Analisi della densità mitocondriale e della distribuzione longitudinale nelle fibre muscolari scheletriche vive di ratto mediante microscopia confocale

Il rimodellamento della rete mitocondriale avviene in condizioni fisiologiche di stress e patologiche. Tuttavia, gli effetti del rimodellamento mitocondriale in un muscolo scheletrico rimangono incompletamente compresi. Questo protocollo consente di quantificare i cambiamenti dei mitocondri nel muscolo scheletrico vivo, migliorando la nostra comprensione dell'interazione tra alterazioni mitocondriali e funzione cellulare.

Lavorare con i muscoli scheletrici vivi presenta sfide a causa della contrazione delle fibre durante l'isolamento e della sensibilità all'immagine durante la scansione confocale. Questo protocollo descrive un processo di isolamento che utilizza una soluzione di rilassamento, consentendo l'analisi delle fibre muscolari vitali per la valutazione mitocondriale tramite microscopia confocale. Il nostro protocollo affronta la mancanza di flussi di lavoro per analizzare quantitativamente le reti mitocondriali nelle fibre muscolari scheletriche.

I passaggi qui descritti consentono agli utenti di sfruttare al meglio le immagini ottenute dalla microscopia confocale utilizzando l'elaborazione delle immagini mediante thresholding e l'analisi di Fourier veloce per ottenere la quantificazione della densità e della distribuzione mitocondriale. Siamo interessati allo studio dell'alterazione del muscolo scheletrico, in particolare della dinamica mitocondriale e del rimodellamento strutturale mitocondriale durante le avversità e di come possono essere modulate attraverso interventi come l'esercizio fisico e il digiuno intermedio.