Questo lavoro è stato finanziato dal Consiglio svedese della ricerca, Università di Uppsala e Fredrik e Ingrid Thurings Foundation. ZJ tenuto una borsa di studio post-dottorato da EXODIAB e Sällskapet Svenska för Medicinsk Forskning. Ringraziamo Frank Lee per l&#39;assistenza tecnica.

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	<li>Pavlov, I., Savtchenko, L. P., Kullmann, D. M., Semyanov, A., Walker, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outwardly+rectifying+tonically+active+GABAA+receptors+in+pyramidal+cells+modulate+neuronal+offset,+not+gain.">Outwardly rectifying tonically active GABAA receptors in pyramidal cells modulate neuronal offset, not gain.</a> J Neurosci. 29, 15341-15350 (2009).</li><li>Chao, H. T., Chen, H., Samaco, R. C., Xue, M., Chahrour, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+in+GABA+signalling+mediates+autism-like+stereotypies+and+Rett+syndrome+phenotypes.">Dysfunction in GABA signalling mediates autism-like stereotypies and Rett syndrome phenotypes.</a> Nature. 468, 263-269 (2010).</li><li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. 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M., Degerman, E., Groop, L., Birnir, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+reduces+neuronal+excitability+by+turning+on+GABA(A)+channels+that+generate+tonic+current.">Insulin reduces neuronal excitability by turning on GABA(A) channels that generate tonic current.</a> Plos One. 6, e16188-e16188 (2011).</li><li>Nusser, Z., Mody, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+modulation+of+tonic+and+phasic+inhibitions+in+dentate+gyrus+granule+cells.">Selective modulation of tonic and phasic inhibitions in dentate gyrus granule cells.</a> J Neurophysiol. 87, 2624-2628 (2002).</li><li>Semyanov, A., Walker, M. C., Kullmann, D. 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W., Sieghart, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+LXX.+Subtypes+of+gamma-aminobutyric+acid(A)+receptors:+classification+on+the+basis+of+subunit+composition,+pharmacology,+and+function.">International Union of Pharmacology. LXX. Subtypes of gamma-aminobutyric acid(A) receptors: classification on the basis of subunit composition, pharmacology, and function.</a> Update. Pharmacol Rev. 60, 243-260 (2008).</li><li>Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. 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P., Birnir, B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+GABA(A)+channel+conductance+increased+by+diazepam.">Hippocampal GABA(A) channel conductance increased by diazepam.</a> Nature. 388, 71-75 (1997).</li><li>Lindquist, C. E., Birnir, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+response+to+GABA+by+native+extrasynaptic+GABA+receptors.">Graded response to GABA by native extrasynaptic GABA receptors.</a> J Neurochem. 97, 1349-1356 (2006).</li><li>Birnir, B., Eghbali, M., Cox, G. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+concentration+sets+the+conductance+of+delayed+GABAA+channels+in+outside-out+patches+from+rat+hippocampal+neurons.">GABA concentration sets the conductance of delayed GABAA channels in outside-out patches from rat hippocampal neurons.</a> J Membr Biol. 181, 171-183 (2001).</li><li>Birnir, B., Eghbali, M., Everitt, A. B., Gage, P. W. B. i. c. u. c. u. l. l. i. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pentobarbital+and+diazepam+modulate+spontaneous+GABA(A)+channels+in+rat+hippocampal+neurons.">pentobarbital and diazepam modulate spontaneous GABA(A) channels in rat hippocampal neurons.</a> Br J Pharmacol. 131, 695-704 (2000).</li><li>Birnir, B., Everitt, A. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+GABAA+channels+in+rat+dentate+gyrus.">Characteristics of GABAA channels in rat dentate gyrus.</a> J Membr Biol. 142, 93-102 (1994).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

L&#39;intera-cella corrente rappresenta l&#39;insieme delle correnti generate da canali attivi nella cella. La farmacologia specifica e cloruro di permeabilità dei canali GABAA permette di identificare le correnti associate a questi canali. La natura transitoria di attivazione di canali sinaptica e l&#39;attivazione tonica dei canali extrasinaptica permette di differenziare facilmente tra queste due popolazioni di canali GABAA espressi in un neurone. Tuttavia, solo con un singolo canale registrazioni si può studiare le proprietà cinetiche delle molecole canale che generano le correnti tonico. A differenza dei canali sinaptici che attivano entro 100 ms, i canali GABAA tonica sono attivati ​​con una latenza nella gamma di minuti dal momento GABA è applicata 4,7,15,16,17,18. Questa attivazione ritardata dei risultati canali che le proprietà del canale molti non possono essere studiate usando cellule intere registrazioni. Al canale singolo livello i diversi sotto-popolazioni di canali GABAA possono essere identificati sulla base di diverse proprietà funzionali e farmacologiche. Così, prendendo un vantaggio di ciò che le diverse configurazioni di patch-clamp hanno da offrire, è possibile studiare in dettaglio la funzione molecolare e farmacologia del GABA-attivati ​​i canali che generano le correnti toniche e sinaptica nei neuroni.

Diverse patch-clamp sistemi hardware e software sono disponibili e tutti funzionano utilizzando gli stessi principi di base. Nel nostro laboratorio usiamo gli amplificatori Axoclamp e il software PClamp (Molecular Devices, USA) per registrare e analizzare i nostri esperimenti. Un altro marchio popolare è amplificatori HEKA e software (HEKA Elektronik, Germania) Microforge: Narishige MF-830 (Giappone); Vibrotome: ad esempio Leica VT1200S (Germania) o Campden Strumenti vibrotome (UK); microscopio: Nikon Eclipse E600FN; Bagnomaria; Micromanipolatori: misura e micromanipolatori Narishige (Giappone); Estrattore: DMZ- universale (Germania) o Narishige PC-10 (Giappone). Elettrodo di vetro: GC150F-15 (Harvard Apparatus, UK).

gaba-activated single-channel and tonic currents in rat brain slices

Il GABA A canali sono presenti in tutti i neuroni e si trovano sia a sinapsi e al di fuori delle sinapsi dove generano correnti fasica e tonica, rispettivamente 4,5,6,7 Il GABA Un canale è un pentamerica GABA-dipendenti canale del cloro. Le subunità del canale sono raggruppati in 8 famiglie (α1-6, β1-3, γ1-3, δ, ε, θ, π e ρ). Due alfa, due beta e uno da 3 subunità ° modulo funzionale del canale 8. Unendo studi di sottotipo specifico GABA-attivati ​​monocanale molecole con studi tra cui tutte le popolazioni del GABA A canali nel neurone diventa possibile comprendere il meccanismo di base di inibizione neuronale e come viene modulato da agenti farmacologici. Usiamo il patch-clamp 9,10 per studiare le proprietà funzionali dei canali GABA A nei neuroni vivi in fettine di ippocampo cervello e registrare il singolo canale e cellule intere correnti. Abbiamo ulteriormente esaminare come i canali sono influenzati da differenti concentrazioni di GABA, altri farmaci e fattori intra ed extracellulare. Per informazioni dettagliate descrizione teorica e pratica del patch-clamp metodo si veda The Single-Channel Registrazioni a cura di B ed E Sakman Neher 10.

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GABA-activated Single-channel and Tonic Currents in Rat Brain Slices

Usiamo il patch-clamp per misurare GABA-activated monocanale correnti (GABAA canali, recettori GABA) e le correnti sinaptiche e tonico che generano nei neuroni. L&#39;attivazione dei canali diminuisce l&#39;eccitabilità neuronale nella salute e nella malattia<sup&gt; 1,2,3,4</sup&gt;.

Correnti a singolo canale e Tonico GABA-attivati ​​in fettine di cervello di ratto

The GABAA channels are present in all neurons and are located both at synapses and outside of synapses where they generate phasic and tonic currents, ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

25.0K Views.  Uppsala University, Sweden. Usiamo il patch-clamp per misurare GABA-activated monocanale correnti (GABAA canali, recettori GABA) e le correnti sinaptiche e tonico che generano nei neuroni. L'attivazione dei canali diminuisce l'eccitabilità neuronale nella salute e nella malattia 1,2,3,4.

Correnti a singolo canale e Tonico GABA-attivati ​​in fettine di cervello di ratto

Correnti a singolo canale e Tonico GABA-attivati in fettine di cervello di ratto