Cette vidéo montre l’induction in vitro de cellules souches de la pulpe dentaire humaine vers les lignées pancréatiques. Les cellules souches donnent un traitement alternatif dans de nombreuses maladies, y compris le diabète de type I qui provoque le biolagage des cellules bêta. La transplantation de cellules productrices d’insuline sera la nouvelle méthode prometteuse pour provoquer la vie.
Dans cette vidéo, deux approches pour générer des cellules productrices d’insuline, y compris le protocole d’induction intégrative et non intégrative, sont décrites. Et dans cette partie, le protocole d’intégration pour induire des cellules productrices d’insuline à partir de cellules souches de pulpe dentaire humaine est expliqué. Pour le protocole d’induction est le pour le mélange du processus naturel de développement pancréatique.
Pour obtenir les cellules productrices d’insuline naturelles et fonctionnelles. Pour générer des cellules productrices d’insuline à partir de cellules souches mésenchymateuses comme les cellules souches de la pulpe dentaire, un protocole d’induction en plusieurs étapes est utilisé. Les cellules souches mésenchymateuses sont utilisées dans le mot endoderme définitif, endoderme pancréatique, endocrinien pancréatique puis cellules bêta pancréatiques ou cellules productrices d’insuline respectivement.
Pour induire les cellules, l’approche d’induction en trois étapes est utilisée comme protocole de base. Le protocole intégratif utilisait l’expiration excessive du facteur de transcription pancréatique essentiel, PDX-1, par les cellules souches de la pulpe dentaire humaine. Ensuite, le PDX-1 sur les cellules souches exprimées sera induit davantage à l’aide d’un protocole de différenciation en trois étapes.
Le potentiel de différenciation pancréatique, par le protocole intégratif, sera comparé au protocole non intégratif tel qu’illustré dans l’animation. Cette idée a été réalisée selon le protocole approuvé par le Comité d’éthique de la recherche humaine, Faculté de médecine dentaire, Université Chulalongkorn avec le consentement éclairé des patients. Ce protocole a commencé avec l’expiration de PDX-1.
Les cellules souches de la pulpe dentaire humaine dans des parties de 2 à 5, avec une confluence de 70 à 80%, sont utilisées pour la transduction. Les cellules sont trypsinisées et comptées. Ensuite, un million de cellules sont assises sur le vaisseau de transfection et incubées pendant la nuit.
24 heures plus tard, un antivirus fraîchement préparé portant le gène PDX-1 est ajouté au vaisseau cultivé en fonction de la multiplicité d’infection souhaitée. Les cellules transfectées sont ensuite conservées dans l’incubateur pendant 24 heures. Ensuite, le milieu de culture frais est changé et maintenu pendant une autre période de 48.
La morphologie des cellules transfectées est vérifiée avant d’être utilisé pour une étape d’induction ultérieure. Les cellules souches de la pulpe dentaire humaine avec PDX-1 à l’expiration sont ensuite tryptimisées et suspendues dans le premier milieu d’induction pancréatique, appelé milieu A.In cette étape, un vaisseau de culture à faible attachement est utilisé. Morphologie de PDX-1 sur les cellules souches de la pulpe dentaire humaine exprimée le jour 3 après l’induction du milieu A.
Les cellules ayant une bonne morphologie seront ensuite utilisées pour d’autres inductions. L’étape suivante, le deuxième milieu d’induction, appelé milieu B, est ajouté au récipient cultivé. La morphologie de PDX-1 sur les cellules souches de la pulpe dentaire humaine exprimée le deuxième jour après l’induction moyenne est observée.
Les cellules ayant une bonne morphologie seront ensuite utilisées pour une étape d’induction ultérieure. L’étape suivante, le troisième milieu d’induction, appelé milieu C, est ajouté au récipient cultivé. 5 jours plus tard, la morphologie cellulaire est observée.
Les colonies cellulaires sont collectées pour une analyse plus approfondie. Y compris la morphologie et la taille des colonies, l’expression du marqueur du gène pancréatique et les propriétés fonctionnelles concernant la sécrétion de peptide C stimulée par le glucose ou le test GSCS. Pour l’approche d’induction non intégrative, le protocole d’induction en trois étapes mentionné précédemment est utilisé.
Un million de cellules sont ressésées dans le milieu A et assises sur un récipient de culture à faible attachement. Puis cultivé pendant trois jours. Après vérification de la morphologie, des séries de milieux d’induction, y compris les milieux B et C, sont ensuite ajoutées au récipient cultivé les troisième et cinquième jours, respectivement.
Au jour 10, la morphologie cellulaire est observée. Les colonies cellulaires sont collectées pour une analyse plus approfondie, y compris la morphologie et la taille des colonies, l’expression des marqueurs du gène pancréatique et les propriétés fonctionnelles concernant la sécrétion de peptide C stimulée par le glucose ou le test GSCS. Les résultats des deux protocoles d’induction sont comparés dans les deux protocoles.
Les cellules souches de la pulpe dentaire humaine sont capables de former une structure semblable à une colonie depuis le tout premier jour de l’induction. L’apparence des colonies est ronde et dense. Toutes les colonies flottent dans les récipients de culture tout au long de la période d’induction.
Le nombre total de colonies du protocole d’induction intégrative est un peu plus élevé que celui de l’induction non intégrative. L’évolution sous pourcentage de taille de colonie montre une tendance bénéfique, de la formation de colonies de petite à moyenne taille lors de l’induction intégrative, ce qui est important pour réduire le noyau nécrotique à l’intérieur de la colonie. L’analyse des marqueurs du gène pancréatique a révélé que le protocole inductif intégratif donne les colonies avec une expiration élevée des marqueurs pancréatiques, y compris MAP-A, GLUT-2, insuline et GLP-1R, suggérant la différenciation vers les cellules productrices d’insuline mesurées.
Pour la fonction glucose C-peptide sécrétion est important. Les résultats montrent que les deux protocoles d’induction donnent aux colonies une bonne réponse au défi du glucose. À partir de cette étude, les deux protocoles d’induction pancréatique sont capables de générer les cellules productrices d’insuline in vitro en termes d’expiration du marqueur pancréatique et de propriété fonctionnelle, les protocoles montrent une meilleure qualité de formation de cellules productrices d’insuline.
Suggérer les tendances des cellules souches mésenchymateuses humaines comme l’application de cellules souches de pulpe dentaire humaine dans le traitement du diabète à base de cellules souches dans un proche avenir.
