השתלה תת-רשתית של RPE על נשא במיני-חזירים: הנחיות להכנות טרום ניתוחיות, טכניקות כירורגיות וטיפול לאחר ניתוח

ניוון מקולרי הקשור לגיל נחשב לאחד הגורמים העיקריים לאובדן ראייה מרכזי. הניוון המתקדם והתפקוד הלקוי של שכבת RPE הוא סימן ההיכר של הצורה המוקדמת של AMD. למרות ההתקדמות בטיפול במחלות רשתית, פיתוח שיטת טיפול יעילה נותר מאתגר.

אחד ממושגי הטיפול המבטיחים ביותר הוא החלפת RPE בתאי RPE בתרבית חוץ גופית ממקור שונה. ה-RPE מועבר בדרך כלל לחלל תת-רשתית בצורה של תרחיף תאים, יריעת תאים התומכת בעצמה, או מונושכבה של תאים הנתמכת על ידי נשא מלאכותי. היתרון העיקרי של שתי השיטות המאוחרות הוא שלאחר ההשתלה, התאים נמצאים במצב חד שכבתי ממוין בחלל התת רשתית.

מחקרים פרה-קליניים בבעלי חיים המבוצעים in vivo נועדו לבסס הליך כירורגי ניתן לשחזור ובטוח על מודל של בעלי חיים גדולים על מנת להשיג נתונים שיכולים להיות שימושיים ופוטנציאליים ישימים בבני אדם. באמצעות פרוטוקול זה, אנו שואפים לדווח על עקרונות הטכניקה הכירורגית התת-רשתית המשמשת להשתלה תת-רשתית in vivo של נשא תאים במודל של בעלי חיים גדולים שניתן להשתמש בהם למחקרים ניסיוניים in vivo עם השתלה של סוגים שונים של תאים ונשאי תאים. עם סרטון זה, ברצוננו להציג פרוטוקול שלב אחר שלב של ההליך הכירורגי של השתלה תת רשתית של נשא התא בעיני Libechov minipig.

הכנס את ספקולום המכסה. פתח את הלחמית בצד האף שניים עד שלושה מילימטרים מהלימבוס על מנת לחשוף את לובן העין לסקלרוטומיות. הכנס את שלושת הטרוקרים של 25 מד שלושה מילימטרים מלימבוס באזור pars plana.

שמור על הקרנית רטובה, או לצפות אותה עם תאית מתיל במהלך כל הניתוח כדי למנוע בצקת קרנית אוסמוטית. הסר את החלק האמצעי של גוף הזגוגית בגישה הסטנדרטית של שלוש יציאות pars plana vitrectomy. בזהירות להסיר את הזגוגית מאחורי העדשה באזור של סקלרוטומיה גדולה בעתיד.

השתמש הזרקת intravitreal triamcinolone acetonide כדי להכתים את הזגוגית האחורית, אשר נשאר בדרך כלל דבק הרשתית על מנת לבצע ניתוק זגוגית אחורית מבוקרת. לאחר מכן, לבצע לאט הזרקה subretinal של BSS עם צינורית מד 41 יותר מרכזי, הימנעות היווצרות של bleb לכיוון הפריפריה. להפחית את הגדרת הלחץ התוך עיני של מערכת ההשקיה עד 15 מ"מ כספית במהלך ההזרקה התת רשתית על מנת למנוע חסימת כלי דם רשתית חולפת.

בצע אנדודיאטרמיה גדולה ליניארית של הרשתית עם בדיקה אנדודיאטרמיה 27 מד ליד בסיס bleb האף. לאחר מכן, הכינו רטינוטומיה גדולה של שלושה מילימטרים באמצעות להב MVR בעל 25 מד, או מספריים אנכיים עם הגדרת לחץ תוך עיני מוגבר של מערכת ההשקיה עד 60 מילימטרים של כספית למשך שלוש עד חמש דקות. לאחר מכן בצע סקלרוטומיה גדולה של שלושה מילימטר שלושה מילימטרים מהלימבוס באמצעות סכין פאקו 2.75 מ"מ.

שימו לב exodiathermy של דימום אפשרי של כלי הדם scleral ואת הגוף ciliary בתוך סקלרוטומיה גדולה. הסר את צניחת גוף הזגוגית בצד סקלרוטומיה גדולה עם הוויטרקטור. לאחר מכן הכנס בעדינות את המזרק ביד דומיננטית לחלל הזגוגית דרך סקלרוטומיה גדולה.

השתילו את נשא התא דרך הרטינוטומיה לתוך החלל התת-רשתית. מוציאים את המזרק מהעין, וסוגרים את הסקלרוטומיה הגדולה עם 8-0 תפר Vicryl כדי למנוע סיבוכים הקשורים היפוטוניה תוך עינית. בצע חילוף נוזל-אוויר מלא עם צינורית סיליקון.

לאחר מכן, להזריק את שמן הסיליקון לתוך חלל הזגוגית עד הלחץ תוך עיני יהיה נורמלי. בסיום הניתוח, הסירו את הטרוקרים, וסגרו את שלוש הסקלרוטומיות והלחמית עם 8-0 תפרי Vicryl. לפרטים נוספים, עיין בסעיף הליך כירורגי.

נקו את האזור הפריוקולרי. השתמש במלקחיים ובמספריים כדי להסיר את העפעף העליון והתחתון. הסירו את העפעף השלישי.

חותכים דרך הלחמית. חותכים את שרירי העיניים במספריים. המשך את החיתוך בצורה מעגלית מפני השטח לעומק.

לחתוך את עצב הראייה. הסר את העין מהמסלול. בהירות חלל הזגוגית המלא בשמן סיליקון מאפשרת לדמיין את מצב הרשתית עם נשא תאים תת-רשתית בכל נקודת זמן של התקופה שלאחר הניתוח.

התמונות ללא אדום מראות שההשתקפות של תאי RPE אנושיים מתורבתים בתוך מסגרת נושאת התא אינה שונה מההשתקפות של שכבת RPE חזירית מקומית. הדמיית OCT In vivo מגלה כי נשא התאים המושתל בחלל התת-רשתית אינו מגדיל באופן משמעותי את עובי הרשתית כולה. נראה שגם קרום הברוך נותר ללא פגע.

המסגרת של המוביל הסלולרי גורמת רק הצללה קלה של אות ה- OCT. מחקר היסטולוגי של קטעי קריו לאחר המוות של הרשתית מדגים את היווצרות שכבת התא הפיגמנטי הרציפה והלא סדירה באזור RPE האנושי הראשוני המושתל, מה שמוכיח את הישרדות התאים המעובדים על התאים נושאי התא. ניתוח אימונוהיסטוכימי של קטע הרקמה מראה את תאי RPE האנושיים, הנמצאים באזור ההשתלה, ומבטאים את סמן RPE טיפוסי הדומה לתאי RPE מיני-חזיריים מקומיים.

למרות זאת, תאי RPE המושתלים אינם מופיעים כחד-שכבה של תאים. עם זאת, תאים אלה ממוקמים בתוך החלל התת-רשתית המוגדר. מודל של חיות עין גדולות של מיניחזירים, במקרה זה, מיני חזירים Libechov, אנו רואים כאחד המודלים המתאימים ביותר ליישום עתידי של מושגים חדשים לטיפול במחלות רשתית ניווניות, בשל הדמיון שלהם לאנטומיה ולפיזיולוגיה של העין האנושית.

קווי דמיון אלה מאפשרים לפתח את הטכניקות הכירורגיות ואת המכשור להשתלה תת רשתית של נשא תאים, וטכניקה זו יכולה להיות מועברת בקלות לטיפול בהפרעות עיניים אנושיות. חשוב לוודא כי הניתוחים במיני-חזירים מבוצעים עם אותו מכשור, כולל כלים להעברת השתלות, אשר ישמשו גם בניתוחים אנושיים, ובכך ניתן ליישם את הניסיון והידע שנצברו על בני אדם ללא קשיים. התיאור המפורט של הליכי הטיפול לפני הניתוח ולאחר הניתוח יכול להיות מועיל למחקרים עתידיים על ידי הגדלת ייצור נתונים יעיל וסטנדרטי.