מחקר ארוך טווח ושימוש בחומר בקרה ביולוגית תלויים בזמינות של טכניקות גידול יעילות וחסכוניות, ופרוטוקול זה הוכיח את עצמו כיעיל לגידול טפיל זה. כיום יש עניין עצום בגידול טפיל זה למחקר או לשחרור שדה, והפרוטוקול יועיל למחקר ולשימוש עתידיים ארוכי טווח בחומר הביו-בקרה המבטיח הזה. ייתכן שמשתמשים ראשונים יצטרכו להבין ביולוגיה בסיסית כלשהי של החרקים המעורבים באמצעות קריאת ההפניות הרלוונטיות המופיעות במאמר וכמה פרקטיקות של השיטות.
להכנת הדיאטה המארחת, ראשית, הכינו את החלק הנוזלי של הדיאטה כמתואר בכתב היד. לאחר מכן, הוסיפו 25 עד 30 גרם של מחית אוכמניות לבקבוק ריק של 250 מיליליטר. לאחר מכן, לשפוך את הנוזל לתוך הבקבוקון עם הנוזל רק מכסה את החלק העליון של אוכמניות מחית.
לאחר מכן, לגידול סוזוקי דרוזופילה המארחת, חתכו תחילה חתיכת מגבת נייר סופגת וסובבו אותה במרכז. לאחר מכן, הניחו את החלק האמצעי המעוות של מגבת הנייר בבקבוקון הדיאטה. לשמירה על לחות, השתמשו במים מזוקקים כדי להרטיב את מגבת הנייר ואת הדיאטה.
לאחר מכן, כדי להעביר זבובים בוגרים בוגרים מבחינה מינית, הסר בזהירות את הפקק של בקבוקון מושבת זבובים והפוך אותו לתוך בקבוקון הדיאטה. לאחר שבוע של חשיפה זו, החזיקו את הזבובים בתא סביבתי במשך שלושה שבועות להופעת זבובים. לחשיפת הזחל המארח לטפילים, תחילה הסירו את הזבובים הבוגרים ואת מגבת הנייר מהבקבוקון, והשאירו את ביצי הזבובים והזחלים.
כדי לשמש כמצע גור לזחלים, קפלו מגבת נייר סופגת חדשה והכניסו אותה לבקבוקון. לאחר מכן שאפו שישה זוגות נקבות וזכרים של הטפיל G3 Ganaspis brasiliensis לתוך הבקבוקון ופזרו שכבה דקה של דבש בתחתית פקק הקצף. לאיסוף ואחסון הטפילים, הסירו את המבוגרים לאחר חמישה ימים.
לאחר מכן אחסנו את הבקבוקון בתא הסביבתי במשך 35 יום בתנאים שהוזכרו קודם לכן. עם הופעתם של צרעות בוגרות, לשאוף אותם שלוש פעמים בשבוע. להחזקת הצרעות, מניחים תחילה מגבת נייר לחה אך לא רוויה במים מזוקקים בתחתית בקבוקון Drosophila בגודל 2.5 על 9.5 סנטימטרים רבועים.
לאחר מכן, להעביר כ 60 צרעות לבקבוקון ולסמן את תאריך ההופעה. אחסנו את הבקבוקון בתא הסביבתי. פעמיים בשבוע, פזרו שכבה דקה של דבש על קרקעית פקק הקצף של הבקבוקונים.
ראשית, ארגן גידול בקנה מידה גדול של דרוזופילה סוזוקי על ידי הצבת 1, 500 עד 2, 000 זבובים בוגרים בוגרים מבחינה מינית ביחס מין של 50:50 בכלוב גדול, סרוג, מכוסה רשת. לאחר מכן, הניחו בכלוב צלחת עם כותנה ספוגה במים וארבע עד שש צלחות פטרי עם מדיום דרוזופילה סטנדרטי. פעמיים בשבוע, החליפו את צלחות הפטרי החשופות בטריות.
מניחים כל צלחת פטרי שורצת ללא מכסה בכוס פלסטיק של 800 מיליליטר ומכסים את הכוס ברשת עדינה. לאחר מכן, דגירו את הכוסות בטמפרטורה של 23 מעלות צלזיוס ו-75% לחות יחסית למשך 12 עד 15 ימים. לאחר הדגירה, העבירו את סוזוקי דרוזופילה בוגרת שזה עתה בקעה לכלוב גידול.
לאחר מכן, התחילו להכין את הזחלים המארחים על ידי שטיפת אוכמניות במים קרים למשך דקה אחת והשרו את הפירות באגן מלא בתמיסת אקונומיקה, מדוללת ל-5% למשך שלוש דקות. לאחר מכן, מלאו כלי פטרי באורך תשעה סנטימטרים באוכמניות השטופות. בשעות אחר הצהריים המאוחרות, הכניסו את כלי הפטרי לכלוב הגידול והשאירו אותם למשך הלילה.
למחרת בבוקר, הקישו בעדינות על כלי הפטרי כדי לסלק זבובים מהפירות ולהוציא את הפירות מכלוב הגידול. בינתיים, הכינו כלוב טפילים וכלוב הופעת צרעות עבור הטפיל G1 Ganaspis brasiliensis הטפילי. שני הכלובים צריכים להיות בעלי חוט דק מתחת לתקרה לתליית מזין אחד או יותר.
בכל כלוב, מרחפים בקבוקון Drosophila המכיל מים ואוטמים עם תקע תאית אצטט הפוך מהתקרה כל חמישה עד שבעה ימים, בהתאם ללחות היחסית. מיד לאחר הוצאת אוכמניות שורצות מכלוב סוזוקי דרוזופילה סוזוקי, הכניסו אותן לכלוב הטפילים עם 1, 500 עד 2, 000 צרעות גנאספיס ברזילאיות במשך יומיים עד שלושה. לאחר מכן, אספו את הפירות בכוס פלסטיק של 800 מיליליטר עם נייר סופג בתחתית.
דגירה של הכוס הפתוחה בכלוב ההופעה או ההסתרה ב-21 מעלות צלזיוס ו-65% לחות יחסית למשך 28 ימים לפחות. במהלך השבועות השני והשלישי של הדגירה, בדקו את הכלוב מדי שבוע לאיתור ההסתרה המוקדמת של המארח. כדי להקל על איסוף טפילים עוקב, הסר את הזבובים הבוגרים.
בסוף השבוע הרביעי של הדגירה, לספק מזין ומקור מים לכלוב. אספו כ-10 עד 15% מהצרעות הבוגרות והעבירו אותן לכלוב הטפילים כדי להחליף צרעות ישנות ולא יצרניות. משאר הצרעות של כלוב ההסתרה, יש לאחסן עד 700 מבוגרים ביחס מין של 50:50 עם פלסטיק של 800 מיליליטר המכילה צינור דו-מיליליטר מלא במים ואטום בגליל כותנה דנטלי בתחתית הכוס.
אחסנו את הכוס עם מצב הופעה מסומן בתא סביבתי למשך עד חודש. עבור משלוח טפילים, יש למקם כ -200 מבוגרים בצינור חרוטי 50 מיליליטר. לאחר מכן, שים את כל הצינורות במיכל משלוח מבודד יחד עם חבילות קרח.
פרוטוקול זה הביא לגידול מוצלח בקנה מידה קטן של G3 Ganaspis brasiliensis, חומר טפילי, נגד המזיק החקלאי דרוזופילה סוזוקי במעבדה. ייצור הצאצאים לא הושפע מהבדלים בצפיפות הטפילים ובזמן החשיפה. ניתן היה להשיג גם דור בקנה מידה גדול של G1 Ganaspis brasiliensis, כאשר הייצור החל חמישה שבועות לאחר החשיפה הראשונית לסוזוקי דרוזופילה המארחת.
משבוע 8 עד שבוע 22, ייצור הטפילים הפך פרופורציונלי לכמות הפירות שנחשפו אליהם. חשוב מאוד לשמור על טמפרטורת גידול מתאימה, לשלוט בלחות ולספק תמיד מזון לחרקים בוגרים. ניתן לשפר עוד יותר את השיטות על ידי אופטימיזציה של צפיפויות הגידול של הפונדקאי והפרזיטואיד כדי למקסם את ההתרבות של צרעות ועל ידי בחינת האפשרות לגדל טפיל זה על פונדקאים חלופיים.
