Ce travail a été financé par le Conseil suédois de la recherche, l&#39;université d&#39;Uppsala et le Fredrik et Ingrid Thurings Fondation. ZJ a tenu une bourse postdoctorale du EXODIAB et Svenska för Sällskapet Medicinsk Forskning. Nous tenons à remercier Frank Lee pour l&#39;assistance technique.

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	<li>Pavlov, I., Savtchenko, L. P., Kullmann, D. M., Semyanov, A., Walker, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outwardly+rectifying+tonically+active+GABAA+receptors+in+pyramidal+cells+modulate+neuronal+offset,+not+gain.">Outwardly rectifying tonically active GABAA receptors in pyramidal cells modulate neuronal offset, not gain.</a> J Neurosci. 29, 15341-15350 (2009).</li><li>Chao, H. T., Chen, H., Samaco, R. C., Xue, M., Chahrour, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+in+GABA+signalling+mediates+autism-like+stereotypies+and+Rett+syndrome+phenotypes.">Dysfunction in GABA signalling mediates autism-like stereotypies and Rett syndrome phenotypes.</a> Nature. 468, 263-269 (2010).</li><li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke.">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468, 305-309 (2010).</li><li>Jin, Z., Jin, Y., Mendu, K. M., Degerman, E., Groop, L., Birnir, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+reduces+neuronal+excitability+by+turning+on+GABA(A)+channels+that+generate+tonic+current.">Insulin reduces neuronal excitability by turning on GABA(A) channels that generate tonic current.</a> Plos One. 6, e16188-e16188 (2011).</li><li>Nusser, Z., Mody, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+modulation+of+tonic+and+phasic+inhibitions+in+dentate+gyrus+granule+cells.">Selective modulation of tonic and phasic inhibitions in dentate gyrus granule cells.</a> J Neurophysiol. 87, 2624-2628 (2002).</li><li>Semyanov, A., Walker, M. C., Kullmann, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+uptake+regulates+cortical+excitability+via+cell+type-specific+tonic+inhibition.">GABA uptake regulates cortical excitability via cell type-specific tonic inhibition.</a> Nat Neurosci. 6, 484-490 (2003).</li><li>Birnir, B., Korpi, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+sub-cellular+location+and+intracellular+neuronal+proteins+on+properties+of+GABA(A)+receptors.">The impact of sub-cellular location and intracellular neuronal proteins on properties of GABA(A) receptors.</a> Curr Pharm Des. 13, 3169-3177 (2007).</li><li>Olsen, R. W., Sieghart, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+LXX.+Subtypes+of+gamma-aminobutyric+acid(A)+receptors:+classification+on+the+basis+of+subunit+composition,+pharmacology,+and+function.">International Union of Pharmacology. LXX. Subtypes of gamma-aminobutyric acid(A) receptors: classification on the basis of subunit composition, pharmacology, and function.</a> Update. Pharmacol Rev. 60, 243-260 (2008).</li><li>Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. 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P., Birnir, B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+GABA(A)+channel+conductance+increased+by+diazepam.">Hippocampal GABA(A) channel conductance increased by diazepam.</a> Nature. 388, 71-75 (1997).</li><li>Lindquist, C. E., Birnir, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+response+to+GABA+by+native+extrasynaptic+GABA+receptors.">Graded response to GABA by native extrasynaptic GABA receptors.</a> J Neurochem. 97, 1349-1356 (2006).</li><li>Birnir, B., Eghbali, M., Cox, G. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+concentration+sets+the+conductance+of+delayed+GABAA+channels+in+outside-out+patches+from+rat+hippocampal+neurons.">GABA concentration sets the conductance of delayed GABAA channels in outside-out patches from rat hippocampal neurons.</a> J Membr Biol. 181, 171-183 (2001).</li><li>Birnir, B., Eghbali, M., Everitt, A. B., Gage, P. W. B. i. c. u. c. u. l. l. i. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pentobarbital+and+diazepam+modulate+spontaneous+GABA(A)+channels+in+rat+hippocampal+neurons.">pentobarbital and diazepam modulate spontaneous GABA(A) channels in rat hippocampal neurons.</a> Br J Pharmacol. 131, 695-704 (2000).</li><li>Birnir, B., Everitt, A. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+GABAA+channels+in+rat+dentate+gyrus.">Characteristics of GABAA channels in rat dentate gyrus.</a> J Membr Biol. 142, 93-102 (1994).</li></ol>

Le courant cellule entière représente l&#39;ensemble des courants générés par les canaux actifs dans la cellule. La pharmacologie spécifique et la perméabilité du chlorure de canaux GABAA permet d&#39;identifier les courants associés à ces canaux. La nature transitoire de l&#39;activation des canaux synaptiques et l&#39;activation tonique des canaux permet une différenciation facile extrasynaptiques entre ces deux populations de canaux GABAA exprimé dans un neurone. Cependant, seulement avec un seul canal enregistrements peut-on étudier les propriétés cinétiques des molécules canaux qui génèrent les courants tonique. Contrairement aux canaux synaptiques qui activent dans les 100 ms, les canaux sont activés GABAA toniques avec une latence de l&#39;ordre de quelques minutes de l&#39;heure GABA est appliquée 4,7,15,16,17,18. Cette activation retardée des résultats des canaux dans les propriétés du canal que beaucoup ne peuvent pas être étudiés en utilisant la cellule entière enregistrements. Au niveau mono-canal les différentes sous-populations de canaux GABAA peuvent être identifiés sur la base variant propriétés fonctionnelles et pharmacologiques. Ainsi, en prenant un avantage de ce que les différentes configurations de patch-clamp ont à offrir, il est possible d&#39;étudier en détail la fonction moléculaire et la pharmacologie des canaux GABA-activé qui génèrent des courants tonique et synaptique dans les neurones.

Plusieurs de patch-clamp systèmes matériels et logiciels sont disponibles et ils fonctionnent tous selon les mêmes principes de base. Dans notre laboratoire, nous utilisons les amplificateurs Axoclamp et le logiciel pClamp (Molecular Devices, USA) pour enregistrer et analyser nos expériences. Une autre marque populaire est HEKA amplificateurs et des logiciels (HEKA Elektronik, Allemagne) Microforge: Narishige MF-830 (Japon); Vibrotome: par exemple, Leica VT1200S (Allemagne) ou Campden Instruments vibrotome (UK); Microscope: Nikon Eclipse E600FN; bain d&#39;eau; Micromanipulateurs: fait sur mesure et micromanipulateurs Narishige (Japon); Puller: DMZ universelle (Allemagne) ou Narishige PC-10 (Japon). Électrode de verre: GC150F-15 (Harvard Apparatus, UK).

gaba-activated single-channel and tonic currents in rat brain slices

Les canaux GABA A sont présentes dans tous les neurones et sont situés à la fois au niveau des synapses et à l&#39;extérieur des synapses, où ils génèrent des courants phasique et tonique, respectivement 4,5,6,7 Le GABA Un canal est un canal chlorure pentamérique GABA-dépendants. Les sous-unités de canaux sont regroupés en 8 familles (α1-6, β1-3, γ1-3, δ, ε, θ, π et ρ). Deux alphas, deux betas et une sous-unité 3 ème former le canal fonctionnel 8. En combinant des études de sous-type spécifique de GABA-activé à canal unique de molécules avec des études, y compris toutes les populations de canaux GABA A dans le neurone, il devient possible de comprendre le mécanisme de base de l&#39;inhibition neuronale et comment elle est modulée par des agents pharmacologiques. Nous utilisons la technique de patch-clamp 9,10 pour étudier les propriétés fonctionnelles des canaux GABA A dans les neurones vivants dans des tranches de cerveau de l&#39;hippocampe et enregistrer le canal unique et la cellule entière courants. Nous avons en outre examiner comment les canaux sont affectés par différentes concentrations de GABA, d&#39;autres drogues et les facteurs intra et extracellulaire. Pour une description théorique et pratique détaillée de la méthode patch-clamp s&#39;il vous plaît voir Le monocanal Recordings édité par B et E Sakman Neher 10.

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GABA-activated Single-channel and Tonic Currents in Rat Brain Slices

Nous utilisons la technique de patch-clamp pour mesurer le GABA-activé un seul canal courants (GABAA canaux, récepteurs GABA) et les courants synaptiques et tonique qu&#39;ils génèrent dans les neurones. L&#39;activation des canaux diminue l&#39;excitabilité neuronale dans la santé et la maladie<sup&gt; 1,2,3,4</sup&gt;.

GABA-courants activés monocanal et Tonic en tranches de cerveau de rat

The GABAA channels are present in all neurons and are located both at synapses and outside of synapses where they generate phasic and tonic currents, ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

25.0K vues.  Uppsala University, Sweden. Nous utilisons la technique de patch-clamp pour mesurer le GABA-activé un seul canal courants (GABAA canaux, récepteurs GABA) et les courants synaptiques et tonique qu'ils génèrent dans les neurones. L'activation des canaux diminue l'excitabilité neuronale dans la santé et la maladie 1,2,3,4.