Este protocolo permite que os pesquisadores examinem os efeitos do estresse crônico na resposta esforçada em camundongos machos e femininos. Uma vantagem dessa técnica é que tanto camundongos machos quanto fêmeas podem sofrer simultaneamente um paradigma de derrota social crônica validado, permitindo que comportamentos de recompensa sejam diretamente comparados. Historicamente, pesquisas pré-científicas sobre transtornos de humor têm utilizado tarefas comportamentais que envolvem evitar ambientes ameaçadores.
No entanto, tarefas de recompensa e motivação, como escolha relacionada ao esforço, podem oferecer mais relevância translacional. Para preparar a solução do veículo, dissolva 3.375 gramas de betaciclonina em 750 mililitros de água da torneira em um recipiente de vidro de um litro. Para preparar a solução de corticosterona, dissolva 3.375 gramas de betacicroextrina em 750 mililitros de água da torneira, seguido pela adição de 26,25 miligramas de corticosterona.
Dissolva a corticosterona em solução em um banho de água ultrassônico de limpeza por aproximadamente 30 minutos a 40 kilohertz até que o líquido demonstre uma aparência clara, em seguida, encha as garrafas de água do veículo e o grupo de ratos corticosterona com as soluções apropriadas e registre o volume de líquido consumido duas vezes por semana. Para habituar os ratos ao labirinto Y, no dia seguinte à privação alimentar, coloque um grande número de pelotas de alimentos à base de grãos de 20 miligramas nas tampas de dois tubos de centrífugas de 50 mililitros e coloque uma tampa na extremidade de cada braço do labirinto Y, em seguida, coloque um rato na caixa inicial do labirinto Y com o divisor de caixas de partida no lugar por alguns segundos antes de remover o divisor e permitir que o mouse explore o labirinto Y por 15 Minutos. Depois de dois dias de habituação y-maze, coloque para pelotas em uma tampa para o braço de alta recompensa e coloque duas pelotas em uma tampa para o braço de baixa recompensa.
Para um teste de escolha forçada de alta recompensa, bloqueie o acesso ao braço de baixa recompensa e coloque o mouse na caixa de partida por alguns segundos antes de remover o divisor, permitindo que o mouse 60 segundos entre no braço de alta recompensa para consumir as pelotas disponíveis. Para um teste de escolha forçada de baixa recompensa, bloqueie o acesso ao braço de alta recompensa. Para treinamento de livre escolha, comece cada sessão com um teste de escolha forçada de braço baixo e alto antes de completar 10 testes de livre escolha.
Permita que o mouse selecione qualquer braço de labirinto. Uma vez que o rato tenha viajado até a extremidade do braço até a tampa das pelotas, coloque um divisor de braço atrás do mouse, travando no animal até que ele tenha consumido as pelotas. Registo qual braço é selecionado para todos os 10 testes de livre escolha diariamente.
Uma vez que um mouse tenha selecionado o braço de alta recompensa para 7 de 10 testes em um dia de treinamento de livre escolha, coloque uma barreira de 10 centímetros no meio do braço de alta recompensa no labirinto Y e realize pelo menos dois testes de escolha forçada de braço alto e baixo com a barreira no lugar. Depois de completar todos os quatro ensaios, coloque o mouse na caixa inicial e deixe o mouse selecionar um braço para 10 testes de escolha livre com a barreira de 10 centímetros para o braço de alta recompensa no lugar. No dia seguinte, habite e teste o mouse como demonstrado, mas use uma barreira de 15 centímetros no braço de alta recompensa.
No dia seguinte, teste o mouse com uma barreira de 20 centímetros como demonstrado. Para testes crônicos de estresse de derrota social não discriminatória, alinhe as gaiolas de homens CD1 com machos c57BL/6J com gaiolas CD1 na frente e gaiolas C57BL/6J adjacentes aos camundongos machos CD1 na sala de derrota social. Para iniciar o teste, coloque um macho adulto e uma fêmea adulta experimental C57BL/6J na gaiola de cada homem agressor do CD1 para uma sessão de derrota social de cinco minutos e regissou a latência de ataque e a frequência de ataque para animais experimentais masculinos e femininos.
No final da sessão, transfira o rato C57BL/6J masculino para a gaiola de machos CD1 co-alojados separados por uma clara barreira de plexiglass perfurado. Separe o CD1 atacante e os ratos C57BL/6 femininos com uma barreira de plexiglass perfurada semelhante. Para uma sessão de controle, coloque um rato feminino de controle na gaiola doméstica de um rato C57BL/6 masculino de controle.
Após cinco minutos, coloque um divisor de plexiglass perfurado claro entre os animais. No final do primeiro experimento, gire os ratos para as nove sessões restantes de derrota, de modo que cada par C57BL/6 masculino e feminino é girado uma gaiola para a esquerda para fornecer uma nova interação com novos ratos CD1 para cada sessão. Corticosterona crônica e derrota social crônica não discriminatória os camundongos apresentam um peso médio reduzido em comparação com os animais de veículo e controle.
Esses ratos também consumiram menos comida média de laboratório de gaiolas domésticas. Camundongos administrados por veículos e corticosterona consomem um volume semelhante de líquido ao longo de quatro semanas de tratamento e três semanas de testes de comportamento. O estresse de derrota social não discriminatório crônico produz um fenótipo mal-apsiativo em camundongos suscetíveis em comparação com camundongos resilientes ou de controle não expostos ao estresse crônico de derrota social não discriminatória, exibindo uma redução do tempo gasto na zona de interação contendo um novo rato CD1.
Tanto a corticosterona crônica quanto a derrota social crônica não discriminatória os ratos produzem uma mudança na resposta esforçada quando a altura da barreira aumenta para 15 e 20 centímetros. A latência do braço de alta e baixa recompensa com a barreira de 15 centímetros não é impactada pela administração da corticosterona e é semelhante para ambos os grupos com braços de baixa e alta recompensa. É importante ressaltar que, se a corticosterona crônica ou a derrota social crônica não discriminatória prejudicam o aprendizado da tarefa de barreira do labirinto Y, esses camundongos podem não atingir o critério em sessões de treinamento de livre escolha, impactando a interpretação subsequente do resultado da barreira.
Além disso, a tarefa de interação social pode ser usada para estratificar os camundongos em populações resilientes e suscetíveis, bem como por sexo. Ao conduzir a tarefa de barreira do labirinto Y, é fundamental registrar tanto o braço selecionado quanto a latência para alcançar a recompensa de pelotas de alimentos em cada teste individual. Outros comportamentos importantes e traduções totalmente relevantes relacionados à recompensa, como desvalorização de resultados ou proporção progressiva, podem ser realizados após a derrota social corticosterona crônica ou protocolos crônicos de derrota social não discriminatórios.
