Ringraziamo Daniel Duerr per il suo consiglio per quanto riguarda la fissazione di perfusione-tecnica.

1. Induzione dell&#39;anestesia <ol><li> Per l&#39;induzione con isoflurano, posizionare il mouse in una scatola di induzione che è collegata al set vapore al 3,0% Vol e il flusso di ossigeno di 0,5 L / min. </li><li> Dopo incoscienza si ottiene con stimolo tattile non aver indurre una risposta e la zampa anteriore o arti posteriori reflex ritiro pedale è assente, posizionare il mouse su una temperatura controllata tavolo operatorio in posizione supina. Mantenere l&#39;anestesia su un cono nasale che è collegato al vapore attraverso la scatola di induzione. Reclinare la testa fissando gli incisivi superiori con una sutura in nylon 5-0 per facilitare l&#39;intubazione. </li><li> Inserire la sonda rettale temperatura per mantenere temperatura corporea a 37 ° C. Fissare le estremità con del nastro adesivo. Attraversare la parte inferiore della gamba sinistra sopra la gamba destra per aprire il petto a sinistra ed esporre il cuore migliore. </li><li> Applicare la crema depilatoria al collo e al torace sinistro. Togliere la crema dopo 1 minuto. Applicare povidone-iodio per la pelle localedisinfezione. Iniettare buprenorfina 0,05 mg / kg di peso corporeo per alleviare il dolore per via sottocutanea. </li><li> Creare una linea mediana incisione cutanea del collo con una piccola forbice. Smussare sezionare le ghiandole e muscoli che coprono la trachea. Accendere il ventilatore. Impostazioni del ventilatore deve essere regolata per parametri fisiologici. Usiamo un Minivent, Hugo Sachs Elektronik, Apparecchi Harvard con una frequenza respiratoria di 105/min e un volume corrente di 200 pl. Tirare la lingua con una pinza e inserire delicatamente un metallo 22 G tubo. Confermare l&#39;intubazione tramite visualizzazione diretta del tubo all&#39;interno della trachea e il movimento del torace. </li><li> Bypassare l&#39;induzione passando da perdere tubo del gas per evitare la contaminazione dello spazio laboratorio. Regolare vapore 2,0% vol. </li></ol> 2. Toracotomia <ol><li> Eseguire un&#39;incisione cutanea in linea di sinistra medioclavicolare. Smussare sezionare il tessuto sottocutaneo verso l&#39;ascella. Identificare il bordo del muscolo grande pettorale e smussare sezionarlo dal p minoreectoralis muscolo sottostante. Tirare il muscolo piccolo pettorale a destra. Si otterrà una visione diretta della gabbia toracica. </li><li> Identificare e senza mezzi termini pentetrate lo spazio intercostale quarto con una pinza. Che le punte della pinza coprono lo spazio intercostale per permettere a voi stessi di inserire i divaricatori che sono regolati con degli elastici attaccati al tavolo operatorio. Si dovrebbe avere una visione chiara del cuore tra l&#39;atrio sinistro. Questo accesso è di solito realizzato senza alcuna perdita di sangue e quindi senza necessità di coagulazione elettrica. </li></ol> 3. Preparazione del Cuore <ol><li> Estrarre delicatamente fuori il pericardio senza ferire il cuore. </li><li> Identificare il dell&#39;arteria discendente anteriore sinistra (LAD) per sollevare il padiglione auricolare atriale sinistra dalla parete anteriore del ventricolo sinistro. LAD sarà visto solo su un percorso breve rettilineo con bordi sfumati e di colore rosso brillante rispetto alle vene. </li></ol> 4. Coronary ArteryStrumentazione <ol><li> Preparare una sutura 8-0 prolene con una punta di spillo conico formando in un U-forma. Far passare l&#39;ago attraverso la profondità sufficiente sotto il LAD miocardio. </li><li> Tagliare l&#39;ago di sutura per avere 1 cm di sutura su ciascun lato. </li><li> Tagliare a 1 sezione mm tubo PE-10 come un occlusore prevenire gli eventuali spigoli vivi. Lasciare che il occlusore in ammollo in disinfezione alcolica e battere prima dell&#39;uso. Nota: Il tubo dovrebbe essere immersi in etanolo al 100% per 24 ore di sterilizzare in modo appropriato 4. </li><li> Filo di sutura, sia attraverso l&#39;estremità occlusore. </li><li> Usare una dimensione 3 ago di sutura Kalt per guidare entrambe sutura estremità dallo spazio intercostale superiore. </li></ol> 5. Petto di chiusura <ol><li> Tie la nervatura superiore e inferiore del spazio aperto intercostale insieme con una sutura 6-0 prolene. Prima di chiudere la cassa si dovrà procedere per 5,2. </li><li> Hyperinflate i polmoni per pochi cicli respiratori per aprirefino atelettasia, fissando il tubo espiratorio. Questa manovra può anche dipendere dal tipo di ventilatore utilizzato. Impostare il volume corrente a 300 microlitri fino a quando il torace è chiuso. </li><li> Impostare la corrente di nuovo volume di ventilatore a 200 microlitri. </li><li> Tie entrambe le estremità della sutura 8-0 LAD ligazione a farli formare un anello. </li><li> Collegare un ECG. </li><li> Agganciare i pesi per il ciclo 8-0 e lasciare che i pesi con attenzione appendere. Si dovrebbe vedere un significativo sopraslivellamento ST nel giro di pochi battiti cardiaci pochi. Rilasciare il peso. Nota: Questi esperimenti utilizzano un totale di 5,5 g di peso, ma il peso può variare in base al ceppo e del peso corporeo dei topi. </li><li> Posizionare il passante in una tasca sottocutanea e chiudere la pelle con 6-0 punti di sutura singolo nodo. </li><li> Lasciate il mouse recupero dopo l&#39;estubazione sotto una lampada riscaldante. </li></ol> 6. Ischemia miocardica e riperfusione <ol><li> Dopo un periodo di recupero di almeno 5 giorni indurre l&#39;anestesia con una miscela di ketamina, xilazinae atropina (4 ml / kg di peso corporeo, ketamina 10 mg / ml, xilazina 2 mg / ml, atropina 0,06 mg / ml, 1. </li><li> Intubare e ventilare con aria ambiente per esperimenti di ischemia e di riperfusione. </li><li> Aprire la pelle suturata del torace. Preparare il ciclo 8-0 sutura. Collegare un ECG. </li><li> Collegare i pesi e lasciarli appesi. Seguite il vostro protocollo di ischemia. Guarda ECG di scioglimento potenziale di sopraslivellamento ST 2. </li><li> Rilasciare i pesi al fine di ischemia. Chiudere la pelle, estubare il mouse e lasciarlo recuperare. </li></ol> 7. Dimensione Assessment infarto con Time riperfusione fino a 3 giorni <ol><li> Anestetizzare e intubare il mouse alla fine del tempo di riperfusione desiderato. </li><li> Tagliare la pelle del petto sulla linea mediana al xifoideo. Aprire l&#39;addome e tagliare il diaframma sotto la gabbia toracica. Tagliare il torace aperto su entrambi i lati della linea medioclavicolare. </li><li> Fissare la parete toracica anteriore sbatteva con una sutura per ottenere libero accesso al cuore. </li><li> Cura preparare il 8-0 ciclo sutura. Tagliare il ciclo e fare un nodo a occludere il LAD. </li><li> Iniettare 10% Phthalo blu nell&#39;atrio sinistro. Per evitare un sovraccarico cardiaco volume, tingere iniettare lentamente e aspirare di tanto in tanto. </li><li> Iniettare cloruro di potassio in atrio sinistro. In questo modo arrestare il cuore in diastole per la valutazione uguali dimensioni dell&#39;infarto. </li><li> Tagliare il cuore, lasciando tanto di tessuto extracardial possibile per facilitare il taglio del cuore. </li><li> Lavare il cuore in soluzione tampone fosfato. </li><li> Congelare il cuore in azoto liquido e isopentano. In alternativa, i cuori possono essere inseriti in un congelatore fino leggermente congelato. </li><li> Tagliare il cuore in fette da 1 mm. Abbiamo un dispositivo di taglio fatta di lamette per tagliare il cuore in fette uguali (figura 4). Assicurarsi che il cuore è correttamente allineata per tagliare perpendicolare all&#39;asse lungo del cuore. </li><li> Incubare le fette in TTC 1,5% a 37 ° C per 20 min. Noi usiamo una piastra a 96 pozzetti in cuiogni fetta viene messo in un pozzetto. Ciò farà risparmiare TTC e risparmiarvi l&#39;uso di un filtro Whatman per evitare artefatti. </li><li> Fissare le fette con il 4% di formaldeide durante la notte. Ciò si ridurrà le fette, ma aumenta il contrasto del colorante. </li><li> Mettete la fetta su un vetrino da microscopio. Coprire con un&#39;altra diapositiva. Utilizzare distanziatori in metallo 1 mm ad ogni estremità della slitta e tenere le diapositive con graffette. </li><li> Prendete una immagine digitale da entrambi i lati di ogni fetta. Usare sempre le stesse impostazioni e non lo zoom per i più piccoli fette. </li><li> Utilizzare un software per la planimetria. Usiamo ImageJ dal NIH. Usare sempre gli stessi criteri per le aree infartuati, ad esempio solo le aree bianche sono infartuata. Aree bianche rosate non sono infartuata. Abbiamo accecati investigatori per interventi e planimetrie pure. </li></ol> 8. Cuore di preparazione alternativa per Istologia <ol><li> Seguire i passaggi da 7.1 a 7.2. e procedere alla 8.2. Valutazione infarto affidabile con colorazione TTC può essere fatto entro 72 ore di riperfusione a causa del ritiro della cicatrice. </li><li> Preparare off qualsiasi tessuto extracardial e smussare sezionare il timo che coprono la radice aortica. </li><li> Afferra l&#39;aorta ascendente con le pinze e tagliare fuori il cuore con il tessuto meno extracardiache possibile. </li><li> Lavare e spremere il cuore delicatamente soluzione cardioplegica. </li><li> Mettere il cuore in un piatto pieno di p35 soluzione cardioplegica. </li><li> Preparare l&#39;aorta ascendente. </li><li> Incannulare l&#39;aorta ascendente con una cannula che è preriempita con formaldeide. Usiamo zinco-formalina fissativo e una linea di 24 G iv 3. </li><li> Praticare un foro tra l&#39;atrio sinistro e l&#39;atrio sinistro. </li><li> Inserire un catetere 26 G nell&#39;atrio sinistro con un tubo di 16 cm di lunghezza collegato ad esso. È inoltre possibile utilizzare una tubazione PE50. </li><li> Perfusione del cuore per dieci minuti con il fissativo formalina. </li><li> Mettere il cuore in un tubo riempito con fissativo per un massimo di 24 ore a 7 ° C. </li><li> Continuare con la preparazioneparazione per l&#39;istologia / immunoistochimica. </li></ol> 9. Risultati rappresentativi Cronica legatura dell&#39;arteria coronarica è una tecnica complessa, con molteplici insidie. Tuttavia, una volta masterizzato può essere eseguita con tassi di mortalità molto bassi e risultati altamente affidabili. Posizionamento ottimale dei topi e l&#39;accesso al cuore sono fondamentali per l&#39;identificazione di successo e strumentazione della LAD. La posizione della legatura ovviamente influenzare le dimensioni dell&#39;infarto, richiedendo così di avere un sito standardizzato ligazione. Inoltre, se i rami settali sono interessati questo potrebbe portare ad un blocco di branca, invece di sopraslivellamento del tratto ST. Sanguinamento da vene epimyocardial o dal ventricolo, se la legatura è troppo profonda, può verificarsi e topi deve essere esclusa se il sanguinamento è eccessivo. Pericard devono essere rimossi il più completamente possibile. Lasciando la pericard aggraverà spingere l&#39;ago nel miocardio per la legatura. Inoltre, esso causerà pericardite, infineindurre adesioni e farà l&#39;esame istologico difficile. Il PE-occlusione dovrebbe essere il più breve possibile e senza spigoli per minimizzare il trauma al miocardio. L&#39;iperinflazione dei polmoni è assolutamente cruciale per evitare pneumotorace iperteso dopo la chiusura del torace. Non c&#39;è bisogno di un drenaggio toracico. Test di una corretta posizione della legatura nel torace aperto tirando le estremità sutura deve essere omessa perché tirando tensione è difficile da controllare. Se la strumentazione della LAD non riesce, ulteriori tentativi dovrebbero essere evitati perché questo si aggiunge il trauma e edema al miocardio. Al fine di ottenere risultati affidabili, parametri di protocollo dovrebbe essere standardizzata. Pertanto, i topi sono intubato e ventilato con aria ambiente e la temperatura corporea è strettamente controllata con un sistema di feedback. L&#39;utilizzo di pesi sospesi è stato già sottolineato. Altri dispositivi di trascinamento presentano l&#39;inconveniente di perdita di tensione e non standardizzati tensione di tiro. Ischemicaprotocolli pre e postconditioning con cicli multipli di riperfusione e l&#39;occlusione si può eseguire più facilmente con appesi pesi, perché hanno solo bisogno di essere sollevato e lasciare appeso (Figura 1). Aree di infarto (bianco) deve essere distinguibile dalle aree a rischio (rosso) e la zona non a rischio (blu) (Figura 2A-B). Infarto dimensioni dipendono dalla durata di ischemia. Riperfusione tempo dovrebbe essere almeno 2 ore per consentire successo colorazione TTC (Figura 1 e 2). Soprattutto, citochine espressione dell&#39;RNA è bassa negli animali che avevano sham azionate tutte le procedure chirurgiche non ischemia e riperfusione rispetto agli animali che sono stati sottoposti infarto miocardico (Figura 3A-C). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3896/3896fig1.jpg" /> Figura 1. Infarto dimensione in percentuale di area a rischio (IS /% AAR). I topi sono stati sottoposti ischemia 30 minuti seguito da 120 minuti di riperfusione (I / R, n = 10). IPC: postconditioning ischemica, i topi sottoposti a 30 minuti di ischemia seguiti da 3 cicli di riperfusione / occlusione ogni 20 sec (n = 6, * indica p &lt;0,05). <img alt="Figura 2A" src="/files/ftp_upload/3896/3896fig2A.jpg" /> Figura 2A. Rappresentante TTC-tinto slice cuore. Bianco: area infartuale, Rosso: area a rischio, Blue: non occluso-area. <img alt="Figura 2B" src="/files/ftp_upload/3896/3896fig2B.jpg" /> Figura 2B. Fetta rappresentante di un infartuato (bianco) area. Si noti che grazie alla forma conica del ventricolo sinistro vicino all&#39;apice, il epimyocard apparirà come superficie piana e non deve essere considerato per la misurazione planimetrica (rosa / blu superficie esterna). Rosso = TTC macchiato miocardio vitale. <img alt="Figura 3A" src="/files/ftp_upload/3896/3896fig3A.jpg" /> Figura 3A. Alcuna differenza significativa nella miaocardial TNF-α espressione di mRNA dopo 30 minuti di ischemia e riperfusione 120 minuti. n = 4-6 per gruppo. <img alt="Figura 3B" src="/files/ftp_upload/3896/3896fig3B.jpg" /> Figura 3B. Miocardico IL-1β espressione di mRNA ischemia dopo 30 minuti e 120 minuti di riperfusione (I / R). Non vi è alcuna differenza significativa tra il controllo (senza chirurgia) e sham-operati (senza ischemia / riperfusione) del gruppo. n = 4-6 per gruppo, indica * p &lt;0,05. <img alt="Figura 3C" src="/files/ftp_upload/3896/3896fig3C.jpg" /> Figura 3C. Miocardico IL-6 espressione di mRNA dopo 30 minuti di ischemia e riperfusione 120 minuti (I / R). Non vi è alcuna differenza significativa tra il controllo (senza chirurgia) e sham-operati (senza ischemia / riperfusione) del gruppo. n = 4-6 per gruppo, indica * p &lt;0,05. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3896/3896fig4.jpg" /> Figura 4A-C. Heart dispositivo di taglio. A: si è chiuso con lamette in posizione di taglio. B: aperta, vista laterale. C: aperto, vista frontale. Cuore sarà allineato nella scanalatura del letto di plastica bianca con asse perpendicolare lungo le lamette (freccia).

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	<li>Lim, S. Y., Davidson, S. M., Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preconditioning+and+postconditioning:+the+essential+role+of+the+mitochondrial+permeability+transition+pore.">Preconditioning and postconditioning: the essential role of the mitochondrial permeability transition pore.</a> Cardiovasc. Res. 75, 530-535 (2007).</li><li>Eckle, T., Koeppen, M., Eltzschig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+Hanging+Weight+System+for+Coronary+Artery+Occlusion+in+Mice.">Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice.</a> J. Vis. Exp. (50), e2526 (2011).</li><li>Michael, L. 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Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Abbiamo modificato un topo chiuso petto modello di accesso al cuore attraverso una toracotomia laterale sinistra intercostale e che conduce le suture KOP al petto in linea di sinistra medioclavicolare. Lasciando la gabbia toracica ossea intatta sarà minimizzare il trauma, il bisogno di farmaci per il dolore, l&#39;infezione del sito chirurgico e, quindi, facilitare il recupero. Per preservare l&#39;arteria interno mammifero non c&#39;è bisogno di elettrocauterizzazione. Si lascia il ciclo sutura nel tessuto sottocutan...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Vapore </td><td> Drägerwerk AG </td><td> Isoflo </td></tr><tr><td> Microscopio </td><td> Leica </td><td> M80 </td></tr><tr><td> Sorgente luminosa </td><td> Schott </td><td> KL 1500 LCD </td></tr><tr><td> Omeotermi Blanket Control Unit </td><td> Harvard Apparatus </td><td></td></tr><tr><td> Minivent Type 845 </td><td> Hugo Sachs Elektronik </td><td></td></tr><tr><td> 8-0 Prolene </td><td> Ethicon </td><td> BV130-5 6,5 millimetri 3/8c </td></tr><tr><td> 6-0 Prolene </td><td> Ethicon </td><td> BV-1 9,3 millimetri 3/8c </td></tr><tr><td> Kalt dell&#39;ago sutura 3 </td><td> FST </td><td> 12050-03 </td></tr><tr><td> Trifeniltetrazolio </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 93145 </td&gt; </tr><tr><td> Phthalo blu </td><td> Heucotech LTD </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab </td><td> ADInstruments </td><td></td></tr></tbody></table>

a murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion

Trauma chirurgico in toracotomia a torace aperto modelli di legatura coronarica induce una risposta immunitaria che modifica differenti meccanismi di ischemia e riperfusione. Risposta immunitaria comprende l&#39;espressione di citochine e il rilascio o la secrezione di ligandi endogeni dei recettori del sistema immunitario innato. L&#39;attivazione dell&#39;immunità innata sono potenzialmente in grado di modulare le dimensioni dell&#39;infarto. Noi abbiamo modificato uno esistente topo chiuso del torace modello con pesi pendenti che potrebbero essere utili per lo studio del miocardio pre-e postconditioning e il ruolo dell&#39;immunità innata nei ischemia miocardica e riperfusione. Questo modello consente agli animali di recuperare dal trauma chirurgico prima della comparsa di ischemia miocardica. Anestetici volatili sono stati studiati intensamente e loro effetto condizionamento per il cuore ischemico è ben noto. Tuttavia, questo effetto protettivo preclude l&#39;uso di modelli in torace aperto di legatura dell&#39;arteria coronarica. Così, un altro vantaggio potrebbe essere l&#39;uso di secolole e ben controllabili anestetici volatili per la strumentazione in una malattia cronica chiuso del torace modello, dal momento che il loro effetto di precondizionamento dura fino a 72 ore. Malattie cardiache croniche con ischemia intermittente e modelli più colpite sono altre possibili applicazioni di questo modello. Per la cronica chiuso del torace modello, intubato e ventilato topi sottoposti a una toracotomia laterale ottuso attraverso il quarto spazio intercostale. A seguito della identificazione discendente anteriore sinistra una legatura viene passata sotto l&#39;imbarcazione e entrambe le estremità di sutura vengono fatti passare lungo un occlusore. Quindi, entrambe le estremità di sutura vengono fatti passare attraverso la parete toracica, annodato per formare un anello e lasciato nel tessuto sottocutaneo. Dopo la chiusura del torace e di recupero per 5 giorni, i topi sono anestetizzati ancora una volta, la pelle del torace viene riaperto e pesi appesi sono collegati al circuito ECG sotto controllo. Alla fine del ischemia / riperfusione protocollo, cuori possono essere colorati con TTC per infartodimensioni valutazione o sottoposti a perfusione fissazione per consentire gli studi morfometrici oltre alla istologia e di immunoistochimica.

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A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Trauma chirurgico induce una risposta infiammatoria. Citochine e ligandi endogeni sono noti per modulare dimensione miocardio a seguito di ischemia e riperfusione. Vi presentiamo una versione modificata del chiuso petto modello di ischemia e di riperfusione murino con pesi appesi per minimizzare gli effetti di toracotomia.

A Murine chiuso del torace modello di ischemia miocardica e riperfusione

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

28.6K Views.  University of Bonn, Germany. Trauma chirurgico induce una risposta infiammatoria. Citochine e ligandi endogeni sono noti per modulare dimensione miocardio a seguito di ischemia e riperfusione. Vi presentiamo una versione modificata del chiuso petto modello di ischemia e di riperfusione murino con pesi appesi per minimizzare gli effetti di toracotomia.

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Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Normotermico arresto cardiaco e rianimazione cardiopolmonare: un modello murino di ischemia-riperfusione

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

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Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Background 
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered advancements to decrease the occurrence this injury.&#160;The current model demonstrates reproducible lower&#160;extremity paralysis following thoracic aortic occlusion.
Methods 
Adult male C57BL6 mice were anesthetized with isoflurane. Through a cervicosternal incision the aorta was exposed. The descending thoracic aorta and left subclavian arteries were identified without entrance into pleural space. Skeletonization of these arteries was followed by immediate closure (Sham) or occlusion for 4 min (moderate ischemia) or 8 min (prolonged ischemia). The sternotomy and skin were closed and the mouse was transferred to warming bed for recovery.&#160; Following recovery, functional analysis was obtained at 12 hr intervals until 48 hr.
Results 
Mice that underwent sham surgery showed no observable hind&#160;limb deficit. Mice subjected to moderate ischemia for 4 min had minimal functional deficit at 12 hr followed by progression to complete paralysis at 48 hr. Mice subjected to prolonged ischemia had an immediate paralysis with no observable hind-limb movement at any point in the postoperative period. There was no observed intraoperative or post&#160;operative mortality.
Conclusion 
Reproducible lower extremity paralysis whether immediate or delayed can be achieved in a murine model. Additionally, by using a median sternotomy and careful dissection, high survival rates, and reproducibility can be achieved.

The lack of mechanistic understanding of spinal cord ischemia-reperfusion injury has hindered further adjuncts to prevent paraplegia following high risk aortic operations. Thus, the development of animal models is imperative. This manuscript demonstrates reproducible lower extremity paralysis following thoracic aortic occlusion in a murine model.

Riproducibile Paraplegia da Toracica aortica occlusione in un modello murino di Spinal Cord ischemia-riperfusione

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

A Rat Model of Ventricular Fibrillation and Resuscitation by Conventional Closed-chest Technique

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic components of cardiopulmonary resuscitation in humans is herein described. The model was developed in 1988 and has been used in approximately 70 peer-reviewed publications examining a myriad of resuscitation aspects including its physiology and pathophysiology, determinants of resuscitability, pharmacologic interventions, and even the effects of cell therapies. The model featured in this presentation includes: (1) vascular catheterization to measure aortic and right atrial pressures, to measure cardiac output by thermodilution, and to electrically induce ventricular fibrillation; and (2) tracheal intubation for positive pressure ventilation with oxygen enriched gas and assessment of the end-tidal CO2. A typical sequence of intervention entails: (1) electrical induction of ventricular fibrillation, (2) chest compression using a mechanical piston device concomitantly with positive pressure ventilation delivering oxygen-enriched gas, (3) electrical shocks to terminate ventricular fibrillation and reestablish cardiac activity, (4) assessment of post-resuscitation hemodynamic and metabolic function, and (5) assessment of survival and recovery of organ function. A robust inventory of measurements is available that includes &#8211; but is not limited to &#8211; hemodynamic, metabolic, and tissue measurements. The model has been highly effective in developing new resuscitation concepts and examining novel therapeutic interventions before their testing in larger and translationally more relevant animal models of cardiac arrest and resuscitation.

This article describes a rat model of electrically-induced ventricular fibrillation and resuscitation by chest compression, ventilation, and delivery of electrical shocks that simulates an episode of sudden cardiac arrest and conventional cardiopulmonary resuscitation. The model enables gathering insights on the pathophysiology of cardiac arrest and exploration of new resuscitation strategies.

Un modello di ratto di fibrillazione ventricolare e Rianimazione dal convenzionale chiuso petto Tecnica

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Modello murino di ischemia-riperfusione intestinale Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.

During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.

La conferma di ischemia miocardica e riperfusione nei topi mediante il rilievo della superficie elettrocardiografia

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved drug to prevent or reduce myocardial I/R injury. The study and understanding of the pathophysiological mechanisms of myocardial I/R injury is essential to develop successful treatments. Large animal experiments are an important step in translational methods. The porcine model of acute myocardial infarction has been established and described by ourselves and others. We aimed to further improve the value of the model by focusing in detail on the sampling techniques for use in future experiments. Furthermore, we emphasize small but important steps that can affect the quality of the final results. To mimic the clinical situation of myocardial I/R injury, a percutaneous coronary intervention (PCI) catheter was inserted into the left anterior descending coronary artery (LAD) of an anesthetized pig. &#176;&#176;&#176;This model mimics acute myocardial infarction and PCI treatment in humans with the possibility of accurately determining the area at risk as well as the necrotic- and viable ischemic tissue. Here the model was used to investigate the effect of a bicyclic peptide inhibitor of FXIIa. The model can also be modified to allow longer reperfusion times to study later effects of myocardial infarction.

Here we demonstrate a protocol to standardize sampling procedures of an established porcine model of acute myocardial infarction in order to increase its translational value in the understanding of the pathophysiology of myocardial ischemia/reperfusion injury and to test novel drug candidates.

Miglioramento di un modello di infarto miocardico porcina cassa chiusa tramite la normalizzazione del tessuto e le procedure di campionamento di sangue

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to perform a partial thoracotomy to visualize the transverse aortic arch. However, the surgical trauma caused by the thoracotomy in open-chest models changes the respiratory physiology as the ribs are dissected and left unattached after chest closure. To prevent this, we established a minimally invasive, closed chest approach via lateral thoracotomy. Herein we approach the aortic arch via the 2nd intercostal space without entering the chest cavities, leaving the mouse with a less traumatic injury to recover from. We perform this operation using standard laboratory settings for open chest TAC procedures with equal survival rates. Apart from maintaining physiological breathing patterns due to the closed chest approach, the mice seem to benefit by showing rapid recovery, as the less invasive technique appears to facilitate a fast healing process and to reduce immune response after trauma.

Here, we present a protocol of Transverse Aortic constriction (TAC) via a lateral thoracotomy. This technique is a minimally invasive, closed chest surgical procedure aiming to simulate pressure overload and heart failure in mice utilizing standard TAC laboratory settings.

Un modello chiuso-cassa per indurre costrizione trasversale aortica in topi

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Valutazione della riserva del flusso coronario dopo la miaocardia Ischemia Reperfusione nei ratti

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

Consegna intramiocardica ritardata di cellule staminali dopo l'infortunio di ricottamento ischemia in un modello Murine

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...