Per iniziare, ottenere una sospensione di cellule vive arricchite derivate da iPSC in una provetta conica e centrifugarla a 460 g per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Dopo aver eliminato il surnatante, aggiungere 100 microlitri di tampone di lisi fredda 0,5X appena preparato. Utilizzando un P100, pipettare su e giù 10 volte per mescolare le cellule e incubare la provetta con ghiaccio per tre minuti.
Quindi, aggiungere 500 microlitri di tampone di lavaggio refrigerato al lisato, centrifugare la provetta ed eliminare il surnatante. Dopo aver ripetuto il lavaggio, risospendere il pellet in 120 microlitri di tampone nuclei diluito raffreddato. Utilizzando un filtro cellulare da 40 micrometri, filtrare la sospensione cellulare e aggiungere lo 0,4% di blu di tripano al filtrato.
Infine, valutare la qualità dei nuclei isolati al microscopio. Utilizzando questa tecnica, nuclei di alta qualità sono stati isolati da cellule progenitrici ematopoietiche umane derivate da iPSC crioconservate.
