Per iniziare, adagiare il topo C57 nero 6 anestetizzato di età compresa tra 8 e 10 settimane sul banco operatorio. Usando una pinza smussata, estrai la lingua e tienila stretta. Inserire un laringoscopio in bocca e visualizzare le corde vocali.
Inserire un filo guida in un catetere endovenoso calibro 20. Quindi spingere delicatamente il catetere nella trachea fino a quando la sua parte alare non è allineata con la punta del naso. Collegare il mouse al ventilatore e posizionarlo in posizione supina sotto una lampada riscaldante.
Mantenere la temperatura rettale a 37 gradi Celsius. Dopo la rasatura e la disinfezione dell'area chirurgica, praticare un'incisione cutanea di un centimetro sulle aree inguinali sinistra e destra per accedere alle arterie femorali. Quindi disinfettare e legare l'arteria femorale distale e applicare una goccia di lidocaina.
Posizionare una clip sull'arteria femorale prossimale e praticare un piccolo taglio sull'arteria distale rispetto alla clip. Inserire un catetere in polietilene 10 sia nell'arteria femorale sinistra che in quella destra. Iniettare 50 microlitri di soluzione fisiologica eparinizzata da uno a 10 in ciascuna linea arteriosa.
Per evitare la formazione di coaguli nella linea, ruotare il mouse in posizione prona e montarlo su un telaio della testa stereotassica. Collegare tre elettrodi ad ago al braccio sinistro, alla gamba sinistra e al braccio destro per il monitoraggio dell'elettrocardiogramma. Quindi radere la parte superiore della testa e sterilizzarla con tre cicli alternati di tamponi di iodio e alcol.
Fai un'incisione cutanea di 2,5 centimetri sulla linea mediana e usa quattro piccoli divaricatori per esporre l'intera superficie del cranio per l'imaging cerebrale. Quindi posizionare un Laser Speckle Contrast Imager sopra la testa. Regolare il Laser Speckle Imager per visualizzare la linea di base dei vasi sanguigni cerebrali prima dell'arresto cardiaco.
Prima di indurre l'arresto cardiaco, riempire una siringa di plastica da un millilitro con 26 microlitri di soluzione madre per cocktail di rianimazione. Una volta che la temperatura corporea raggiunge i 37 gradi Celsius, regolare il misuratore di ossigeno al 100% per ossigenare il sangue per due minuti. Quindi aspirare fino a 200 microlitri di sangue attraverso l'arteria femorale destra nella siringa di plastica contenente il cocktail di rianimazione.
Per indurre l'arresto cardiaco, spegnere l'ossigeno e aumentare l'azoto al 100% per indurre l'anossia. Spegnere il ventilatore, il vaporizzatore di isoflurano, il regolatore di temperatura e il flussometro di azoto. Confermare l'assenza di flusso sanguigno cerebrale durante l'arresto cardiaco.
Osservando l'immagine della macchiolina laser, regolare l'ossigeno al 100% e accendere il ventilatore otto minuti dopo l'insorgenza dell'arresto cardiaco. Infondere immediatamente il sangue ossigenato prelevato miscelato con il cocktail di rianimazione nella circolazione sanguigna attraverso l'arteria femorale destra in un minuto per ripristinare i parametri vitali come la frequenza cardiaca e la pressione sanguigna. Guarda l'immagine Laser Speckle per confermare la corretta riperfusione del cervello.
Per il recupero postoperatorio, rimuovere i divaricatori dalla testa, applicare lo 0,25% di bupivacaina sull'incisione cutanea e chiudere l'incisione utilizzando un filo di sutura in nylon 6-0. Quindi applicare un unguento antibiotico sulla superficie dell'incisione cutanea chiusa. L'induzione dell'arresto cardiaco nel topo ha portato a grave bradicardia entro 45 secondi.
Dopo due minuti di anossia, la frequenza cardiaca si è ridotta significativamente. La pressione sanguigna è scesa al di sotto dei 20 millimetri di mercurio e il flusso sanguigno cerebrale è cessato. Inoltre, la temperatura corporea è scesa lentamente a circa 32 gradi Celsius alla fine dell'arresto cardiaco.
Dopo aver iniettato la miscela per la rianimazione del sangue, tutte le funzioni vitali hanno iniziato a riprendersi. L'imaging a contrasto Laser Speckle ha confermato la completa assenza di flusso sanguigno nel cervello durante l'arresto cardiaco, le immagini fotoacustiche hanno permesso di identificare i cambiamenti nel flusso sanguigno, nella struttura e nell'ossigenazione durante la procedura di arresto cardiaco.
