אנו מתארים את הטכניקה האופטימלית להזרקה תוך גולגולתית של תאי גליובלסטומה שמקורם ב- GEM למוח עכבר כשיר חיסון וכתוצאה מכך גידולים המשחזרים תכונות מפתח של גליובלסטומה אנושית. טכניקה זו להזרקה אורתוטופית של תאי TRP שמקורם ב- GEM מניבה תוצאות ניתנות לשחזור, ניתנות להרחבה ועקביות עבור גידולים שמקורם בקליפת המוח, אך שומרים על הפולשנות של גידולי GEM. גידולי מוח מסוג גליובלסטומה של עכברים מפגינים צמיחה אגרסיבית ופולשים לפרנכימת המוח שמסביב.
לכן, ניתן להשתמש בו כדי להעריך טיפולים שעשויים לדכא חדירת גידול והגירה בחולים. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם אישית עבור מודלים אחרים של גידולי מוח, וירוסים, טיפולים או מותאם להזרקה לאזורי מוח שונים עם התאמות של קואורדינטות סטריאוטקסיות. מי שידגים את ההליך יהיה דבון אטקינסון, עמית מחקר מהמעבדה שלי.
כדי להתחיל, מקם מגיני משטח מתחת למנגנון הסטריאוטקסי ועל משטח העבודה. חבר את צינור הוויניל ממכונת ההרדמה ליציאה הפנימית של פלטפורמת ההרדמה בגז של המנגנון הסטריאוטקסי, וצינור נוסף ליציאה החיצונית שלו. חבר את הצג הדיגיטלי למקור חשמל ולמנגנון.
לאחר מכן, חבר את משאבת המיקרו לזרוע המניפולטור של המנגנון לאחר חיבור בקר משאבת המיקרו למקור הכוח. הגדר את משאבת המיקרו ל -5.6 ננוליטר לשנייה. חבר את משטח החימום של העכבר לבקר הטמפרטורה ולמקור חשמל.
טען בחזרה מזרק מדויק בעל 30 מד עם תערובת תאי מתיל מתילצלולוז על ידי הימנעות מבועות. לאחר החדרת הבוכנה, חברו את המחט ולחצו על הבוכנה עד שתערובת התאים הטעונה צונחת דרך המחט. נקו את המחט עם פד להכנת אלכוהול 70%.
לאחר חיבור המזרק המדויק למשאבת המיקרו, סובב את זרוע המניפולטור הרחק מהבמה לפני הנחת העכבר כדי למנוע תזוזה של מחט המזרק. העבירו את העכבר המרדים למכשיר הסטריאוטקסי והצמידו אותו לקונוס האף על ידי הנחת השיניים העליונות על תמיכת חרוט האף. לאחר הידוק חרוט האף עם ידית, צבטו בוהן כדי לבדוק רפלקסים כדי להבטיח הרדמה נאותה.
לאחר מכן הכנס את מוטות האוזניים והדק את הידית כדי לאבטח את הראש. החל משחת עיניים כדי לשמן את העיניים בתנאים מרדימים. להזריק buprenorphine SR משכך כאבים תת עורית, ולהציב בדיקה עכבר רקטלי כדי לפקח על הטמפרטורה הפנימית.
לעקר את שדה הניתוח באמצעות עיגולים חיצוניים, לסירוגין בין פילינג כירורגי אתנול שלוש פעמים. משוך את העור המתוח עם מלקחיים והשתמש בלהב אזמל כדי לבצע חתך באורך של כסנטימטר אחד בין העיניים. להזרקת תאים, להחזיר את זרוע מניפולטור עם מזרק מחובר לעכבר.
לאחר הידוק הידיות, הזז את המזרק באמצעות ידיות X ו- Y במישור האופקי והרכיב אותו מעל הברגמה. הנמיכו את המחט, באמצעות ידית Z, כדי לאשר את מיקום הברגמה, וכוונו את מסוף הקריאה הדיגיטלי לאפס. לאחר מכן הזז את המחט למיקום הרצוי, כמתואר בכתב היד, באמצעות ידיות X ו- Y והקריאה הדיגיטלית המתאימה, והשתמש בידית Z כדי להזיז את המחט לפני השטח של הגולגולת.
נקב חור בגולגולת באמצעות מזרק 1 מיליליטר עם מחט 25 מד מחובר. סובב בזהירות את זרוע המניפולטור הצידה, תוך הנחת שיפוע המחט לכיוון מזרק דיוק 30 מד. לאחר שזרוע המניפולטור עם מחט המזרק המדויקת הטעונה ממוקמת מעל החור, יישרו את קצה המחט עם החור, והשתמשו בידית Z כדי להוריד את המחט לתוך הדורה של המוח.
לאחר הגדרת קונסולת הקריאה הדיגיטלית לאפס, הנמיך את המחט 1 מילימטר עם ידית Z, והמתן דקה אחת. ברגע שמגיעים לעומק של 2 מילימטר, עצרו את משאבת המיקרו, וודאו שהמשאבה נעצרת כאשר הוזרקו 2 מיקרוליטר של תרחיף תאים. כדי להסיר את המחט מהגולגולת, הרימו אותה מילימטר אחד והמתינו דקה.
לסגירת פצע, באמצעות קצה עץ של מוליך כותנה, לקחת חתיכת שעוות עצם ולעצב אותו לתוך חרוט. לאחר הנחת השעווה לתוך הפתח בגולגולת, לדחוף אותו לתוך החור. השתמש במלקחיים מעוקרים בחרוזים כדי להמיס את השעווה שנותרה על הגולגולת.
ברגע שהוא הופך חלק, להוסיף שתי טיפות של תמיסת bupivacaine הרדמה לתוך החתך, ולמשוך את הקצוות של העור יחד, באמצעות מלקחיים. לאחר משיכת העור מתוח, באמצעות קליפס פצע אחד או שניים, לסגור את העור, להניח את העכבר בכלוב התאוששות נקי על כרית חימום באזור ללא טיוטה, ולבחון מקרוב את העכבר. סריקות MRI שבועיות הראו עלייה בנטל הגידול במוח, ומדידות נפח הגידול.
בדיקת נפח הגידול ב-MRI גילתה חוסר דיכוי צמיחת הגידול גם לאחר הקרנות, והישרדותם של עכברים מטופלים לא גדלה. גידולי GBM במודלים סינגניים נראו כגדלים באגרסיביות ופרצו את הגולגולת על ידי נקודת הקצה הסופית. אם צמיחה מחוץ לגולגולת נצפתה בהדמיה לאחר השתלת התא, הדבר מצביע על דליפת תאים במהלך תהליך ההזרקה, ויש לנקוט בזהירות רבה יותר במהלך נסיגת מחט ההזרקה.
היסטופתולוגיה של גידולי GBM אורתוטופיים TRP אישרה את נוכחותה של אסטרוציטומה בדרגה 4, כולל שחזור של התכונות הייחודיות בגידולים כגון pseudopalisading ונמק. היה מדויק בעת הגדרת נקודת האפס בברגמה כדי להבטיח קואורדינטות הזרקת תאים נכונות. הורדה והרמה של המחט במוח חייבת להיות איטית כדי למנוע טראומה וזרימה חוזרת.
לאחר הזרקת תאי הגידול, ניתן להשתמש בסריקות MRI שבועיות כדי לקבוע את גודל הגידול הבסיסי לפני תחילת הטיפול ולדמיין את השינוי בעומס הגידול במוח.
