Inizia posizionando un tappetino da banco pulito o un telo sul piano di lavoro. Fissare con del nastro adesivo l'ogiva di un vaporizzatore di isoflurano alla superficie, assicurandosi che sia rivolta in direzione opposta allo sperimentatore. Attacca un ago lungo 10 millimetri, calibro 27 con uno smusso di 45 gradi su una siringa di vetro da cinque microlitri.
Aggiungere il tubo silastico all'ago, lasciando sporgere 3,5 millimetri della punta e fissare il tubo con nastro da laboratorio al corpo della siringa. Successivamente, aspirare tre microlitri di mezzo di iniezione nella siringa di vetro prelevando inizialmente più del necessario, quindi espellere l'eccesso fino a quando rimangono solo tre microlitri. Avviare un timer da laboratorio in modalità conto alla rovescia e posizionarlo per una facile visualizzazione durante le iniezioni.
Dopo aver esercitato a muovere un ago lateralmente e caudalmente, preparare il topo anestetizzato per l'iniezione pulendo prima il sito di iniezione con iodio e poi con alcol tre volte. Identificare il sito di iniezione utilizzando un ago calibro 18, facendolo passare attraverso il sito di craniotomia. Per iniettare il mouse, per prima cosa, tieni saldamente la testa del mouse con la mano non dominante.
Posizionare la testa in piano sul piano di lavoro. Quindi, posizionare l'ago della siringa di vetro attraverso il foro nel cranio fino a quando il tubo non poggia sulla pelle del topo. Tenendo la siringa verticalmente sul piano coronale e sagittale, iniettare lentamente il terreno nell'arco di un minuto.
Tenere la siringa e l'ago per un altro minuto per ridurre al minimo il riflusso. Quindi, ritrarre lentamente l'ago. Rimuovere il mouse dall'ogiva.
Pulisci il sangue dal sito di iniezione usando una garza sterile e metti il topo in una gabbia su uno scaldagabbia fino al risveglio. La breve esposizione all'anestesia gassosa e l'iniezione di tre microlitri di liquido nel sistema ventricolare da sola non hanno alterato la secrezione pulsatile dell'ormone luteinizzante. I tratti di iniezione erano visibili nel tessuto neurale e si intersecavano con il ventricolo laterale.
