דגי זברה הם מודל אטרקטיבי, אבל מדענים לא יודעים כמה האורגניזם לוקח עם מינון הנישא במים. פיתחנו טכניקה לעיכול רקמות לאחר חשיפה ולכימות מתכות באמצעות ICPMS. טכניקה זו מאפשרת לנו לכמת ולאמת במדויק את תגובת המינון באמצעות ICPMS.
לשיטה זו יש הרבה פוטנציאל. ניתן ליישם חשיפות פרמקולוגיות או סביבתיות למתכות מרמת התאים ועד למערכות איברים שלמות במודלים של בעלי חיים. הוסיפו כ-0.25 מיליליטרים של חומצה חנקתית בטוהר גבוה לצינורות הצנטריפוגה של פוליפרופילן 15 מיליליטר עבור עד 10 זחלים.
אולטראסונקט במשך שעה אחת כדי לבלוע מראש את הדגימות. עבור ultrasonication, לבצע מחזורים קצרים של עיכול רקמות עם מרווחים של חמש דקות במעכל מיקרוגל בטוח חומצה עד שכל הרקמה מחומצנת בעליל, מה שמייצר תמיסה צהובה אחידה וברורה. עקוב אחר שלמות הצינורות בזהירות כדי למנוע קרע ולבצע סיבובים קצרים בצנטריפוגה בין מחזורים.
לאחר שהרקמה מחומצנת בעליל, דיללו את הדגימות במכסה אדים ל-3.5% חומצה חנקתית באמצעות 6.75 מיליליטר של מים בעלי טוהר גבוה ומערבולת כדי לערבב היטב. לאחר מכן לבצע עקומת כיול תואמת מטריצה בת 7 נקודות כדי להסביר את כל ההפרעות האיזובריות הפוטנציאליות. באמצעות ריכוז מלאי של תקן היסודי המאושר מימי, קח אליקוט 0.1 מיליליטר, ועל ידי פיפט לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר חדש.
דיללו עם 3.5% חומצה חנקתית לנפח סופי של 10 מיליליטר כדי לייצר 10 חלקים למיליארד פתרונות סטנדרטיים. באמצעות מלאי של 10 חלקים למיליארד, הפוך את הדילולים הסדרתיים לתמיסות סטנדרטיות של 0.1, 1.0 ו-5.0 חלקים למיליארד ב-3.5% חומצה חנקתית. באמצעות מלאי 0.1, הפוך את הדילולים הסדרתיים לתמיסות סטנדרטיות 0.001, 0.005 ו- 0.01 חלקים למיליארד ב-3.5% חומצה חנקתית.
לאחר מכן, לפני הכנת מכשיר ה- ICPMS לניתוח דגימה, ודא כי שסתום גז הארגון פתוח, כל הצינורות מחוברים היטב ונקיים, 5% חומצה חנקתית פתוחה לשטיפת צינורות וכלי זכוכית בין ניתוחי דגימה. בדוק את מצב הלפיד והמדוכים וודא כי תיבת הלפיד נאחזת היטב. וצינור הניקוז של תא הריסוס מחובר כראוי לפריפומפ.
פתחו את התוכנה, בדקו את קריאות הוואקום וודאו שכל משאבות הטורבו פועלות ב-100% לחץ על START בחלון המצב של מערכת בקרת הפלזמה כדי להפעיל את רצף ההתחלה. הפעילו את משאבת הפלזמה ואת צ'ילר הפלזמה, הניחו את הנבולייזר והדליקו את הפלזמה. המתן עד שהפלזמה תהיה מוארת ויציבה כאשר חלון המצב מציין שרצף ההפעלה הושלם.
בשלב זה, שימו לב לנקודות הירוקות בחלון מצב המערכת המציינות שכל ספקי הכוח פועלים. בשורת התפריטים, לחץ על Control, Autosampler בתפריט הנפתח. הזן את מיקום המדף האוטומטי עבור הצינור המכיל 5% חומצה חנקתית, לאפשר לחומצה להיכנס לפלזמה.
בשורת התפריטים, לחץ על סריקות, מגנט בתפריט הנפתח. בחלון MagnetScan, הקלד 115 במיקום מסת הסמן ולחץ על Enter. אפשרו למגנט לסרוק את טווח המסה למשך 30 דקות בזמן שהמכשיר מתחמם.
לאחר 30 דקות, השתמש בבקרת הדגימה האוטומטית כדי לעבור למצב של פתרון כוונון רב-תכליתי של חלק אחד למיליארד. שאפו לפתרון הכוונון וכיוונו את המכשיר כדי למטב את קריאת האות. התאם את מיקום הלפיד עבור קואורדינטות X, Y, Z, כך שהפנס יתיישר עם מרכז המדוכים וקצב זרימת הנבולייזר בחלון בקרת הפלזמה.
בצע את ההתאמות הדרושות בחלון כוונון יון אופטיקה עבור המקור, הגלאי והמנתח. לאחר מיטוב קריאת האות, לחץ על עצור בחלון סריקת המגנטים, לחץ על כיול מגנט ובחר רזולוציה נמוכה בחלון הקופץ. לחץ על אישור ופתח את קובץ ה- smc כיול המסה כדי לכייל את המגנט.
לחץ על שמור, השתמש כדי להחיל את כיול המגנט הנוכחי על הניתוחים. בעת מדידת דגימות לא ידועות עם טווח עצום של ריכוזים, בצע כיול גלאי כדי להשוות אותות ספירת יונים בריכוזים נמוכים לאותות יונים מוחלשים המיוצרים בריכוזים גבוהים יותר. התחל ניתוח לדוגמה על-ידי לחיצה על רכישת נתונים ולאחר מכן לחץ על הגדרת שיטה בתפריט הנפתח.
השתמש בשיטה קיימת המסופקת על ידי היצרן או צור שיטה המבוססת על האלמנטים המעניינים. במידת הצורך, התאם את מצב הניתוח, זמן השהייה, השהיית המתג, מספר ההגרלות והמחזורים, הרזולוציה, מצב הזיהוי ומסת הפארק עבור הגדרות הסטה. לחץ על שמור כדי להקליט את הגדרות השיטה.
מטב את הפרמטרים עבור כל מתכת ואיזוטיפ. בשורת התפריטים, לחץ על רכישת נתונים. לחץ על Batch Run בתפריט הנפתח.
לחלופין, לחץ על סמל BATCH מתחת לסרגל התפריטים, יבא את פרמטרי האצווה מגיליון אלקטרוני או צור רצף בחלון Batch Run. הזן את סוג הדגימה, את מיקום ארון התקשורת של הדגימה האוטומטית, זמן ההעברה, זמן הכביסה, המשכפלים, מזהה הדגימה וקובץ השיטה. ארגן את הרצת האצווה עבור פתרונות סטנדרטיים לעקומת כיול, ולאחר מכן תקן בקרת איכות, ולאחר מכן דגימות לא ידועות.
עקוב אחר סחף המכשיר ושכפול הדגימה על ידי הכללת תקן בקרת איכות של 0.5 חלקים למיליארד כל 5 עד 10 דגימות. מחקרי ספיגת רקמות נערכו עם חשיפות המועברות במים של ציספלטין ותרכובת אנטי-סרטנית חדשנית מבוססת רותניום PMC79. קטלניות ועיכוב בקיעה הוערכו עבור ריכוזים נומינליים של ציספלטין.
0, 3.75, 7.5 15, 30 ו-60 מיליגרם לליטר ציספלטין. הצטברות פלטינה ברקמת האורגניזם נקבעה על ידי ניתוח ICPMS ורקמת האורגניזם הכילה מינונים בהתאמה של 0.05, 8.7, 23.5, 59.9, 193.2 ו-461.9 ננוגרם לאורגניזם. בקיעה מאוחרת נצפתה בכל ריכוזי הציספלטין.
לאחר ההפחתה, המקהלות נאספו ונותחו לפלטינה בנפרד. מינונים לא-קטלניים של ציספלטין ששימשו למחקרי דה-קוריונציה קבעו כי 93% עד 96% מכלל המינון המועבר של ציספלטין הצטברו בכוריון, כאשר המינון הנותר בתוך רקמת הזחל הצטבר בכוריון, כאשר המינון הנותר נמצא בתוך רקמת הזחל. זחלי דגי זברה נחשפו ל-0, 3.1, 6.2, 9.2 ו-12.4 מיליגרם לליטר של PMC79.
ריכוזים אלה נקבעו באופן אנליטי כמכילים 0, 0.17, 0.44, 0.66 ו-0.76 מיליגרם לליטר של רותניום. שלא כמו ציספלטין זה, לא נצפתה בקיעה מושהית בזחלים החשופים PMC79. כוריונים לא נכללו בניתוח רותניום מכיוון שהם התדרדרו באופן טבעי לפני איסוף הזחלים.
המתכת המסיבית בתוך רקמות הזחל שנותחה בכל ריכוז הייתה 0.19, 0.41 ו-0.68 ננוגרם של רותניום לכל זחל. כל אחד מהריאגנטים שנוספו לפרוטוקול החשיפה נותן פוטנציאל להפרעות איזובריות. במידת האפשר, שקול חלופות כמו קירור מהיר בהשוואה לטריקאין.
שיטה זו מאפשרת כימות מינון מתכתי לרעילות, יעילות, ניסויים שיש להשוות בין בעלי חוליות גבוהים יותר. התרגשנו במיוחד מכך שמינון הסף שלנו היה בסדר גודל שניתן לחולים.
