מודל הישנות גליובלסטומה לאחר כריתה לחקירות הידרוג'ל טיפוליות

הישנות הגידול היא הגורם העיקרי לכישלון משטרי של כריתה כירורגית של GBM. הפרוטוקול שלנו מספק מודל ייחודי להישנות GBM למחקרי טיפול מקומיים יעילים בהישנות, לאחר מחקר. טכניקה זו מספקת שיטה נוחה וישימה לבניית מודל הישנות GBM לאחר כריתה, וניתן להשתמש בה במחקרים שונים על הישנות GBM.

התחל בהכנת החיה. חותכים את הקרקפת של העכבר כסנטימטר אחד לאורך קו האמצע במצח הימני עם מספריים אופתלמיים. כוונן את המנגנון הסטריאוטקסי כדי להבטיח שתפר עצם ההרינג ונקודת הפונטנל הקדמית ממוקמים באותה רמה.

בעזרת צמר גפן טבול בסגול גני, מסמנים נקודה במילימטר אחד מלפנים, 1.8 מילימטר ימינה ושלושה מילימטרים למטה מהפונטנלה הקדמית. קדח את הנקודה באמצעות מקדחה גולגולתית זעירה בקוטר מילימטר. צור נקבובית בקוטר של כמילימטר אחד ובעומק של מילימטר אחד.

הסר את נוזל עמוד השדרה המוחי המופרש באמצעות צמר גפן סטרילי. לאחר מכן, לשאוף חמישה מיקרוליטר של השעיית תאי הגידול עם מזרק. יישרו את קצה המחט של המיקרומזרק במאונך עם חור הקידוח בגולגולת והכניסו עד שקצה המחט ייכנס למישור הגולגולת למשך שלושה מילימטרים.

לאחר מכן, למשוך את המחט על ידי 0.5 מ"מ. פתח את המזרק והזריק את הפתרון במהירות של מיקרוליטר אחד לדקה. שמור על המחט במשך 10 דקות לאחר ההזרקה.

לאחר מכן, משכו את המיקרומזרק באיטיות ולחצו על נקודת ההזרקה בעזרת כדור צמר גפן סטרילי ויבש. תפרו את הקרקפת בתפר כירורגי 10-0 שאינו נספג וחיטאו את החתך. לפקח על בריאותו של בעל החיים ולשמור אותו בתנאים חמים.

לאחר שהעכבר מתעורר, העבר אותו בחזרה לכלוב הדיור. 10 ימים לאחר נשיאת הגידול, לזהות את הגידול המושתל. לשם כך, להזריק את העכבר intraperitoneally עם אשלגן fluorescein, ו 11 שניות מאוחר יותר, תמונה העכבר עם מערכת הדמיה bioluminescent in vivo.

הפרידו את רקמת הקרקפת והגולגולת ובדקו את חור הקידוח המשמש לבניית מודל GBM תוך גולגולתי אורתוטופי. אם החור נרפא, זהה את החור באמצעות מכשיר סטריאוטקטי וקדח את החור כפי שהוצג קודם. הרחב את הקוטר כולו לחמישה מילימטרים עם מקדח גולגולת והסר את נוזל השדרה המוחי המופרש עם צמר גפן סטרילי.

מקדו את המיקרוסקופ בראש העכבר והתאימו את ההגדרות כדי לוודא שחור הקידוח ממוקם במרכז שדה הראייה. חותכים את קרומי המוח עם מספריים. לאחר מכן, להסיר חלק מרקמת הגידול עם microcurette ו microscalpel מתחת למיקרוסקופ.

עצור את הדימום עם גזה סטרילית ולשטוף את הזריקה עם מלוחים פיזיולוגיים סטריליים. באמצעות מזרק של מיליליטר, להזריק 10 מיקרוליטר של הידרוג'ל זמין מסחרית לתוך חלל כריתה. באמצעות פרוטוקול זה, תאי GBM הושתלו במוחם של העכברים וצמיחת הגידול נבדקה על ידי הדמיה ביולומינסנטית in vivo ביום העשירי.

הכריתה והזרקת ההידרוג'ל בוצעו ביום ה-11. גודל הגידולים במודל GBM relapse post-resection היה קטן משמעותית מהגידולים במודל GBM התוך-גולגולתי האורתוטופי. מעקב אחר שאריות הגידול ביום ה-25 הראה את הישנות הגידולים.

צביעת H&E אישרה כי מודל הישנות GBM לאחר כריתה נבנה בהצלחה וכי גידולים שיוריים חזרו באופן משמעותי לאחר הכריתה. הדבר החשוב ביותר לזכור בהליך זה הוא לחתוך את קרומי המוח ולהסיר חלק מרקמת הגידול מתחת למיקרוסקופ.