<p> Vorrei ringraziare Mike Dewey dal Centro Peromyscus patrimonio genetico per le sue informazioni preziose, la pazienza e la conoscenza sulla riproduzione dei roditori. </p>

<p class="jove_title"> Inseminazione artificiale </p><p class="jove_content"> L&#39;inseminazione artificiale è usato al posto di accoppiamenti naturali per aumentare le probabilità che tutte le femmine hanno avrà una gravidanza. 2 maschi è stato utilizzato per ogni 1 femmine superovulated o una femmina noti per essere in estro. L&#39;epididimo caudae da maturare topi maschi sono stati collocati in una sospensione di latte 9% e affettato aperto con 18 aghi di calibro. Lo sperma è stato permesso di nuotare liberamente per qualche minuto e poi il epididimi sono state prese dalla miscela. La sospensione è stata valutata con un microscopio per la confluenza e di spermatozoi mobili. Un brusco AWG 22 ago 1 ½ pollice di lunghezza è stato utilizzato per amministrare lo sperma. A 120 piegare ° era collocato circa 3 / 4 <sup>°</sup> verso il basso l&#39;ago. L&#39;ago è stato inserito nella vagina fino alla curva e 0,025 - 0.05mls iniettato. Se un assistente è utilizzato per contenere la femmina nella posizione appropriata, l&#39;uso di anestetici non è necessario. </p><p class="jove_step"> Preparazione </p><ol><li> Utilizzare 4 maschi per 6 femmine </li><li> Euthanize maschi al vivaio </li><li> Preparare circa 5 ml di latte 9% di latte in polvere </li><li> Mettere 1,5 ml in piccole piastre di Petri </li><li> Tagliare dell&#39;Epididymus e vasi deferenti </li><li> Metti in 1,5 ml del 9% latte </li><li> Usando due aghi calibro 18, e con lunghi movimenti di taglio con aghi, fetta aperto dell&#39;Epididymus e deferenti per rilasciare gli spermatozoi </li><li> Estrarre rimasto tessuti e verificare la presenza di spermatozoi al microscopio </li></ol><p class="jove_step"> Iniezione </p><ol><li> Utilizzare l&#39;ago smussato a 120 ° angolo </li><li> Tenete il mouse in mano e iniettare miscela. Se a disagio con una persona in possesso e l&#39;iniezione, due persone possono essere utilizzati. Nessun anestetico dovrebbe essere utilizzato, come si sa su come questo potrebbe influenzare la procedura. </li><li> Utilizzare 0,05 ml di sperma / latte mix per femmina </li></ol><p class="jove_step"> Destinatario femmine </p><ol><li> Fare striscio vaginale sulle femmine destinatario (in questo periodo le femmine destinatario deve essere in proestro / estro) </li><li> Femmine che non hanno raggiunto estro da 5 ° giorno non dovrebbe probabilmente utilizzato </li></ol>

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Petri Dish</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>08-772-30 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>18 gauge needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>305195</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Powdered milk</td>
<td>Reagent</td>
<td>Any Grocery store</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1 ml syringe</td>
<td>Tool</td>
<td>National Scientific Company</td>
<td>S7510-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5882</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>14200-075</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>22 gauge blunt needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Give to me</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

harvesting sperm and artificial insemination of mice

<p class="jove_content"> Roditori del genere Peromyscus (topi cervi) sono i mammiferi autoctoni più diffusi del Nord America. Specie Peromyscus sono utilizzati in una vasta gamma di ricerca tra cui tossicologia, epidemiologia, ecologia, comportamento, e gli studi genetici. Qui essi forniscono un utile modello per le dimostrazioni di inseminazione artificiale. </p><p class="jove_content"> Metodi simili a quelli visualizzati qui sono già state utilizzate in diversi studi topo cervo, ancora nessun protocollo dettagliato è stato pubblicato. Qui mostriamo il metodo di base della fecondazione artificiale. Questo metodo comporta l&#39;estrazione dei testicoli dal roditore, poi isolare gli spermatozoi dall&#39;epididimo e vasi deferenti. Lo sperma maturo, ora in una miscela di latte, sono collocati nel tratto riproduttivo della femmina al momento della ovulazione. Fecondazione viene considerato come 0 giorni per tempi di sviluppo embrionale. Gli embrioni possono poi essere recuperate al momento desiderato-point e manipolata. </p><p class="jove_content"> L&#39;inseminazione artificiale può essere utilizzato in una varietà di specie di roditori in cui tempistica esatta embrione è fondamentale o difficile da ottenere. Questa tecnica è di vitale importanza per le specie o ceppi (tra cui la maggior Peromyscus) che non possono accoppiarsi immediatamente e / o dove l&#39;accoppiamento è difficile da valutare. Inoltre, l&#39;inseminazione artificiale provvede esatta tempistica per lo sviluppo embrionale sia in corso la mappatura dello sviluppo e / o di lavoro transgenici. Riduzione del numero di animali possono essere utilizzati in quanto la fecondazione è garantita. Questo metodo è stato fondamentale per promuovere il sistema Peromyscus, e si spera beneficiare gli altri. </p>

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Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

<p class="jove_content">Questo protocollo vengono utilizzati dei metodi per l&#39;estrazione degli spermatozoi dai testicoli dei maschi e poi inseminazione topi femmina. Questa procedura è utile quando il tempo preciso è necessaria in studi sullo sviluppo e il lavoro transgenici.</p>

Lo sperma raccolto e l&#39;inseminazione artificiale di topi

Rodents of the genus Peromyscus (deer mice) are the most prevalent native North American mammals.  Peromyscus species are used in a wide range of research ...

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Research

JoVE Journal

Biology

48.5K Views.  University of California, Irvine (UCI). Questo protocollo vengono utilizzati dei metodi per l'estrazione degli spermatozoi dai testicoli dei maschi e poi inseminazione topi femmina. Questa procedura è utile quando il tempo preciso è necessaria in studi sullo sviluppo e il lavoro transgenici.