Questo protocollo è stato messo a punto per consentire di effettuare misurazioni dosimetriche il più vicino possibile alle condizioni reali di irradiazione cellulare per studi radiobiologici. Con questo protocollo, possiamo determinare la dose esatta ricevuta dalle cellule rendendola applicabile a molte strutture a raggi X e possiamo prendere in considerazione tutti i parametri e tradurre in dosimetria. Tutti i parametri di irradiazione devono essere impostati a monte per consentire un'acquisizione ottimale della misurazione dosimetrica che richiede una stretta collaborazione tra fisici e radiobiologo.
Per effettuare una valutazione del campo di irradiazione, posizionare una pellicola dosimetrica auto-in via di sviluppo sul supporto utilizzato per l'irradiazione e irradiare il film con almeno due grigi per ottenere un campo di irradiazione ben marcato. Scansionare la pellicola dosimetrica auto-sviluppando utilizzando uno scanner dedicato e utilizzare il profilo di analisi e trama per tracciare il profilo di dose in ImageJ. Quindi, contrassegnare la superficie di supporto dell'irradiazione per assicurarsi che il contenitore della cella venga posizionato nella posizione corretta.
Per eseguire una misurazione dell'intensità di dose, posizionare un contenitore di cellule modificate nell'involucro di supporto per l'irradiazione e posizionare la camera di ionizzazione nel contenitore nella posizione corretta in base ai segni effettuati sulla superficie di supporto. Verificare che tutti i parametri di irradiazione siano stati opportunamente impostati e preirradiare la camera di ionizzazione per cinque minuti. Azzerare l'elettrometro e ottenere 10 misurazioni di un minuto.
Quindi, utilizzare la formula per determinare l'intensità di dose media nel kerma dell'aria. Numera tutti i film per la loro identificazione a valle. Almeno 24 ore prima dell'irradiazione, tagliare pezzi di pellicola dosimetrica auto-developing in base alle dimensioni del contenitore cellulare.
Per costruire una curva di taratura, mettere da parte tre pezzi di pellicola per i comandi non irradiati e posizionare la prima pellicola all'interno del contenitore cellulare. Quindi, irradiare il film per ottenere il primo punto di dose. Quando tutte le pellicole sono state irradiate in triplice copia alle dosi selezionate appropriate, è possibile generare una curva di taratura.
Per misurare l'attenuazione e la dispersione del mezzo di coltura cellulare, selezionare lo stesso tempo di irradiazione per tutte le irradiazioni e irradiare tre pezzi di pellicole dosimetriche auto-developing nel contenitore senza acqua. Quindi, posizionare un singolo pezzo di pellicola nel contenitore e riempire il contenitore con lo stesso volume d'acqua del volume di mezzo che verrà irradiato. Utilizzando piccoli pezzi di nastro, se necessario, posizionare il contenitore all'interno dell'involucro.
Una volta completata l'irradiazione, asciugare le pellicole con carta assorbente e conservare le pellicole protette dalla luce. 24 ore dopo la loro irradiazione, sullo scanner, impostare il formato TIFF su blu rosso verde a 48 bit e la modalità di trasmissione su 150 punti per pollice e non selezionare alcuna correzione dell'immagine. Per riscaldare lo scanner, posizionare una pellicola non irradiata sullo scanner e avviare un'anteprima della scansione.
Alla fine dell'anteprima, avviare un timer e attendere 30 secondi prima di iniziare la scansione. Alla fine della scansione, avviare un timer di 90 secondi. Allo stesso tempo, registra la scansione e apri l'immagine in ImageJ.
Traccia un'area quadrata di interesse all'interno della scansione e misura il livello medio di pixel rossi dell'area. Alla fine dei 90 secondi, ripetere l'anteprima della scansione almeno 30 volte per riscaldare e stabilizzare lo scanner. Una volta stabilizzato lo scanner, posizionare una pellicola al centro del letto dello scanner e avviare un'anteprima della scansione.
Attendere 30 secondi prima di iniziare la scansione. Al termine della scansione, attendere 90 secondi prima di iniziare la scansione successiva. Sono state quindi eseguite misurazioni per stimare lo spessore dell'attenuatore e sono stati testati i diversi spessori dell'attenuatore per trovare lo spessore che ha ridotto l'intensità del fascio di un fattore due.
Quando questo spessore è stato determinato, sono state effettuate cinque misurazioni per valutare il valore medio di mRAW corretto dal fattore di correzione della temperatura e della pressione. Per questa configurazione è stato trovato uno strato di mezzo valore di 0,667 millimetri di rame. In questa analisi rappresentativa, una pellicola dosimetrica auto-in via di sviluppo è stata irradiata per determinare la superficie su cui il campo di irradiazione è omogeneo, consentendo il corretto posizionamento del contenitore cellulare.
Per determinare la dose esatta per le cellule, l'intensità di dose misurata di kerma dell'aria è stata convertita in karma d'acqua utilizzando il rapporto tra il coefficiente medio di assorbimento di energia di massa per l'acqua e l'aria valutato sullo spettro di fluenza fotona, che per questa analisi è stato determinato essere 0,659 grigi al minuto. In questa analisi di attenuazione e dispersione del mezzo di coltura cellulare, le pellicole radiocromiche dosimetriche auto-developing sono state calibrate per la prima volta tra zero e tre grigi con 0,25 passi grigi tra zero e uno grigio e 0,5 passi grigi tra uno e tre grigi. I punti di dose sono stati quindi dotati di una curva polinomiale di quarto grado.
Qui, si può osservare una tabella rappresentativa utilizzata per la misurazione giornaliera. Assicurarsi che tutti i parametri di configurazione siano rispettati, che la frequenza di applicazione sia misurata all'interno del contenitore di celle destro e che l'influenza del supporto di coltura cellulare sia valutata. Esistono diversi protocolli per stabilire una misurazione di riferimento della dose.
Il punto chiave è selezionare il protocollo appropriato per un'applicazione specifica, specialmente quando si utilizzano strutture a raggi-X basse.
