은 팔 강제 선택 시험을 수행하십시오. 네 번의 시험을 모두 완료한 후 마우스를 시작 상자에 배치하고 마우스가 10cm 의 장벽을 높은 보상 팔에 배치하여 10 개의 무료 선택 시험을 위해 팔을 선택할 수 있습니다. 다음 날, 습관화하고 입증 된 대로 마우스를 테스트하지만, 높은 보상 팔에 15 센티미터 장벽을 사용합니다.
다음 날, 입증 된 대로 20 센티미터 장벽으로 마우스를 테스트합니다. 만성 무차별 사회적 패배 스트레스 테스트의 경우, CD1 남성의 케이지를 C57BL/6J 남성 및 암컷과 CD1 케이지앞의 CD1 케이지, 사회 패배실에서 CD1 남성 마우스에 인접한 C57BL/6J 케이지를 정렬합니다. 재판을 시작하려면 성인 남성 1 명과 성인 여성 실험 C57BL/6J 마우스를 각 CD1 공격자 남성의 홈 케이지에 넣고 5 분 간의 사회적 패배 세션을 위해 공격 대기 시간과 남성 실험 동물 모두에 대한 공격 빈도를 기록하십시오.
세션의 끝에서, 명확한 천공 플렉시 유리 장벽에 의해 분리 공동 보관 CD1 남성의 케이지로 남성 C57BL / 6J 마우스를 전송. 공격 CD1 및 여성 C57BL/6 마우스를 유사한 명확한 천공 플렉시유리 장벽으로 분리합니다. 제어 세션의 경우, 하나의 제어 남성 C57BL/6 마우스의 홈 케이지에 하나의 컨트롤 여성 마우스를 배치합니다.
5분 후, 동물 사이에 투명한 천공 플렉시글라스 디바이더를 놓습니다. 첫 번째 실험의 끝에서, 나머지 9개의 패배 세션에 대한 마우스를 회전, 각 C57BL/6 남성과 여성 쌍은 각 세션에 대한 새로운 CD1 마우스와 새로운 상호 작용을 제공하기 위해 왼쪽으로 하나의 케이지를 회전. 만성 코르티코스테론과 만성 비차별적 사회적 패배 스트레스 마우스는 모두 차량 및 대조동물에 비해 평균 체중이 감소하는 것을 나타낸다.
이 마우스는 또한 더 적은 평균 홈 케이지 실험실 차우를 소비. 차량 및 코르티코스테론 투여 마우스는 4주 간의 치료와 3주간의 행동 테스트를 통해 유사한 양의 액체를 섭취합니다. 만성 비차별적 사회적 패배 스트레스는 만성 비차별적 사회적 패배 스트레스에 노출되지 않은 탄력성 또는 제어 마우스에 비해 취약한 마우스에 적응형 표현형을 생성하여 새로운 CD1 마우스를 포함하는 상호작용 영역에서 소요되는 시간 감소를 나타낸다.
만성 코르티코스테론과 만성 비차별적 사회적 패배 스트레스 마우스는 장벽 높이가 15 및 20cm로 증가할 때 힘차게 반응하는 변화를 일으킵니다. 15센티미터 장벽의 높고 낮은 보상 팔 대기 시간은 코티코스테론 투여의 영향을 받지 않으며 낮은 보상 팔과 높은 보상 팔을 가진 두 그룹 모두와 유사합니다. 중요한 것은, 만성 코르티코스테론 또는 만성 무차별적 사회적 패배 스트레스가 Y-미로 장벽 작업의 학습을 손상시키는 경우에, 이 마우스는 자유로운 선택 훈련 세션에서 기준에 도달하지 못할 수 있습니다, 후속 장벽 결과 해석에 영향을 미치는.
또한, 사회적 상호 작용 작업은 성교뿐만 아니라 탄력적이고 취약한 인구로 마우스를 계층화하는 데 사용할 수 있습니다. Y-미로 장벽 작업을 수행할 때 선택한 팔과 각 개별 시험에서 음식 펠릿 보상에 도달하기 위한 대기 시간을 모두 기록하는 것이 중요합니다. 결과 평가 절하 또는 진보적 비율과 같은 다른 중요하고 번역적으로 관련된 보상 관련 행동은 만성 코르티코스테론 사회적 패배 또는 만성 비차별적 사회적 패배 프로토콜에 따라 수행 될 수 있습니다.
