ליד פוטוימונותרפיה אינפרא אדום עבור מודלים עכבר של הפצת Pleural

שיטה זו יכולה לשמש להערכת ההשפעות הטיפוליות של NIR-PIT על גידולים בבית החזה במודל גידול רלוונטי מבחינה קלינית. קל להבין ולבצע את הליכי NIR-PIT באמצעות מודל הסרטן המופצה בפלורל. כדי להגדיר מודל הפצת עכבר, השתמש קצף פוליסטירן כדי להפוך פקק, ולחטא אותו עם 70%אתנול.

חבר את המחט אל פקק עם הקצה המשתרע חמישה מילימטרים מתוך פקק. לכופף את הקצה של מחט 30-מד עם מלקחיים נקיים או נגד אובייקט קשה ניקה עם 70%אתנול, ולמלא מזרק עם פעם אחת 10 עד שישה תאים סרטניים היעד ב 100 microliters של PBS. אשר חוסר תגובה לרפלקס דוושה בעכבר עירום אתימי, 19 עד 21 גרם, שמונה עד 12 שבועות, נקבה, הומוזיגוטה, עכבר עירום אתימי.

הכנס את המחט לתוך החזה דרך החלל הבין צלע, הזזת המחט למעלה ולמטה כדי למנוע מגע עם הצלעות. כאשר הקצה עבר דרך החלל הבין-ציליוטלי, מקם את המזרק כך שהוא יילחץ על העכבר והזרק את כל נפח תאי היעד. לאחר ההזרקה, לגלגל את העכבר פעמיים עד שלוש פעמים כדי להפיץ את התאים ברחבי חלל בית החזה, ולהחזיר את העכבר לכלוב שלה עם ניטור עד התאוששות מלאה.

24 שעות לאחר הזרקת התא וכל יום לאחר מכן, להזריק עכברים תאים מרדים עם 200 microliters של 15 מיליגרם למיליליטר של D-לוציפרין. לאחר 10 דקות, מקם את העכברים בדימוי ביו-לומינציה ופתח את לוח הבקרה של הרכישה בתוכנת הדימויים. בחר זוהר, צילום ושכבת-על.

הגדר את זמן החשיפה לאוטומטי, את ה- Binning כקטן, את ה- F/Stop לאחד עבור זוהר ושמונה לצילום, ואת שדה הראייה ל- C.Click Acquire כדי לדמות את הביולומינציה. קבעו את תבנית התצוגה לרדיאנים ובחרו את העיגול מתוך כלי אזור העניין בחלונית 'לוח כלים'. לחץ על מדוד אזורי עניין כדי למדוד את עוצמת הביו-זוהר של פני השטח והשתמש בקביעת תצורה של מדידה כדי לבחור את הערכים הרלוונטיים לניסוי.

יצא טבלת נתונים זו כקובץ csv. לאחר מכן השתמש בערכי השטף הכולל לכימות עוצמת הביו-זוהר בקובץ. לפני ביצוע פוטותרפיה כמעט אינפרא אדום של העכברים מוזרק הגידול, להשתמש במד כוח כדי למדוד את מינון האור של לייזר אורך גל 690 ננומטר, ולהתאים את הפלט ל 100 מילי וואט לסנטימטר מרובע.

24 שעות לפני הטיפול, תוך ורידי מוזרק 100 מיקרוגרם של רגישות נוגדנים מצומדים ב 50 עד 200 microliters של PBS דרך הווריד האחורי של החיה מוזרק הגידול. ביום הטיפול בפוטותרפיה, הניחו את העכבר המצויד המוזרק, עמוס הגידולים, במצב העל-טבעי, והגנו על האתרים שאינם מטרה בנייר אלומיניום. כאשר כל המגנים הונחו, השתמש בלייזר של 100 ג'אול לסנטימטר מרובע כדי להקרין את חלל בית החזה באור כמעט אינפרא אדום למשך כ-30 שניות.

כאשר ההקרנה הושלמה והעכבר התעורר, החזירו את החיה לכלוב שלה, ומדדו את הביולומינציה מדי יום כפי שהודגם. בניתוח מייצג זה, ההטיות של נוגדן אנטי podoplanin עם IR700 אושרה על ידי ניתוח SDS-PAGE. לאחר הזרקת תאי הגידול, דימות ביולומינציה וטומוגרפיה הדמיית לומינציה מפוזרת צריכה להתבצע כדי לקבוע אילו עכברים מבטאים פעילות לוציפראז מספקת בחלל החזה למחקר נוסף.

ביום החמישי לאחר ההזרקה, נוגדן אנטי פודופלנין IR700-מוזרק עכברים להפגין IR700 פלואורסצנטיות גבוהה ופעילות לוציפראז בגידולים בית החזה, המציין כי נוגדן IR700-מצומד תוך ורידי מגיע לאתרי גידול pleural מופץ. ראוי לציין, עכברים המופצים pleural שטופלו פוטוימונותרפיה כמעט אינפרא אדום להפגין פעילות לוציפראז מופחתת, בעוד יחידות האור היחסי בקבוצת הביקורת להפגין עלייה הדרגתית בעוצמה. מכיוון שאנרגיית ההקרנה הנדרשת של NIR תלויה בקו התא והנוגדנים, הקפידו לבדוק את התנאים מראש במבחנה.