פרוטוקול זה פותח כדי לאפשר מדידות דוסימטריה להתבצע קרוב ככל האפשר לתנאי הקרנת תאים אמיתיים למחקרים רדיוביולוגיים. עם פרוטוקול זה, אנו יכולים לקבוע את המינון המדויק שהתקבל על ידי תאים מה שהופך אותו ישים מתקני רנטגן רבים והוא יכול לקחת בחשבון את כל הפרמטרים ולתרגם דוזימטריה. יש להגדיר את כל פרמטרי ההקרנה במעלה הזרם כדי לאפשר רכישה אופטימלית של מדידת הדוזימטריה הדורשת שיתוף פעולה הדוק בין פיזיקאים לרדיוביולוג.
כדי לבצע הערכת שדה הקרנה, הנח סרט דוזימטריה המתפתח על התמיכה המשמשת להקרנה והקרנת הסרט עם לפחות שני אפורים כדי להשיג שדה הקרנה מסומן היטב. סרוק את סרט הדוזימטריה המתפתח בעצמו באמצעות סורק ייעודי והשתמש בפרופיל ניתוח ועלילה כדי לתכנן את פרופיל המינון ב- ImageJ. לאחר מכן, סמן את משטח התמיכה בהקרנה כדי להבטיח שהמיכל של התא ימוקם במיקום הנכון.
כדי לבצע מדידת קצב מינון, למקם מיכל תא שונה לתוך מארז תמיכה הקרנה ומניחים את תא היוניזציה לתוך המיכל במיקום הנכון על פי הסימנים שנעשו על משטח התמיכה. ודא שכל פרמטרי ההקרנה נקבעו כראוי והקרנה מראש של תא היון למשך חמש דקות. אפס את האלקטרומטר ולקבל 10 מדידות של דקה אחת.
לאחר מכן, השתמש בנוסחה כדי לקבוע את שיעור המינון הממוצע בקרמה אוויר. מספר את כל הסרטים לזיהוי במורד הזרם שלהם. לפחות 24 שעות לפני ההקרנה, לחתוך חתיכות של סרט דוזימטריה בפיתוח עצמי בהתאם לגודל של מיכל התא.
כדי לבנות עקומת כיול, הנח בצד שלוש חתיכות של סרט צילום עבור הפקדים שאינם מוקרנים והנח את הסרט הראשון בתוך מיכל התא. לאחר מכן, להקרין את הסרט כדי לקבל את נקודת המנה הראשונה. כאשר כל הסרטים הוקרנו בשלישיות במינונים שנבחרו המתאימים, ניתן ליצור עקומת כיול.
כדי למדוד את ההיחלשות והפיזור הבינוניים של תרבות התא, בחר את אותו זמן הקרנה עבור כל ההקרנות והקרנת שלוש חתיכות של סרטי דוזימטריה המתפתחים בעצמם במיכל ללא מים. לאחר מכן, הנח חתיכת סרט אחת לתוך המיכל ומלא את המיכל באותו נפח מים כמו נפח המדיום שיוקרן. באמצעות חתיכות קטנות של קלטת לפי הצורך, למקם את המיכל בתוך המתחם.
כאשר ההקרנה הושלמה, יבש את הסרטים עם נייר סופג ולאחסן את הסרטים מוגנים מפני אור. 24 שעות לאחר ההקרנה שלהם, בסורק, להגדיר את פורמט TIFF לכחול ירוק אדום 48 סיביות ואת מצב השידור ל 150 נקודות לאינץ 'ובחר שום תיקון תמונה. כדי לחמם את הסורק, הנח סרט ללא הקרנה בסורק והפעל תצוגה מקדימה של הסריקה.
בסוף התצוגה המקדימה, הפעל טיימר והמתן 30 שניות לפני שתתחיל בסריקה. בסוף הסריקה, התחל טיימר של 90 שניות. במקביל, רשום את הסריקה ופתח את התמונה ב- ImageJ.
עקבו אחר אזור ריבועי של עניין בסריקה ומדדו את רמת הפיקסל האדום הממוצעת של האזור. בתום 90 השניות, חזור על התצוגה המקדימה של הסריקה לפחות 30 פעמים כדי להתחמם ולייצב את הסורק. לאחר שהסורק התייצב, הנח סרט במרכז מיטת הסורק והפעל תצוגה מקדימה של הסריקה.
המתן 30 שניות לפני שתתחיל בסריקה. בסוף הסריקה, המתן 90 שניות לפני שתתחיל בסריקה הבאה. לאחר מכן בוצעו מדידות להערכת עובי הנחתה ועובי הנחתה שונה כדי למצוא את העובי שהפחית את עוצמת הקרן בפקטור של שניים.
כאשר עובי זה נקבע, חמש מדידות נלקחו כדי להעריך את הערך mRAW הממוצע תוקן על ידי גורם תיקון הטמפרטורה והלחץ. עבור תצורה זו, נמצאה שכבה בעלת ערך למחצה של 0.667 מילימטר של נחושת. בניתוח מייצג זה, הוקרין סרט דוזימטריה המתפתח באופן עצמאי כדי לקבוע את פני השטח שעליהם שדה ההקרנה הומוגני, המאפשר מיקום נכון של מיכל התא.
כדי לקבוע את המינון המדויק עבור התאים, קצב מינון קרמה אוויר נמדד הומר קארמה מים באמצעות היחס של מקדם ספיגת אנרגיה המונית ממוצעת עבור מים לאוויר מוערך על הספקטרום שפעת פוטון, אשר עבור ניתוח זה נקבע להיות 0.659 אפורים לדקה. בניתוח הנחתה ופיזור בינוני של תרבות התא, הסרטים הרדיוכרומיים הדוזימטריים המתפתחים מעצמם כוילו לראשונה בין אפס לשלושה אפורים עם 0.25 שלבים אפורים בין אפס לאפור אחד ו-0.5 שלבים אפורים בין אחד לשלושה אפורים. נקודות המינון צוידו אז בעקומה פולינומית מדרגה רביעית.
כאן, טבלה מייצגת המשמשת למדידה היומית ניתן לראות. ודא שכל פרמטרי התצורה מכובדים, שקצב ה- כן נמדד בתוך הגורם המכיל הימני של התא ושהשפעת המדיום של תרבות התא מוערכת. קיימים מספר פרוטוקולים כדי לקבוע מדידת התייחסות מינון.
נקודת המפתח היא לבחור את הפרוטוקול המתאים עבור יישום מסוים, במיוחד בעת שימוש במתקני רנטגן נמוכים.
