המסלקים שמקורם במטופלים הם שיטה לטווח קצר המספקת נתוני תגובה מיידיים לתרופות שיכולים לחזות במדויק את תוצאות המטופל. פלטפורמות PD מאפשרות לבחון תגובות תרופתיות בהקשר תלת-ממדי המשקף את המאפיינים הפתולוגיים והארכיטקטוניים של הגידולים האזוריים מקרוב ככל האפשר. Explants יש פוטנציאל להציע תובנות חדשניות על חילוף החומרים ומנגנון הפעולה של תרופה כדי להקל על זיהוי של סמנים ביולוגיים פרמקודינמיים חדשים.
לפני תחילת הניסוי, נקו את כל הציוד הכירורגי עם פתרון 70% משקאות חריפים מתילאט תעשייתיים. מלאו צלחת תרבות של 10 ס"מ עם 25 מיליליטר של מדיום טרי על הקרח. באמצעות פינצטה, להעביר את הדגימה על משטח שעווה דנטלי ולהשתמש בשני להבי שתל העור לחתוך את הרקמה לרסיסים של כשני עד שלושה מילימטרים מעוקבים.
מעבירים את explants לתוך צלחת 10 ס"מ ומניחים שש עד תשע חתיכות של הרקמה לתוך צינור מיליליטר אחד המכיל 10% פתרון פורמלין לא חוצץ עבור דגירה 24 שעות בטמפרטורת החדר. מלאו את המספר הרצוי של בארות של צלחת שש באר עם 1.5 מיליליטר של מדיום טרי לכל טוב. ומניחים תרבות אורגנוטיפית להכניס צלחת לתוך כל באר, כך שהוא צף על גבי המדיום.
מניחים שישה עד תשעה explants על כל דיסק הכנס ולאחסן עבור דגירה 16 שעות בחממה 5% פחמן דו חמצני כדי לאפשר התאוששות. למחרת, להוסיף מדיום טרי וסם לכל באר של צלחת חדשה. כלול באר לבקרת הרכב.
כאשר כל הטיפולים התרואתיים הוכנו, השתמש פינצטה להעביר תוספת אחת לכל באר של צלחת באר שש החדשה עבור דגירה 24 עד 48 שעות בחממה דו תחמוצת הפחמן. לאחר הטיפול התרואתי, העבר את הדיסקים לשש צלחות באר חדשות המכילות 10% פורמלין. ולהוסיף כמה טיפות של 10% פורמלין לחלק העליון של כל explant כדי להבטיח כיסוי מלא עם הקיבעון במשך 24 שעות של דגירה בטמפרטורת החדר.
למחרת, להשרות מספר מתאים של ספוגים היסתולוגיים קטנים ב 70% פתרון מתילאט תעשייתי. ומניחים את הספוגים בתוך קלטות היסתולוגיה. כאשר כל הספוגים הונחו, להעביר את כל explants מאותו מצב טיפול תרופתי על ספוג יחיד עם התרופה מטופלת בצד של כל explant יצירת קשר עם הדיסק המוחדר.
מניחים עוד ספוג ספוג מראש על גבי כל explant ולסגור את הקלטת כדי לאבטח את explants בקלטת. לאחר מכן תטביעו את הקלטות בפתרון מתיל תעשייתי של 70% לפני שתמשיכו בעיבוד ההסטולוגי. לאחר הסריקה, בצע ניתוח אימון וטען את הסריקות המכילות את הבולים להכשרה לתוכנת הניתוח המתאימה.
בתצוגת מצב יחיד, נווט בין התמונות ובחר את הסריקות כדי לנתח את הסריקה עם פלואורסצנטיות מהותית. עם סריקת פלואורסצנטיות מהותית בתצוגה אחת, לחץ על בורר הפלואורסצנטיות האוטומטית כדי לצייר מקטע על אזור של רקמה לא נגועה. לחץ על ערוך סמנים וצבעים והזן את שמות הסמנים בתיבה המשויכת לכל פלואורופור.
לחץ על להכין תמונות כדי לאפשר לתוכנה להפחית את עוצמת הפלואורסצנטיות המהותית מכל התמונות שהועלו. לחץ על שלב רקמת המקטע מעל המסך כדי לפתוח את חלון האימון של פילוח הרקמות. בחלונית קטגוריות הרקמות, הזן את השם של כל קטגוריית רקמה לפלח.
לחץ על צייר, כדי לצייר אזורים סביב קבוצות של תאים בקטגוריית הרקמה של עניין. לאחר מכן עבור לקטגוריית הרקמה הבאה וצייר אזורים חדשים. כאשר כל אזורי האימון הוגדרו, השתמש במקטע רקמת הרכבת, והמתן לדיוק האימונים כדי להתיישב.
אולי לערך קרוב ל 100%לחץ על פלח כל לפלח את הרקמות. לאחר אימות איכות פילוח הרקמות, לחץ על פילוח תאים ובחר את התאים הסלולריים לפלח. כדי להגדיר את הרכיב הגרעיני, השתמש במחוון העוצמה הטיפוסי כדי להתאים את הסף המשמש לזיהוי הפיקסלים הגרעיניים.
משוב חי מסופק על-ידי חלון התצוגה המקדימה. כדי לפצל את אשכולות הפיקסלים הגרעיניים, בלוח הפיצול של הרכיבים הגרעיניים, בחר את הלחצן המתאר בצורה הטובה ביותר את איכות הכתמים של הגרעינים והשתמש בסרגל המחוון כדי להתאים את רגישות הפיצול. לאחר מכן לחץ על פלח שוק הכל כדי לפלח את כל התמונות.
כאשר כל התמונות כבר פלחו, בלוח phenotypes, להוסיף את רשימת פנוטיפים להיות מזוהה ולהזין את השם של פנוטיפים לתוך תיבת הטקסט המתאימה. לחץ על ערוך פנוטיפים כדי לבחור תא מסוים ולבחור את הפנוטיפ המתאים בתפריט הנפתח. לאחר השלמת הבחירה להכשרה, לחץ על מסווג הרכבת כדי להעריך את התוצאה של כל פנוטיפ.
המשך עם פנוטיפ הכל, שמור את הפרוייקט ולחץ על ייצוא. בחר בכרטיסיה ניתוח אצווה וטען את הפרוייקט באלגוריתם האצווה או בתיבת הפרוייקט. כדי לייצא את התמונות והטבלאות, בחר את כל התיבות באפשרויות הייצוא, לחץ על הוסף שקופיות וטען את כל התמונות המכילות את הבולים עבור האצוות שהוכנו בעבר.
לאחר מכן לחץ על הפעל אל ניתוח אצוות ההתחלה של חותמת אחת וייצוא הנתונים המתאימים כאשר הם נרכשו. הדמיה רב-ספקטרלית של רקמת הסבר NSCLC מוכתמת בסמנים של כדאיות התא, מאפשרת זיהוי ופנוטיפינג של אוכלוסיות תאים בודדים, כמו גם זיהוי של רכיבים גידוליים וסטרומליים בתוך הסביבה מיקרו הגידול explant. פילוח רקמות ותאים של סמן הכדאיות התא מכתים תמונות מרובות ספקטרליות כפי שהודגם, ניתן להשתמש כדי לכמת מוות תאים והתפשטות ב explants נגזר המטופל שטופלו בתרופות מעניינות.
לדוגמה, בניתוח זה, בדגימות רקמה מגידולים שטופלו ב- Nivolumab, זוהו מספר גבוה יותר של תאים גוססים בהשוואה לדגימות הגידול שטופלו בקרה. בנוסף, כפי שמודגם, היכולת לחלץ מידע מרחבי מנתוחים מוכתמים, מאפשרת חישוב של מרחקים בין-עירוניים. Explants יכול לשמש גם ליצירת פרופיל מרחבי נרחב או ציטומטריה המונית, המאפשרת למאות סמנים ביולוגיים להיות בפרופיל בו זמנית ברזולוציית חברת הבת תוך שמירה על המבנה 3D של המדגם.
PDs יכול לחזות את היעילות של אימונותרפיה. לדוגמה, ניתן להבחין בין מקרים רגישים או עמידים למעכבי מחסום חיסוני ולחקור את המנגנונים העומדים בבסיס הבחנה זו.
