Determinazione del suolo-infezione trasmessa elminti Stato e la forma fisica dei bambini in età scolare

Riepilogo

L'infezione cronica da elminti suolo trasmesse (STHS) provoca malassorbimento, arresto della crescita, e di sprecare nel bambino in crescita. Quindi, è plausibile che queste infezioni anche ridurre la forma fisica dei bambini. Qui, noi visualizziamo due tecniche per la diagnosi di STHS e di 20 metri di test run navetta per valutare la forma fisica dei bambini.

Abstract

Suolo-trasmesse da elminti (STH), le infezioni sono comuni. In effetti, più di 1 miliardo di persone sono colpite, soprattutto nel mondo in via di sviluppo dove la povertà e il comportamento prevale l'igiene, l'approvvigionamento idrico, servizi igienico-sanitari e sono spesso carenti ^1,2. Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, e le due specie hookworm, Ancylostoma duodenale e Necator americanus, sono le più diffuse STHS ^3. L'onere stimato globale a causa di malattia hookworm, ascariasis, e trichuriasis è 22.1, 10.5, e 6,4 milioni di disability-adjusted anni di vita (DALY), rispettivamente ^4. Inoltre, si stima che 30-100000000 persone sono infettate con Strongyloides stercoralis, la specie più trascurate STH di rilevanza mondiale che logicamente anche provoca un considerevole impatto sulla salute pubblica ^5,6. Multiple-specie infezioni (ad esempio, STHS diverse nutriti in un singolo individuo) sono comuni, e le infezioni sono state lin ked alla produttività abbassato e quindi prospettive economiche dei paesi in via di sviluppo ^1,3.

Per la diagnosi di STHS comuni, l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) raccomanda l'Kato-Katz tecnica di ^7,8, che è un metodo relativamente semplice per determinare la prevalenza e l'intensità di tali infezioni. Facilita la ricerca di uova di parassiti che i soggetti infetti passano nelle loro feci.

Per quanto riguarda la diagnosi di S.stercoralis, attualmente non esiste strumento semplice e preciso disponibile. La tecnica Baermann è il metodo più largamente utilizzato per la sua diagnosi. Il principio alla base della tecnica è che le larve Baermann attiva S.stercoralis migrare su un sistema di illuminazione campione fresco di feci come le larve sono phototactic ^9. Richiede materiali di laboratorio meno sofisticate e meno tempo rispetto ai metodi di coltura e immunologici ^5. t "> patologie associate a infezioni da STH gamma di sintomi acuti, ma comune, come dolore addominale, diarrea, prurito e, di sintomi cronici, come l'anemia, sotto-e malnutrizione, e deficit cognitivo ^10. Poiché i sintomi sono generalmente aspecifici e sottile, che spesso passano inosservati, sono considerati una condizione normale di individui affetti, o sono trattati come sintomi di altre malattie che potrebbero essere più comune in un determinato contesto. Quindi, non si può escludere che il vero peso delle infezioni STH è sottovalutato da una valutazione basandosi su strumenti di auto-dichiarati segni e dei sintomi è di solito il caso in ricerche basate sulla popolazione.

Alla fine del 1980 e all'inizio del 1990, Stephenson e colleghi hanno evidenziato la possibilità di infezioni da STH abbassando la forma fisica dei ragazzi di età compresa tra 6-12 anni ^11,12. Questa linea di ricerca scientifica sono state accelerate di recente ^13,14,15. Il 20 metri (m) di esecuzione dei test è stato messo a punto un servizio navettad convalidato da Léger et al. ¹⁶ e viene utilizzato in tutto il mondo per misurare la capacità aerobica dei bambini ^17. Il test è facile da standardizzare e può essere effettuata ovunque un 20-m lungo corso e di marcia a piatto e una sorgente audio sono disponibili, rendendo il suo uso attraente in risorse limitate impostazioni ^13. Per facilitare e standardizzare i tentativi di valutare se le infezioni STH hanno un effetto sulla forma fisica dei bambini in età scolare, presentiamo metodologie per la diagnosi di infezioni da STH o idoneità misura fisica che sono semplici da eseguire e ancora, fornire risultati accurati e riproducibili. Ciò contribuirà a generare nuove prove per quanto riguarda l'impatto sulla salute delle infezioni STH.

Protocollo

1. Kato-Katz Tecnica

1. Posizionare uno standard Kato-Katz modello con un foro per lo svolgimento di 41,7 milligrammi (mg) di feci su un vetrino da microscopio.
2. Scoop 2-3 grammi (g) di un campione fresco di feci su un pezzo di giornale o un foglio di alluminio, e premere un pezzo di filo o di maglia di plastica sulla parte superiore per setaccio esso.
3. Con una spatola di plastica, raschiare il materiale setacciato largo della maglia e riempire completamente il foro nel Kato-Katz modello con esso. Per rimuovere i residui di materiale fecale, livellare il contenuto del foro con la spatola.
4. Verticale rimuovere la mascherina senza disturbare il materiale fecale ora aderente al vetrino da microscopio. Il modello e spatola possono essere puliti in acqua con detergente, e riutilizzati.
5. Posizionare un pezzo di cellophane, pre-imbevuto di glicerina-malachite soluzione di verde per almeno 24 ore (h), sul campione fecale sul vetrino da microscopio.
6. Per diffondere il materiale fecale in uno striscio di spessore, premere delicatamente un panno pulito microdiapositiva portata contro la diapositiva campione, distribuire uniformemente il materiale in un cerchio di diametro leggermente inferiore alla larghezza del vetrino da microscopio.
7. Lasciare il vetrino per cancellare per 30-60 minuti (min), durante la quale i vetrini devono essere tenuti lontano dalla luce diretta del sole. Poi, sistematicamente esaminare lo striscio spesso sotto un microscopio ottico (40-100x ingrandimento). Contare il numero di uova STH e stratificare loro per specie (cioè, A.lumbricoides, T.trichiura e anchilostomi). Di nota, uova di elminti altri (ad esempio Schistosoma mansoni) possono anche essere rilevate da questo metodo e dovrebbero essere contati e registrati separatamente.
8. Per ottenere una stima standardizzata dell'intensità di infezione, convenzionalmente espressa come numero di uova per grammo di feci (EPG), moltiplicare il numero di uova da 24 (24 x 41,7 mg ≈ 1 g).

2. Baermann Tecnica

1. Allestito uno stand che può contenere un bicchiere imbuto e collegare un tubo di gomma, chiuso spiritoha clip, sul fondo dell'imbuto.
2. Collocare un setaccio o un pezzo di schermo di filo a forma di cono, nell'imbuto e strato con una garza medica.
3. Riempire l'imbuto con acqua del rubinetto e garantire che l'intero set-up non perde.
4. Scoop 20-30 g di feci fresche sul centro della garza medica e assicurarsi che sia completamente immerso in acqua. Aggiungere più acqua se necessario. Piegare la garza medica sul campione.
5. Dal basso, brillare di luce artificiale al imbuto per 2 ore.
6. Drenare 50 millilitri (ml) della porzione inferiore dell'acqua nell'imbuto in un tubo da centrifuga delicatamente rilasciando la clip sul tubo di gomma.
7. Centrifugare l'acqua raccolta a 600 xg (forza centrifuga relativa) per 5 min e con attenzione versare il sopranatante senza disturbare il sedimento. Conservare le ultime gocce nel tubo.
8. Risospendere le 2 gocce di sedimento e pipettare della soluzione su un vetrino da microscopio ed esaminare il vetrinoal microscopio ottico (ingrandimento 40x per il rilevamento e 100-400x di ingrandimento per la conferma specie). Larve di primo stadio (L1) di S. stercoralis sono vivi e attivamente muoversi sotto il microscopio.

3. 20-m Shuttle Test Run

1. Misura 20 m di percorso piatto e dritto in esecuzione e lo contrassegna con coni.
2. Aiuta il partecipante al test indossare un cardiofrequenzimetro al polso e il trasmettitore corrispondente attorno al torace ^18. Questa apparecchiatura permette la frequenza cardiaca del partecipante a essere misurato prima e dopo la prova e quindi controlla che il partecipante ha esercitato sforzo massimo.
3. Chiedere ai partecipanti di correre avanti e indietro sul campo, seguendo il ritmo della pre-registrati i segnali sonori che delimitano 20 m giri. Iniziando con una velocità di marcia di 8,5 chilometri all'ora (km / h), la frequenza dei segnali indicativi 20-m aumenta intervalli di un equivalente di 0,5 km / h ogni min.
4. Garantire °al partecipante inizia un nuovo intervallo di 20 m ogni volta che viene emesso un segnale e termina prima che il segnale successivo arriva.
5. Arrestare il partecipante se lui / lei non riesce a seguire il ritmo per due consecutivi di 20 m intervalli.
6. Registrare la massima velocità di marcia indicato per l'ultimo intervallo che il partecipante ha completato completamente, insieme con l'età e il sesso del partecipante.
7. Verificare che la frequenza cardiaca raggiunta al termine della prova è la frequenza cardiaca massima del bambino ^19. Se la frequenza cardiaca non è raggiunto, il bambino potrebbe non aver esercitato il massimo sforzo, e quindi il test deve essere ripetuto.
8. Stimare la capacità aerobica massima _(VO2 max) del partecipante, utilizzando un'equazione portata avanti da Léger e collaboratori: VO ₂ max = 31,025 + 3,238 * velocità (in km / h) - 3,248 * età (in anni) + 0,1536 * velocità (in km / h) * età (in anni).

4. Risultati rappresentativi

In termini diDiagnosi STH con la tecnica Kato-Katz, caratteristiche uniche delle uova di elminti diverse consentire l'individuazione della maggior parte delle specie ^20. Le uova di A.lumbricoides (circa 45-75 micrometri (micron) di lunghezza e larghezza 35-50 micron, Figura 1) presentano pareti guscio più spesso rispetto alle uova di T.trichiura (Figura 2) e hookworm (Figura 3). Un uovo fecondato di A.lumbricoides (figura 1) ha un cappotto esterno albuminosa, che lo fa apparire dorato, mentre un uovo non fecondato non ha questa cappotto esterno ed è leggermente allungata e più grande generale. Le uova di T.trichiura (circa 50 micron di lunghezza e 22 micron di larghezza, Figura 2) sono allungate e sono distinti spine polari. Hookworm uova (circa 64-76 micron di lunghezza e 36-40 micron di larghezza, Figura 3), invece, ha una parete molto sottile, seguito da un anello libero intorno un cluster denso di cellulenel centro dell'uovo.

S.stercoralis L ₁ larve (Figura 4) sono circa 180-380 micron di lunghezza e ha una cavità buccale molto breve. Un distinto primordium genitale (evidenziata con una freccia blu in figura 4) può essere osservato e la coda delle larve (indicato da una freccia rossa in figura 4) ha una estremità affilata.

Come il vero impatto delle infezioni STH sulla forma fisica dei bambini è ancora in discussione ^13,14,15, non ci sono risultati rappresentativi per il loro impatto, a questo punto. Interpretazione dei risultati 20-m run navetta prova può essere eseguita in vari modi. La forma fisica dei bambini possono essere confrontati tra i soggetti infetti e non infetti, che sono simili in termini di età e sesso, altre condizioni di salute potenzialmente rilevanti, lo stato socio-economico, e le abitudini culturali. Questo può essere fatto in una sezione in cui il rilevamento ^13,14,15Stato di infezione STH e forma fisica dei bambini infetti e non infetti sono valutati in un punto particolare momento. La forza delle prove sarà più alto quando si segue un disegno randomizzato e controllato in cui viene valutata l'idoneità fisica dei bambini in età scolare, prima e dopo anthelminthic / placebo trattamento, consentendo sia la valutazione a breve e lungo termine. Si può inoltre cercare di identificare una possibile relazione dose-risposta tra l'intensità delle infezioni da STH e forma fisica e confrontare i diversi livelli di multiparasitism ¹ con la forma fisica. Nel lavoro presentato da Yap e collaboratori ^15, idoneità fisica, come rappresentato da VO ₂ max, è risultata essere significativamente ridotta nei bambini con infezione da T.trichiura rispetto ai bambini che non sono stati infettati con T.trichiura (Figura 5) .

Figu re 1. immagini microscopiche di uova fecondate A.lumbricoides: (A) e non fecondate (B) sotto ingrandimento 500x. Barra della scala = 50 micron.

Figura 2. Immagine microscopica di un uovo T.trichiura sotto ingrandimento 500x. Bar Scala = 50 micron.

Figura 3. Immagine microscopica di un uovo di hookworm sotto ingrandimento 500x. Barra della scala = 50 micron.

Figura 4. Immagine microscopica di un L S.stercoralis ₁ larva sotto ingrandimento 250x. Le frecce indicano la coda (rosso) e genitale primordio (blu). Barra di scala = 100 micron.

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Figura 5. Grafico mostra il livello di forma fisica dei bambini con infezione da T.trichiura rispetto al livello di forma fisica dei bambini non infettati con T. trichiura.

Discussione

I tre protocolli descritti in questo documento sono stati testati ed eseguito nella parte sud-ovest della provincia dello Yunnan, Repubblica popolare cinese tra i membri della minoranza etnica Bulang ²¹ e in diverse parti dell'Africa ^6,13,14.

Ci sono diversi modelli disponibili per il Kato-Katz tecnica. Ogni distinto foro-size consegnerà una quantità distinta di materiale fecale. Per il calcolo delle EPG, è quindi necessario conoscere l'unità del modello, in...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Kato-Katz kit [400 modelli di plastica con un foro di 6 millimetri (mm) (diametro) in un modello di spessore 1,5 mm; 400 spatola di plastica a 20-m ruolo di schermo di nylon 80 maglia, un 20-m ruolo di cellophane idrofilo, 34 micron di spessore.]	Vestergaard Frandsen		Si prega di notare che la glicerina-malachite soluzione di verde non è inclusa in questo kit, ma possono essere acquistati da qualsiasi fornitore di prodotti chimici.
Imbuto di vetro [circa 8 centimetri (cm) di larghezza e 6 cm di profondità]			L'imbuto di vetro per la tecnica Baermann dovrebbe essere in grado di contenere circa 60 mL di acqua. Thdimensioni e del tubo di gomma e garza dipende dal tipo di imbuto di vetro utilizzato.
Microscopio biologico	Olimpo	CX21LED/CX21
Centrifuga	Shanghai Medical Instruments Group	80 - 2T
Pre-registrati segnali	Bitworks design	Squadra Bleep Test Versione 1.3.1	applicazione iPhone
Cardiofrequenzimetro	POLAR	FT1	Guarda e trasmettitore