וכך באמצעות מינוף Z-REX, חוקרים יכולים לחקור כיצד תגובות איתות אינדיבידואליות משתנות בתגובה לליגנד תגובתי ספציפי העוסק בחלבון ספציפי בעל עניין בתנאים פיזיולוגיים קרובים בזחלי דגי זברה. שיטות קונבנציונליות כמו מינון בתפזורת מגיבות מולקולות קטנות הגורמות למטרות ולרעילות ואינן נותנות שליטה על ספציפיות המטרה של הליגנד. Z-REX יכול לקשר מעורבות מטרה ספציפית של ליגנד עם פנוטיפ ספציפי בדיוק מרחבי-זמני גבוה.
לאחרונה הראינו כיצד מטבוליט תגובתי HNE, מטרה ומסלול קשורים שהתגלה על ידי Z-REX, מאפשר פיתוח מעכבי קינאז ספציפיים לאיזופורם מדויק נגד סרטן שד טריפל נגטיב. התחילו ביישור העוברים בחריצים של צלחת הזרקה מלאה בתמיסת מלח מאוזנת טרייה 10% של האנק או HBSS. יש לטבול את קצה המחט בתווך, ובמידת הצורך להפעיל פולסי הזרקה להסרת בועות אוויר בקצה לצורך הזרקת העובר יש לחדור לכוריון ולשק החלמון בתנועה אחת ולהפעיל פולס הזרקה.
לאחר הזרקת העוברים האחרים, שטפו אותם לתוך צלחת פטרי חדשה המכילה מדיה HBSS טרי באמצעות בקבוק להשפריץ. אגרו את העוברים שלא הוזרקו לצלחת אחרת. כדי לבצע ניתוח טיפול Z-REX, התחל על ידי חלוקת העוברים המוזרקים לתוך 10 ס"מ צלחות.
בחדר חשוך עם אור אדום, החלף את המדיום ב- 30 מיליליטר של HBSS 10% עם או בלי מיקרומולר אחד של בדיקת REX. לדגור על העוברים ב 28.5 מעלות צלזיוס בחושך. לאחר 30 שעות לאחר ההפריה, להחליף את המדיה בחושך.
לאחר חזרה על הדגירה והחלפת המדיה פעמיים, חשוף את העוברים לאור מנורת UV מחוממת מראש המסתחררת כל 30 שניות. כדי לבצע בדיקה פנוטיפית, הסר את העוברים הלא מופרים או המתים מהצלחת המכילה את העוברים המורדמים. בעזרת מלקחיים חדים, להסיר את כוריון העוברים.
הרכיבו את העוברים על צלחת אגרוז 2% שהוכנה עם תווך HBSS של 10% והתבוננו תחת סטריאומיקרוסקופ. השתמשו ב-ImageJ כדי לספור את מספר הנויטרופילים והמקרופאגים של כל דג. בחר את הבחירה ביד חופשית והקף את הדג כולו, ולאחר מכן בחר באפשרות מצא מקסימה כדי לספור את התאים הפלואורסצנטיים במחקר הנוכחי, עוברים שטופלו ב- Z-REX הדגימו אובדן של נויטרופילים ומקרופאגים.
השפעה זו נעדרה בקבוצות שלא טופלו. מסלול איתות האפופטוזיס לא הופעל בקבוצת Halo-P2A-Keap1 וכתוצאה מכך רמות המקרופאגים והנויטרופילים לא השתנו. תוצאות דומות נצפו גם במוטציה Halo-TEV-Keap1 שלא הגיבה ל-HNE.
ניתוחי PCR כמותיים בזמן אמת הראו ירידה ברגולציה של גנים הקשורים למערכת החיסון ושיפור בוויסות של גנים נוגדי חמצון לאחר Z-REX. צביעת אימונופלואורסנציה הראתה כי למבנה המפוצל P2A היו פי שניים יותר תגי HA מאשר למבנה TeV-fusion, מה שמעיד על רמות ביטוי דומות. רמות הביטוי של הסוג הפראי והמוטנטי Halo-TeV-Keap1 היו דומות גם הן.
בקו הכתבים של נויטרופילים טרנסגניים שטופלו ב-Z-REX, נצפתה גם קולוקליזציה של נויטרופילים וקספז פעיל 3. הדבר החשוב ביותר הוא להגדיר את המסמכים שלך כראוי. הגבלה באמת תשפר את התוצאות שלך.
אימצנו את Z-REX, רעיון לפלטפורמת סינון סמים המכונה Localis-REX. אף טכניקה אחרת עד כה לא הצליחה להשיג ליגנד מקומי ספציפי וריאקטיבי כזה או מיפוי מטרות. זה עזר לנו לפתח תרופות אלקטרופיליות מועמדות לטיפול בסרטן השד.
בהתחשב בחשיבות הגוברת של איתות מקומי בתחומים רבים, סרטן, אימונולוגיה, הזדקנות וכו', Z-Rex, הכלי היחיד המסוגל למפות אירועים מקומיים מכווני ליגנד תגובתי, מבטיח לסייע בתחומים רבים.
