יצירת זוגות מודלים תואמים של PDX ו-PDX לחקר פרמקולוגיה של סרטן

פרוטוקול זה יכול לשמש להקמת ספריה תואמת של קסנוגרפטים שמקורם בחולה, או PDX, וקווי אורגנואידים תואמים שמקורם על-ידי המטופל. היתרון של שיטה זו הוא שניתן להשתמש בה כדי ליצור אורגנואידים באמצעות PDX להקרנת במבחנה, וכתוצאה מכך זוגות תואמים של דגמי in vivo/in vitro. התחל על ידי קצירת הגידולים ועיבוד הרקמה כמתואר בכתב היד טקסט.

לאחר עיכול רקמות, פיפטה הרקמה למעלה ולמטה עם פיפטה פלסטיק סטרילי חמישה מיליליטר. לאחר מכן להוסיף 20 מיליליטר של AD + להומוגנט ולסנן אותו עם מסננת תאים 100 מיקרומטר. לשטוף את הסינון פעמיים עם AD + ואז להעביר אותו צינור פלסטיק צנטריפוגה אותו ב 450 פעמים G במשך חמש דקות.

התחדשו בתאים ב-BME ושמרו אותם על הקרח. כדי להכין את תרבות האורגנואידים, העבירו 200 מיקרוליטרים של השעיית התא לכל באר של צלחת שש בארות ודגרו את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. הוסף שני מיליליטרים של מדיה אורגנואידית לכל באר ותדמית הנציג טיפות תחת מיקרוסקופ.

לשמור על תרביות האורגנואידים ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני עם שינויים בינוניים כל שלושה עד ארבעה ימים ומעבר ביחס של אחד לשניים כל שבעה ימים. לאחר ניתוק האורגנואידים, הפעל אותם דרך מסנן 70 מיקרומטר לתוך צינור פלסטיק 50 מיליליטר. לספור את האורגנואידים תחת מיקרוסקופ ולהכניס אותם BME על הקרח עבור ריכוז סופי של 5%הוסף 50 microliters של המתלה אורגנואיד לכל צלחת 384-well עם מתקן נוזלי עבור צפיפות זריעה של 200 CR2110 PDXOs לבאר.

השתמש במתקן הדיגיטלי כדי להוסיף SN38 לכל באר בדילול סדרתי. צור מפת לוח באמצעות כלי התוכנה של המתקן הדיגיטלי. הטיפולים צריכים לכלול רכב בקרה שלילי עם 100% כדאיות ושליטה חיובית של חמישה staurosporine מיקרומולאר עם 0% הכדאיות.

בסיום, מניחים את צלחות 384 הבאר שטופלו בסמים בחזרה לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס. תחת מיקרוסקופיה קלה, PDXO CR2110 מראה מורפולוגיה סיסטיק טיפוסית המדגימה את הדמיון בין אורגנואידים שמקורם ב- PDX לאורגנואידים שמקורם בחולה באותם תנאי תרבות. בדיקה היסטופתולוגית על ידי כתמי H&E מגלה כי מבני הרקמות וסוגי התאים של PDXO CR2110 דומים ל- PDX CR2110 המקורי.

השוואות פרופיל גנומי של PDX ו- PDXO מדגימות מתאם של 94.92% של ביטוי שעתוק ו-97.67% קונקורדנציה של מוטציות DNA, מה שמרמז על דמיון גנומי כולל בין זוג מודלים זה. בדיקות רגישות לסמים בוצעו על PDXO CR2110 בצלחות 384-גם. PDXO CR2110 היה רגיש irinotecan ועמיד בפני ציספלטין, עולה בקנה אחד עם תוצאות הטיפול PDX.

הזוג המתאים של מודלים במבחנה in vivo יכול להחמיא אחד לשני עבור הקרנת במבחנה ואימות vivo, שיפור שיעור ההצלחה של גילוי תרופות ופוטנציאל הפחתת שיעורי ההתשה בפיתוח קליני.