צמיחת תאי הצמח נשלטת על ידי התכונות המכניות של דפנות התאים שלהם. לכן, חשוב להכיר את התכונות הללו באיברים וברקמות שונות של הצמחים. השיטה המוצגת כאן מאפשרת אפיון ביומכני של דפנות תאים לא קבועות ולא מיובשות ברקמות הפנימיות של צמחים צעירים.
התחילו בהכנת הפתרונות והדגימה לחיתוך ויברטום. יוצקים שכבה של ארבעה מילימטרים של 3% אגרוז מומס בתחתית צלחת הפטרי ומניחים לה להתקרר מעט כדי למנוע נזק תרמי לדגימה. מניחים באורך של כחמישה מילימטרים שלוש או ארבע חתיכות של איבר הצמח אופקית על האגרוז.
כעבור 30 עד 60 שניות יופיע סרט דק ומוצק למחצה על גבי שכבת האגרוז הראשונה. לאחר מכן, בזהירות לשפוך שכבה שנייה על גבי. לאחר שהאגרוז מתמצק לחלוטין, חותכים את הבלוק המכיל את הדגימה.
עצבו את הבלוק לפירמידה חתוכה משושה כדי להבטיח את יציבותו במהלך חתכים נוספים. לפני תחילת חיתוך הדגימה עם הוויברטום, הדביקו את הבלוק לשלב הוויברטום עם דבק ציאנואקרילט. מניחים את הבמה בוויברטום, כך שאחת מפינות הפירמידה פונה ללהב הוויברטום ושופכת מים לאמבטיית הוויברטום.
הגדר את פרמטרי החיתוך כמו עובי מקטע, מהירות להב ותדירות רטט וחתוך את הדגימה. בעזרת מברשת עדינה, העבירו את החלק מאמבט המים למגלשת זכוכית והניחו טיפת מים על החלק כדי למנוע את התייבשותו. לאחר בדיקת איכות הקטע תחת מיקרוסקופ אור, בחר את החלק המתאים בעל דופן התא בניצב למישור הקטע.
לאחר מכן שיתקו את החלק למדידות מיקרוסקופיה של כוח אטומי על ידי שפיכת שכבה של מיליליטר אחד של 1% אגרוז מותך על תחתית מכסה צלחת פטרי באמצעות פיפטה. לאחר שהאגרוז התמצק, הסר עודפי מים מהקטע על ידי הבאת נייר סינון לקצהו. העבירו בזהירות את החלק מהשקופית למרכז מכסה צלחת פטרי באמצעות מברשת.
לאחר מכן הוסיפו בזהירות 1%agarose סביב הקטע באמצעות פיפטה של 20 מיקרוליטר ויוצקים את המים או תמיסה אחרת למיקרוסקופיה של הכוח האטומי לתוך מכסה צלחת פטרי עם החלק המשותק. להנחות את הדגימה תחת מיקרוסקופ הכוח האטומי באמצעות המיקרוסקופ האופטי. לחץ על כפתור הגישה ולאחר מכן על כפתור הנחיתה כדי לגשת לדגימה במצב מגע עם נקודה מוגדרת של ננומפר אחד.
לחץ על כפתור הסריקה ולאחר מכן על כפתור האזור. בחר את גודל השטח של 50 מיקרומטר על 50 מיקרומטר לסריקה. לחץ על כפתור Move Probe ובדוק את כל אזור הסריקה על ידי הזזת הסורק מעליו ומציאת הנקודה הגבוהה ביותר בהתבסס על מידת הבליטה של הסורק.
פתח את הכרטיסיה גישה. לאחר מכן לחץ על להסיר כפתור כדי לסגת מהמדגם. באמצעות הנקודה הגבוהה ביותר כיעד, לחץ על לחצן נחיתה כדי להתקרב שוב לדוגמה.
לאחר מכן בדוק שוב את המשטח על ידי לחיצה על ה- Move Probe כפתור והזזת הסורק מעליו. הגדר את קצב הסריקה ל-0.5 הרץ, והגדר את גודל הסריקה ל-50 מיקרומטר על 50 מיקרומטר ואת נקודת הסריקה ל-64 על 64. לחץ על כפתור ההפעלה וסרוק כדי לבדוק את פני השטח של הדגימה וזה זיהום אפשרי עם agarose.
לאחר לחיצה על הלחצן On, בחר את מצב HDPlus בתפריט הנפתח בחלון הראשי של התוכנית והגדר את נקודת ההגדרה ל- 0.1 ננו-אמפרים בחלון התוכנית הראשי. בכרטיסייה הראשית של חלון HD, הגדר את פרמטרי הסריקה המתאימים לדוגמה הנחקרת. לאחר מכן פתח את הכרטיסייה רעשים בחלון HD והזן את תדר התהודה של cantilever.
פתח את הכרטיסייה Quant של חלון HD והזן את IOS, קשיחות קשיחות, רדיוס קצה וזווית. בחר את המודל של איש קשר, אשר ישמש לחישובים בהתאם לגיאומטריה קצה. לאחר מכן, פתח את הכרטיסייה סריקה של חלון HD ובחר את האותות, כמו גם את הכיוון שבו האות נרשם.
סמן את כוח נפח תיבה כדי לקבל תיעוד של כל עקומות הכוח ולחץ על כבוי כפתור בחלק העליון של חלון התוכנית הראשי כדי להפעיל את לולאת המשוב לחץ על כפתור ליבת הפאזה בחלון HD הראשי כדי לתקן את הרגישות של המערכת האופטית. הכרטיסייה Versus Time של חלון ה- HD הראשי מציגה את הפונקציה של אות DFL לעומת זמן בזמן אמת. בחר את החלקים של פונקציה זו שישמשו לקביעת רמת הבסיס ולהתאמת מודל איש הקשר לחישובים נוספים.
כעת, הגדר את ערך נקודת הסריקה ל- 256 על ידי 256 בחלון הראשי של התוכנית. לאחר מכן, הגדר את קצב הסריקה ל -0.2 הרץ ולחץ על הלחצן הפעל כדי לסרוק את הדגימה. לאחר הפסקת הסריקה, לחץ על על כפתור ההפעלה בחלק העליון של החלון הראשי כדי לכבות את לולאת המשוב.
בחר מצב איש קשר בתפריט הנפתח, פתח את הכרטיסייה גישה ולחץ על הלחצן הסר כדי לסגת מהמדגם. לחץ על נתונים כפתור כדי לפתוח את תוכנת הניתוח ולשמור את הפלט. פתח את הקובץ שנשמר בתוכנת הניתוח.
בחר את מסגרת עוצמת הקול של כוח HD. החזק את מקש Control לחוץ ובחר מסגרת חזותית אחת המתקבלת באותו כיוון סריקה. לחץ על הלחצן טען מפה חיצונית כדי לראות היכן ממוקמים קירות התא.
בדוק את ערכי הנוקשות של InvOptSens ו- cantilever בכרטיסייה הראשית. פתח את הכרטיסיה נוסף ובדוק את הפרמטרים של העצה ואת מודל איש הקשר. לחץ על נקודות שונות על דפנות התא במסגרת החזותית ובחר רק את העקומות המתוארות היטב על ידי המודל.
האזורים הלבנים במפת המודולוס תואמים הערכת יתר שגויה של המודולוס של יאנג עקב הסורק שהגיע לגבולו בכיוון Z. תמונה זו אינה נוחה לשימוש כמפה חיצונית לבחירה נוספת של עקומות כוח משביעות רצון. עם זאת, מפת האות DFL המוצגת מימין מתאימה יותר כאן.
מכשירים שונים עשויים להתייחס לאותות DFL כאל אותות סטייה או שגיאה. הסורק שהורחב במלואו תוך ניסיון להגיע לתחתית הדגימה עלול לגרום למדידות שגויות ואף לסריקות מופרעות. ניתן לבדוק את נוכחות האגרוז בעת קבלת הסריקה הראשונה במצב מגע שכן קירות התא וחלק מתחתית התא נראים בסריקות כאלה.
עם זאת, במקרה של אימוביליזציה לא מדויקת, פני השטח עשויים להיות מכוסים אגרוז, אשר מסווה את הטופוגרפיה הדגימה. מתוך ארבע עקומות כוח שונות שנרשמו בנקודות שונות של אותו דופן תא, העקומה שנרשמה ב-0.1 לא מראה שום קו בסיס, כלומר אין הפרדה של קצה הכנף מדופן התא. העקומה שנרשמה ב-0.3 מראה כתף בחלק המתקרב המעידה על כיפוף דופן התא.
נקודות שתיים וארבע מציגות עקומות כוח משביעות רצון עם ערכי מודולי דומים. הכנה לדוגמה ובדיקה דורשים תרגול, אבל זה יכול להיות שולט. חלק מכריע בפרוטוקול זה הוא לסנן עקומות המתקבלות.
אל תסתמכו על מודולי, שחושבו באופן אוטומטי. ניתן להשתמש באותה טכניקה כדי למדוד את כוחות ההידבקות או את פיזור האנרגיה. זה גם יכול להיות חשוב לתיאור של ויסקוזה או התנהגות ויסקואלסטית של חומרים מסוימים.
