Per eseguire la criolesione dei miomeri sul pesce zebra, utilizzare una criosonda in acciaio inossidabile prodotta su misura. Per evitare il congelamento durante la manipolazione della sonda durante la procedura, inserire la maniglia della sonda in una punta di pipetta e fissarla avvolgendola con del nastro adesivo. Prima di iniziare con la procedura di criolesione, preparare un becher per la soluzione di lavoro dell'anestesia, un cucchiaio per maneggiare il pesce, una spugna umida e un serbatoio con acqua di sistema per il recupero post-procedura del pesce.
Preparare la soluzione madre di anestesia seguendo i passaggi mostrati sullo schermo. Quindi aggiungere quattro millilitri della soluzione madre preparata a 100 millilitri di acqua di sistema in un becher per preparare la soluzione di lavoro tricaina. Per iniziare la procedura di criolesione, immergere la sonda in azoto liquido per un minimo di tre minuti.
Bagnare la spugna in acqua di sistema e posizionarla su una superficie piana. Quindi, uno o due minuti dopo aver trasferito un singolo pesce zebra adulto nella soluzione di lavoro tricaina, confermare la sua insensibilità toccando delicatamente il pesce con il cucchiaio. Posizionare il pesce anestetizzato sulla spugna bagnata.
Localizzare il peduncolo caudale posteriore alla pinna anale e anteriore alla pinna caudale. In questa fase, rimuovere la criosonda dall'azoto liquido. Agitare delicatamente la sonda per assicurarsi che non rimanga azoto liquido residuo sulla punta.
Posizionare il bordo della spatola perpendicolare al corpo sul peduncolo caudale. Mantenere la sonda in questa posizione per sei secondi senza applicare pressione, prima di rilasciare la criosonda dal tessuto. Quindi trasferire il pesce nell'acqua del sistema nella vasca di recupero.
Monitora il pesce mentre riprende a respirare e nuotare dopo essersi svegliato dall'anestesia. Se i movimenti opercolari non si verificano dopo 30 secondi, stimolare il pesce pipettando l'acqua del sistema nelle branchie fino a quando l'animale inizia la respirazione da solo. La registrazione video del controllo e del pesce crioferito in un giorno dopo l'infortunio o DPCI ha rivelato che, sebbene il pesce crioferito nuotasse meno attivamente, non mostrava movimenti anomali, come vortice, convoluzione o equilibrio ridotto.
Nel sistema di allevamento, la loro posizione nell'acquario e l'assunzione di cibo erano simili a quelle dei pesci illesi. Come osservato a 5 DPCI, il comportamento normale era ancora persistente, indicando che la procedura di criolesione non ha influenzato gravemente il benessere degli animali.
