זרקור המחבר: התמודדות עם פערי רגולציה במחקרים מולקולריים על ידי כימות וקטורים נגיפיים במטריצות מורכבות

הפרוטוקול שלנו מכמת וקטורים נגיפיים הקשורים באדנו במטריצות מורכבות. זיהוי וכימות מדויקים חיוניים להערכת הביצועים שלהם בניסויים קליניים. פרוטוקול זה מבקש באופן ספציפי למלא את הפערים הרגולטוריים הנוכחיים בתכנון מחקרים מולקולריים תואמי שיטות מעבדה טובות.

כחלק מפיתוח וקטורים ויראליים, רשויות רגולטוריות דורשות הערכה של נשירה ביולוגית וקטורית. ddPCR היא טכנולוגיה מבטיחה להערכה זו מכיוון שהיא מאפשרת כימות מדויק ללא שימוש בעקומה סטנדרטית ורגישות משופרת בהשוואה ל- qPCR. כימות מדויק במטריצות המורכבות בהן נתקלים במסגרות קליניות, כגון דמעות, יכול להיות מאתגר לאימות עקב הפרעות ואינהיביציה של PCR.

כמויות דגימה קליניות מוגבלות יכולות גם להגביל את היכולת לזהות אירועים נדירים אם הבדיקה אינה רגישה מספיק. הגישה שלנו מפתחת מסגרת מבוססת ddPCR הניתנת לחזרה ולהתאמה כדי לאמת בדיקות לשימוש במחקרים מוסדרים. שיטה זו מונעת שלב ספציפי של מיצוי DNA, מאפשרת אימות יעיל יותר ומספקת קריטריונים ברורים שמולם ניתן להעריך את ביצועי הבדיקה כדי להבטיח עמידות וחזרתיות.

לפרוטוקול זה יש פוטנציאל להיות מיושם בכל מחקר של שפיכת וקטורים ויראליים, לא רק בזיהוי AAV בדמעות, כפי שמוצג כאן. היא יוצרת מסגרת חזקה וחוזרת על עצמה שעליה ניתן לפתח מספר תוכניות מותאמות למטרה ומוסדרות.