וידאו זה מראה את אינדוקציה במבחנה של תאי גזע עיסת שיניים אנושית לכיוון שושלות הלבלב. תאי גזע מעניקים טיפול אלטרנטיבי במחלות רבות כולל סוכרת מסוג I הגורמות לביולגיה של תאי ביתא. השתלת תאים המייצרים אינסולין תהיה השיטה המבטיחה החדשה לגרימת לכל החיים.
בסרטון זה מתוארות שתי גישות ליצירת תאים המייצרים אינסולין, כולל פרוטוקול אינדוקציה אינטגרטיבי ולא אינטגרטיבי. ובחלק זה מוסבר פרוטוקול האינטגרציה לתפיסת אינסולין המייצר תאים מתא גזע עיסת שיניים אנושית. עבור פרוטוקול האינדוקציה הוא לערבוב התהליך ההתפתחותי הטבעי של הלבלב.
כדי לקבל את התאים הטבעיים והפונקציונליים שמייצרים אינסולין. ליצירת תאי אינסולין המייצרים תאים מתאי גזע מזנכימליים כמו תאי גזע עיסת שיניים, מועסק פרוטוקול אינדוקציה רב של שלבים. תאי גזע Mesenchymal משמשים במילה אנדודרם סופי, אנדודרם הלבלב, אנדוקריני הלבלב ולאחר מכן הלבלב בטא-תא או אינסולין לייצר תאים בהתאמה.
כדי לגרום לתאים, גישת אינדוקציה של שלושה שלבים משמשת כפרוטוקול עמוד השדרה. הפרוטוקול האינטגרטיבי השתמש בתפוגת יתר של גורם שעתוק הלבלב החיוני, PDX-1, על ידי תאי גזע עיסת שיניים אנושית. לאחר מכן PDX-1 מעל תאי גזע מבוטאים יושרה עוד יותר באמצעות פרוטוקול בידול שלושה שלבים.
פוטנציאל הבידול בלבלב, על ידי הפרוטוקול האינטגרטיבי, יושווה לפרוטוקול הלא אינטגרטיבי כפי שמודגם באנימציה. רעיון זה בוצע על פי הפרוטוקול שאושר על ידי ועדת האתיקה למחקר אנושי, הפקולטה לרפואת שיניים, אוניברסיטת צ'ולאלונגקורן בהסכמת המטופלים. פרוטוקול זה התחיל עם תפוגת יתר של PDX-1.
תאי גזע עיסת שיניים אנושי בחלקים של 2 עד 5, עם 70-80%מפגש, משמשים עבור התמלה. תאים עוברים טריפסין ונספרים. ואז מיליון תאים יושבים על כלי ההדבקה ודגרו בן לילה.
24 שעות לאחר מכן אנטי וירוס מוכן טרי נושאת גן PDX-1 מתווסף לכלי התרבות על פי ריבוי הרצוי של זיהום. התאים שהודבקו נשמרים באינקובטור למשך 24 שעות. ואז מדיום תרבותי טרי משתנה ומתוחזק לתקופה נוספת של 48.
מורפולוגיה של תאים שהודבקו נבדקת לפני השימוש לשלב אינדוקציה נוסף. תאי גזע עיסת שיניים אנושית עם PDX-1 על תפוגה הם לאחר מכן Tryptimized ומושעה במדיום אינדוקציה הלבלב הראשון, מה שנקרא בינוני A.In שלב זה, כלי בתרבית התקשרות נמוכה משמש. מורפולוגיה של PDX-1 מעל התבטא תאי גזע עיסת שיניים אנושית ביום 3 לאחר אינדוקציה בינונית A הוא ציין.
תאים עם מורפולוגיה טובה ישמשו לאחר מכן לשלב אינדוקציה נוספת. השלב הבא, מדיום האינדוקציה השני, שנקרא בינוני B מתווסף לכלי התרבותי. המורפולוגיה של PDX-1 מעל התבטאות תאי גזע עיסת שיניים אנושית ביום השני לאחר אינדוקציה בינונית הוא ציין.
תאים עם מורפולוגיה טובה ישמשו לאחר מכן לשלב אינדוקציה נוסף. השלב הבא, אמצעי האינדוקציה השלישי, שנקרא בינוני C מתווסף לכלי התרבות. 5 ימים לאחר מכן מורפולוגיה של תאים הוא ציין.
מושבות תאים נאספות לניתוח נוסף. כולל מורפולוגיה וגודל של המושבה, ביטוי סמן גן הלבלב ורכוש פונקציונלי לגבי הפרשת C-פפטיד מגורה גלוקוז או בדיקת GSCS. עבור גישת האינדוקציה הלא אינטגרטיבית, מועסק פרוטוקול אינדוקציה של שלושה שלבים שהוזכר קודם לכן.
מיליון תאים מושעים מחדש במדיום A ויושבים על כלי תרבות התקשרות נמוך. ואז תרבות במשך שלושה ימים. לאחר בדיקת המורפולוגיה, סדרה של מדיום אינדוקציה, כולל בינוני B ו- C מתווספים לאחר מכן לכלי התרבות ביום השלישי והחמישי, בהתאמה.
ביום 10, מורפולוגיה של תאים הוא ציין. מושבות תאים נאספות לניתוח נוסף, כולל מורפולוגיה וגודל המושבה, ביטוי סמן גן הלבלב, ורכוש פונקציונלי לגבי הפרשת C-פפטיד מגורה גלוקוז או בדיקת GSCS. התוצאות של שני פרוטוקולי האינדוקציה משווות בשני הפרוטוקולים.
תאי גזע עיסת שיניים אנושיים מסוגלים ליצור מושבה כמו מבנה מאז היום הראשון של האינדוקציה. מראה המושבות עגול וצפוף. כל המושבות צפות בכלי התרבות לאורך כל תקופת האינדוקציה.
ספירת המושבות הכוללת של פרוטוקול האינדוקציה האינטגרטיבית היא קצת יותר גבוהה מזה של אינדוקציה לא אינטגרטיבית. האבולוציה תחת אחוז בגודל המושבה מראה מגמה מועילה, החל היווצרות מושבה קטנה עד בינונית על אינדוקציה אינטגרטיבית, אשר חשוב להפחית את הליבה הנמק בתוך המושבה. ניתוח סמן גנים בלבלב גילה כי פרוטוקול אינדוקטיבי אינטגרטיבי מניב את המושבות עם תפוגה גבוהה של סמני הלבלב, כולל MAP-A, GLUT-2, אינסולין, ו- GLP-1R, מה שמצביע על ההבחנה כלפי התאים המייצרים אינסולין נמדדים.
לתפקוד הפרשת גלוקוז C-פפטיד חשוב. התוצאות מראות כי הן פרוטוקול אינדוקציה מניב את המושבות עם תגובה טובה לאתגר גלוקוז. ממחקר זה, שני פרוטוקולי אינדוקציה הלבלב מסוגלים ליצור את התאים מייצרי האינסולין במבחנה במונחים של תפוגת סמן הלבלב ורכוש פונקציונלי, הפרוטוקולים מראים איכות טובה יותר של היווצרות תאים לייצר אינסולין.
מה שמרמז על המגמות של תאי גזע מזנכימליים אנושיים כמו יישום תאי גזע עיסת שיניים אנושית בטיפול סוכרת מבוסס תאי גזע בעתיד הקרוב.
