Questo lavoro è stato sostenuto da finanziamenti della Deutsche Forschungsgemeinschaft (KA1270/3-1/2) e BONFOR (O-112,0040).

1. Animali Maschio C57Bl6 / J topi con un peso medio di 25 g sono stati ottenuti da Harlan Winkelmann (Borchen, Germania). Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in conformità con la legge federale sulla protezione degli animali. I principi di cura degli animali da laboratorio sono stati seguiti. Gli animali sono stati mantenuti su un 12-ore ciclo luce / buio e dotato di roditori chow disponibili in commercio e l&#39;acqua del rubinetto ad libitum. Animali dovrebbero essere accolti almeno 7 giorni dopo l&#39;arrivo in stabulario prima degli esperimenti. Si noti che tutti gli esperimenti può essere facilmente adattato a ratti o ad altre specie e con lievi modifiche in modelli animali di grandi dimensioni. 2. Procedura Operativa <ol><li> L&#39;anestesia è indotta e mantenuta con isoflurano (Abbott, Wiesbaden, Germania) in ossigeno. Dopo la comparsa di animali anestesia posto in posizione supina e le estremità fissare con nastro adesivo (Leukosilk, Beiersdorf, Amburgo, Germania). </li&gt; <li> Dopo la disinfezione rasatura e chirurgica della parete addominale una laparotomia mediana viene eseguita su una lunghezza di 2 centimetri. Inserire nella cavità addominale attraverso un&#39;incisione lungo la linea alba. Inserire due divaricatori sterili per mantenere l&#39;addome aperto. Attenzione eventerate piccolo intestino a sinistra e posizionarlo su una garza di cotone bagnato. </li><li> Evacuare l&#39;intero contenuto del lume del piccolo intestino con due applicatori di cotone umido e sterile (mutilati, Neunkirchen, Germania) contemporaneamente rotolare l&#39;applicatore dal piloro al cieco. ATTENZIONE: Evitare emorragie della parete dell&#39;intestino tenue o lesioni dei vasi intestinali. Rimettere il budello nella caverna peritoneale senza torsione per prevenire l&#39;ischemia o ostruzione meccanica e chiudere l&#39;incisione addominale con un doppio strato continuo 5/0 in poliammide suture non riassorbibili (Ethicon, Norderstedt, Germania). </li></ol> 3. Cura postoperatoria <ol><li> Dopo la procedura di posizionare l&#39;animale sotto una lampada di riscaldamento, observing finché non recuperato da anestesia. Mettere il mouse avanti nella sua gabbia e consentire l&#39;accesso ad acqua e cibo. A causa della proprietà di oppioidi per influenzare la peristalsi, eseguiamo analgesia perioperatoria con FANS (per Metamizol esempio) in acqua potabile. </li></ol> 4. Funzionale studi 24 ore dopo IM <ol class="lalpha"><li> Di transito gastrointestinale (GIT) <ol><li> Anestetizzare topi leggermente con isoflurano in ossigeno 22,5 ore dopo IM. Attenzione estendersi troppo la testa del mouse e tirare fuori la lingua con una pinza punte arrotondate. Riempire una siringa da 1 ml con almeno 100 pl marcato con fluoresceina destrano (FITC-destrano, 70.000 MW, Sigma Aldrich, Taufkirchen, Germania), collegarlo ad un catetere arterioso (Vygon, Ecouen, Francia) e con cautela inserire il catetere come un tubo gastrico nello stomaco. </li><li> Brevemente iniettare 100 pl FITC-destrano ed estrarre il catetere. Lasciate che l&#39;animale sveglio e attendere per 90 minuti. Durante questo periodo i topi hanno accesso a cibo o acqua. &lt;/ Li&gt; <li> Preparare quindici 2 tubi ml filatura e etichettarli consecutivamente. </li><li> Eutanasia topi 90 minuti dopo gavage e rimuovere l&#39;intero tratto gastrointestinale dallo stomaco al retto. Posizionare l&#39;intestino su di un blocchetto di polistirolo ed evitare stiramento. CAVE: E &#39;fondamentale per rimuovere l&#39;intestino delicatamente per evitare lo spostamento di liquido FITC-destrano nel segmento vicino. Per l&#39;inizio potrebbe essere utile utilizzare clip all&#39;inizio e alla fine di ogni segmento. </li><li> Misurare lunghezza del piccolo intestino e la lunghezza del colon. Dividere il piccolo intestino in 10 segmenti uguali dimensioni da pinning verso il basso per il pad polistirolo con cannule. Dividere i due punti in 3 segmenti. Avete preparato 15 segmenti (stomaco # 1), dieci segmenti di uguali dimensioni del piccolo intestino (# 2-11), cieco (# 12) e tre 3 segmenti uguali dimensioni del colon (# 13-15). </li><li> Transetto l&#39;intestino nei punti contrassegnati, afferrare con una pinza e lavare una volta con 1,0 ml KHB nel preparato in precedenza KHB containing 2,0 ml provette e mescolare vigorosamente nel vortex per 20 sec. Lo stomaco ed il cieco sono posti direttamente e tagliate nelle provette preparate. Riempire questi tubi con 1,0 ml KHB, in tal modo il risciacquo tracce di contenuto luminale dalla forbice nei tubi. </li><li> Centrifugare le sonde a 12,000 rcf per 5 min a temperatura ambiente in una centrifuga da tavolo. Durante la centrifugazione preparare altri 15 numerati progressivamente provette da 1,5 ml. </li><li> Trasferire il surnatante chiaro nel nuovo tubo di 1,5 ml e conservare al buio a 4 ° C fino al momento dell&#39;analisi (punto successivo). Le sonde possono essere conservati per diversi giorni a 4 ° C senza perdita significativa di segnale FITC. Per la conservazione prolungata aggiungere 0,09% Natrium-azide o conservare a &lt;-18 ° C. </li><li> Pipettare 100 ul duplets dei surnatanti su un nero piastra a 96 pozzetti (Greiner Bio One, Frickenhausen, Germania). Pipette due da 100 ml di campioni KHB come vuota. </li><li> Leggere la piastra in un lettore di fluorescenza (Safire, Tecan, Crailsheim, Germania) e quantificare il fluorescence a 494 nm (assorbimento) / 521 nm (emissione) di lunghezza d&#39;onda. Sottrarre i valori vuoti da campioni. </li><li> Calcolare il centro geometrico (GC) di FITC-destrano distribuzione, che è in realtà il centro di gravità per la distribuzione di marcatore, con la seguente formula: GC = Σ (% del totale segnale fluorescente per segmento * numero di segmento) / 100 </li></ol> Nota: Moltiplicando percentuale di fluorescenza di ciascun segmento con il suo numero di segmento una media ponderata della distribuzione del marcatore all&#39;interno dell&#39;intestino viene valutata. Questo punto è influenzato sia la distribuzione e la distanza percorsa dal marker, ma non si assume alcuna specifica distribuzione sottostante. 7 Il valore calcolato GC viene spesso presentato in combinazione con un grafico che dimostra la distribuzione di destrano FITC sul tratto gastrointestinale (Figura 1A). </li><li> Transito intestinale <ol><li> I topi devono essere debolmente anestetizzati con isoflurane 2% di ossigeno. ATTENZIONE: Assicurarsi che l&#39;animale si risveglieranno entro 40 sec. </li><li> Esaminare attentamente la pervietà del colon con l&#39;inserimento di una sonda di fistola (asta di metallo, 2 mm di diametro) attraverso l&#39;ano nel colon. </li><li> Utilizzando la sonda fistola portare avanti un bicchiere due millimetri palla 3 cm nel colon ed estrarre la sonda immediatamente. Posizionare il mouse in una gabbia trasparente e iniziare a misurare il tempo dopo la sonda fistola è stato tirato fuori dal colon. Tenete d&#39;occhio il mouse e fermare il tempo subito dopo la palla di vetro è diventato escreto. </li></ol></li></ol> 5. Analisi istochimica di campioni isolati ME <ol><li> Segmenti Midjejunal sono tagliati dal intestino e immerso in KHB freddo in un piatto Sylgard-riempita. </li><li> Mesentere è appuntato al piatto con 0,2 aghi insetti mm (Strumenti scientifici Arti, Heidelberg, Germania). </li><li> Tagliare il segmento lungo il confine mesenterica e allungare a ~ 120% della sua lunghezza e larghezza. Finalizzare il fissaggio con insettopin sul sito opposto del mesentere. Sciacquare il piatto Sylgard accuratamente con KHB fresca ghiacciata, in tal modo tutte le vampate di calore contenuto luminale. ME può meccanicamente separata dalla tunica mucosa a partire dal mesentere. Durante la preparazione sostituire fresche refrigerate volte KHB diverse. </li><li> Mucosa tunica separato può essere scossa congelati in azoto liquido per ulteriori analisi o scartato. </li><li> Fissare il supporto isolato ME tutto con etanolo al 100% per 10 minuti a temperatura ambiente. Lavare l&#39;intero montaggio tre volte utilizzando KHB refrigerata. Nota: altri fissativi (cioè formaldeide 4%, acido acetico, acetone) può essere utilizzato anche dopo il test la sua compatibilità con la successiva analisi. </li><li> I supporti ME integrali sono pronti per un ulteriore colorazione istochimica o immunhistochemical: </li></ol><ol class="lalpha"><li> Istochimica: mieloperossidasi (MPO) colorazione PMN infiltrato può essere esaminato dal seguente protocollo di colorazione MPO. <ol><li> Risolvere i 10 mg Hanker reagente Yates (Polyscience Europa, Eppelheim, Germania) in 10 KHB ml e aggiungere 100 microlitri del 3% H 2 O 2. Preparare la soluzione di fresco immediatamente prima dell&#39;uso e non riutilizzare. </li><li> Incubare supporti interi per 10 min a temperatura ambiente. </li><li> Sciacquare a lungo con i campioni KHB freddo e incubare per 10 min. </li><li> Montare i campioni in mezzo di montaggio acquoso (Aquatek, Merck, Darmstadt, Germania) Dopo l&#39;essiccazione per 2 ore analizzare i vetrini al microscopio luce. </li><li> Contare il numero di cellule in 5 campi scelti a caso e calcolare come MPO cellule positive / mm 2. </li></ol></li><li> Colorazione immunoistochimica: In accordo con la colorazione istochimica MPO, colorazioni immunoistochimiche dei monti interi può essere effettuata. Principalmente, i protocolli stabiliti colorazione immunoistochimica di colture cellulari o sezioni di tessuto può essere facilmente adattato ad una colorazione supporto intero. Tuttavia, la procedura di ottimizzazione per anti specificacorpi si consiglia vivamente. <ol><li> Tagliare i campioni in 5 x 5 mm e pezzi effettuare la colorazione in 2.0 provette a fondo tondo centrifuga ml in ~ 150 ml - 200 microlitri soluzione di anticorpi. </li><li> Fissaggio e bloccaggio procedura (cioè il 3% BSA in PBS per 1 ora a temperatura ambiente) può essere eseguita nel &quot;piatto Sylgard&quot;. </li><li> Fasi di lavaggio in PBS o altri buffer può essere eseguita in 12 pozzetti. </li><li> Trasferire i campioni. Accuratamente con una pinza nette tra colorazione tubi e piastre di lavaggio. </li><li> Dopo i provini finali montaggio procedura di lavaggio in anti-fading mezzo di montaggio con la polizza di copertura e analizzare con un microscopio a fluorescenza. </li></ol></li></ol> 6. Cultura Organo di ME <ol><li> L&#39;intero intestino piccolo viene resecato 24 ore dopo IM e posta in KHB freddo contenente 200 U / ml di penicillina G e 100 pg / ml di streptomicina (KHB + P / S). </li><li> Tagliare l&#39;intestino in 3 lunghezze cm e pin ogni segmento fino a un Sylgard contenente GLAss piatto. </li><li> Rimuovere il mesentere con le forbici sottili e scivolare l&#39;intestino su un ferro da calza. </li><li> Delicatamente incidere la ME con una pinza taglienti e striscia fuori dalla sottomucosa con un applicatore umido cotone. La mucosa tunica rimane sul ferro da calza e può essere congelato a scatto per ulteriori indagini. Il ME è raccolto in freddo KHB + P / S. </li><li> Tagliare le strisce isolate ME in piccoli pezzi di 2-4 mm di lunghezza e incubare in ghiaccio freddo KHB + P / S per una mezz&#39;ora e sciacquare il campione più volte. </li><li> Trasferire circa 50-60 mg ME (almeno metà ME di uno piccolo intestino) in una sterile 24 pozzetti contenente 500 microlitri s Dulbecco modified Eagle medium (DMEM). </li><li> Incubare a 37 ° C e 5% di CO 2 per ulteriori 24 ore. </li><li> Ispezionare le colture cellulari per la contaminazione batterica o fungina sotto un microscopio. </li><li> Raccogliere il surnatante, centrifugare per 5 minuti a 1000 rcf e congelare in azoto liquido a scatto. Nel frattempo asciugare asciugare il muscLe tessuto su un tessuto pulito per 30 sec e peso. </li><li> Supernatanti possono essere utilizzati per la successiva analisi di citochine rilasciate (IL-6) mediante ELISA o altri metaboliti (cioè nitrito) nel surnatante produce seguendo le istruzioni. </li><li> Normalizza le concentrazioni misurate per peso di ME tessuto. </li></ol> 7. Risultati rappresentativi <ol><li> Studi funzionali Il parametro più importante per valutare la gravità POI è l&#39;esame di GIT in vivo. Figura 1A mostra una tipica distribuzione di destrano FITC lungo il tratto gastrointestinale in controlli non trattati e manipolati intestinally topi 24 ore dopo l&#39;intervento chirurgico. &quot;Sham gestito&quot; animali hanno mostrato una GIT normale con un centro di calcolo geometrico (GC) nel cieco mentre IM portato ad un significativo ritardo di GIT nel digiuno prossimale (Figura 1B) Motilità del colon è stata focalizzata sulla separatamente dalla misura del tempo di escrezione o pallaFA 2 millimetri di vetro palla. Sham operati topi mostrano un tempo di escrezione di 48 - 200 sec mentre IM portato ad un tempo di escrezione prolungata tra 470-775 sec (Figura 1C). </li><li> Studi morfologici Per descrivere il infiammatoria estendere entro i fenotipi ME vari leucociti potrebbero essere analizzati con istochimica e immunoistochimica. Nella figura 2A + B una bassa presenza di PMN in &quot;sham operato&quot; animali è stato osservato (39 ± 7 cellule / mm 2). IM del piccolo intestino ha portato ad una forte infiltrazione PMN (660 ± 86 cellule / mm 2) rispetto ai topi finti azionati </li><li> ME Organ Culture Molti mediatori infiammatori liberati dalle cellule sono difficili da rilevare in lisati di tessuto. Culture Organo consentono di individuare dei mediatori liberati nel supernatante di coltura. Un mediatore rappresentante in PDI è NO, che è importante neurotrasmettitore inibitorio nel tratto gastrointestinale. 5 NO non è stato possibile rilevare in ME cul organosurnatanti tura di animali di controllo non operati (5 ± 6 mM / 24 ore / mg di tessuto). In finti azionati (laparotomia) topi basali livelli di NO di 53 ± 36 micron / 24 ore / mg di tessuto sono stati osservati. ME colture di topi intestinally manipolati (raccolte 24 ore dopo l&#39;intervento chirurgico) producono molto più NO (2254 ± 853 pM / 24 ore / mg di tessuto) durante le 24 ore organo cultura ME (Figura 3). </li></ol><img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig1.jpg" /> Figura 1. Effetto di IM sul GIT (A + B) e di transito del colon (C) GIT è stata misurata come percentuale di non assorbibile marcato con fluoresceina destrano in 15 segmenti gastrointestinale-stomaco (Sto), intestino tenue (SI 1-9 ), cieco (Cec), e del colon (Co) -90 minuti dopo l&#39;ingestione orale. Transito del colon è stata misurata come il tempo di tirare fuori la sonda fistola fino escrezione di un mm 2 perle di vetro. (A) distribuzione gastrointestinale di fluoresceina isotiocianato-dextran dopo la finta operazione o IM. Negli animali sham operati più del marcatore si trova nel cieco o colon prossimale rispetto prossimale in posizione digiunale animali manipolati. Le linee tratteggiate indicano calcolato GC. (B) Calcolo del GC ha dimostrato un tempo prolungato di transito gastrointestinale dopo IM. (C) il tempo di transito del colon hanno mostrato un ritardo significativo nei topi IM rispetto con gli animali finti operati. GC per i 15 segmenti intestinali sono visualizzati come media (n = 5). I tempi di transito del colon sono stati visualizzati dire con tutti i valori individuali (n = 6). *** = P &lt;0,001, di Student t-test. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig2.jpg" /> Figura 2. Rilevamento di MPO cellule positive all&#39;interno del piccolo intestino ME. (A) ME supporti intere sono state colorate con il reagente Hanker Yates per il rilevamento di MPO positivi PMN 24 ore dopo laparotomia (falsa) o procedura di IM. (B) Quantificazione dei MPO cellulare positiva entro 5 campi scelti a caso per topo. n = 6 animals per gruppo. *** = P &lt;0,001, di Student t-test. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig3.jpg" /> Figura 3. Produzione di NO in surnatanti di colture di ME. Campioni muscolari da controlli non operati, sham gestito e topi IM sono stati presi 24 ore dopo l&#39;intervento e coltivate per 24 ore. Topi non trattati hanno mostrato solo una bassissima produzione basale di NO. Dopo laparotomia NO liberazione è aumentata senza misurare differenze significative tra il gruppo di controllo e topi sham operati. 24 ore dopo la produzione di NO IM è notevolmente aumentata rispetto ai topi non trattati a comando o sham. n = 5 animali per gruppo. *** = P &lt;0,001, 1 ANOVA modo.

<ol>
	<li>Wehner, S., Behrendt, F. F., Lyutenski, B. N., Lysson, M., Bauer, A. J., Hirner, A., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+macrophage+function+prevents+intestinal+inflammation+and+postoperative+ileus+in+rodents.">Inhibition of macrophage function prevents intestinal inflammation and postoperative ileus in rodents.</a> Gut. 56, 176-185 (2007).</li><li>Kalff, J. C., Schwarz, N. T., Walgenbach, K. J., Schraut, W. H., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocytes+of+the+intestinal+muscularis:+their+phenotype+and+isolation.">Leukocytes of the intestinal muscularis: their phenotype and isolation.</a> J. Leukoc. Biol. 63, 683-691 (1998).</li><li>Kehlet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+ileus.">Postoperative ileus.</a> Gut. 47, iv85-iv86 (2000).</li><li>Wehner, S., Schwarz, N. T., Hundsdoerfer, R., Hierholzer, C., Tweardy, D. J., Billiar, T. R., Bauer, A. J., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IL-6+within+the+rodent+intestinal+muscularis+after+intestinal+surgical+stress.">Induction of IL-6 within the rodent intestinal muscularis after intestinal surgical stress.</a> Surgery. 137, 436-446 (2005).</li><li>Kalff, J. C., Schraut, W. H., Billiar, T. R., Simmons, R. L., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+inducible+nitric+oxide+synthase+in+postoperative+intestinal+smooth+muscle+dysfunction+in+rodents.">Role of inducible nitric oxide synthase in postoperative intestinal smooth muscle dysfunction in rodents.</a> Gastroenterology. 118, 316-327 (2000).</li><li>Iyer, S., Saunders, W. B., Stemkowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Economic+burden+of+postoperative+ileus+associated+with+colectomy+in+the+United+States.">Economic burden of postoperative ileus associated with colectomy in the United States.</a> J. Manag. Care Pharm. 15, 485-494 (2009).</li><li>Miller, M. S., Galligan, J. J., Burks, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+measurement+of+intestinal+transit+in+the+rat.">Accurate measurement of intestinal transit in the rat.</a> J. Pharmacol. Methods. 6, 211-217 (1981).</li><li>Kalff, J. C., Schraut, W. H., Simmons, R. L., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+manipulation+of+the+gut+elicits+an+intestinal+muscularis+inflammatory+response+resulting+in+postsurgical+ileus.">Surgical manipulation of the gut elicits an intestinal muscularis inflammatory response resulting in postsurgical ileus.</a> Ann. Surg. 228, 652-663 (1998).</li><li>Wehner, S., Straesser, S., Vilz, T. O., Pantelis, D., Sielecki, T., de lC, V., Hirner, A., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+p38+mitogen-activated+protein+kinase+pathway+as+prophylaxis+of+postoperative+ileus+in+mice.">Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase pathway as prophylaxis of postoperative ileus in mice.</a> Gastroenterology. 136, 619-629 (2009).</li><li>Konigsrainer, I., Turck, M. H., Eisner, F., Meile, T., Hoffmann, J., Kuper, M., Zieker, D., Glatzle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+is+not+only+the+Target+but+a+Source+of+Inflammatory+Mediators+Inhibiting+Gastrointestinal+Motility+During+Sepsis.">The Gut is not only the Target but a Source of Inflammatory Mediators Inhibiting Gastrointestinal Motility During Sepsis.</a> Cell Physiol. Biochem. 28, 753-760 (2011).</li><li>Schwarz, N. T., Kalff, J. C., Turler, A., Speidel, N., Grandis, J. R., Billiar, T. R., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+jejunal+manipulation+causes+postoperative+pan-enteric+inflammation+and+dysmotility.">Selective jejunal manipulation causes postoperative pan-enteric inflammation and dysmotility.</a> Gastroenterology. 26, 159-169 (2004).</li><li>Engel, D. R., Koscielny, A., Wehner, S., Maurer, J., Schiwon, M., Franken, L., Schumak, B., Limmer, A., Sparwasser, T., Hirner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+helper+type+1+memory+cells+disseminate+postoperative+ileus+over+the+entire+intestinal+tract.">T helper type 1 memory cells disseminate postoperative ileus over the entire intestinal tract.</a> Nat. Med. , (2010).</li><li>Stoffels, B., Schmidt, J., Nakao, A., Nazir, A., Chanthaphavong, R. S., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+interleukin+10+in+murine+postoperative+ileus.">Role of interleukin 10 in murine postoperative ileus.</a> Gut. 58, 648-660 (2009).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Uno studio comparativo analizzando i diversi livelli di IM (eventratio piccolo intestino per 10 minuti contro delicatamente l&#39;ispezione del piccolo intestino con due applicatori di cotone contro IM con l&#39;evacuazione del contenuto dell&#39;intestino tenue nel cieco) ha evidenziato una correlazione tra il grado di manipolazione chirurgica e POI. Rispetto agli altri gruppi IM mostrato la più alta quantità di leucociti nel ME (PNMs, macrofagi e mastociti) conseguente POI prolungata e grave. 8. <p cl...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente / attrezzature </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Ethilon 5/0 </td><td> Ethicon </td><td> 1666H </td></tr><tr><td> Cotone applicatori </td><td> Monco </td><td> 71010 </td></tr><tr><td> catetere arterioso </td><td> Vygon </td><td> 115-798 </td></tr><tr><td> Piastra a 96 pozzetti (nero) </td><td> Greiner Bio One </td><td> 655096 </td></tr><tr><td> sfera di vetro (2 mm di diametro) </td><td> Worf </td><td> disponibile su richiesta </td></tr><tr><td> Perni insetti </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td> 26000-25 </td></tr><tr><td> Hanker Yates Reagente </td><td> Polyscience </td><td> 560694 </td></tr><tr><td> Aquatek </td><td> Merck </td><td> HC109850 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Lonza </td><td> BE12-604 F </td></tr><tr><td> FITC-destrano (MW 70000) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 46945-500mg-F </td></tr></tbody></table>

functional assessment of intestinal motility and gut wall inflammation in rodents: analyses in a standardized model of intestinal manipulation

Infiammazione del tratto gastrointestinale è un motivo comune per una varietà di malattie umane. Modelli di ricerca animali sono fondamentali per indagare il complesso cellulare e molecolare della patologia intestinale. Anche se la tunica mucosa è spesso l&#39;organo di interesse in molte malattie infiammatorie, opere recenti hanno dimostrato che il externa muscolare (ME) è un organo altamente immunocompetente che ospita una fitta rete di immunociti residenti. 1,2 Questi lavori sono stati eseguiti all&#39;interno del standardizzato modello di manipolazione intestinale (IM) che porta a infiammazione della parete intestinale, essenzialmente limitata al ME. Clinicamente questa infiammazione porta a disturbi della motilità intestinale prolungato, nota come ileo postoperatorio (POI) che è una complicazione frequente e inevitabile dopo chirurgia addominale. 3 L&#39;infiammazione è caratterizzata dalla liberazione di mediatori proinfiammatori quali IL-6 4 neurotrasmettitori o IL-1β o inibitorio come Nitric ossido (NO). 5 Successivamente, i numeri enormi di immunociti travasare nel ME, dominato dai neutrofili polimorfonucleati (PMN) e monociti e, infine, mantenere POI. duraturo, giorni 2, questa paralisi intestinale porta ad un aumento del rischio di aspirazione, traslocazione batterica e complicanze infettive fino a sepsi e insufficienza d&#39;organo multi e provoca un elevato onere economico 6. In questo manoscritto si dimostra il modello standardizzato di IM e di valutazione in vivo del transito gastrointestinale (GIT) e transito intestinale. Inoltre si dimostra un metodo per la separazione della ME dalla tunica mucosa seguita da analisi immunologiche, che è fondamentale distinguere tra le risposte infiammatorie in questi due compartimenti intestinali altamente immunoactive parete. Tutte le analisi sono facilmente trasferibili ad altri modelli di ricerca, che influenzano la funzione gastrointestinale.

Watch this Scientific Journal Video about Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation at JoVE.com

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Ileo postoperatorio (POI) è una complicanza della chirurgia addominale che porta a un aumento della morbilità e degenza prolungata. Poiché le strategie profilattiche o terapeutiche mancano intensificazione della ricerca è necessaria. Pertanto abbiamo stabilito un modello di topo standardizzata e possibile esaminare la fisiopatologia di POI e di studiare i potenziali opzioni terapeutiche.

Valutazione funzionale della motilità intestinale e Wall infiammazione intestinale nei roditori: Analisi in un modello standardizzato di manipolazione intestinale

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

functional-assessment-intestinal-motility-gut-wall-inflammation

Research

JoVE Journal

Medicine

21.9K Views.  University of Bonn. Ileo postoperatorio (POI) è una complicanza della chirurgia addominale che porta a un aumento della morbilità e degenza prolungata. Poiché le strategie profilattiche o terapeutiche mancano intensificazione della ricerca è necessaria. Pertanto abbiamo stabilito un modello di topo standardizzata e possibile esaminare la fisiopatologia di POI e di studiare i potenziali opzioni terapeutiche.

Video: Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Murino Endoscopia per<em&gt; In Vivo</em&gt; Guarigione Imaging Multimodale di Cancerogenesi e valutazione della ferita intestinale e infiammazione

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Ricerca

Medicina

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Modello murino di ischemia-riperfusione intestinale Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not routinely employed in animal models. Conventional experimental readouts often rely on post mortem and ex vivo analyses, which prevent intra-individual follow-up examinations and increase the number of study animals needed. Fluorescence-mediated tomography enables the non-invasive, repetitive, quantitative, three-dimensional assessment of fluorescent probes. It is highly sensitive and permits the use of molecular makers, which allows for the specific detection and characterization of distinct molecular targets. In particular, targeted probes represent an innovative tool for analyzing gene activation and protein expression in inflammation, autoimmune disease, infection, vascular disease, cell migration, tumorigenesis, etc. In this article, we provide step-by-step instructions on this sophisticated imaging technology for the in vivo detection and characterization of inflammation (i.e., F4/80-positive macrophage infiltration) in a widely used murine model of intestinal inflammation. This technique might also be used in other research areas, such as immune cell or stem cell tracking.

Target-specific probes represent an innovative tool for analyzing molecular mechanisms, such as protein expression in various types of disease (e.g., inflammation, infection, and tumorigenesis). In this study, we describe a quantitative three-dimensional tomographic assessment of intestinal macrophage infiltration in a murine model of colitis using F4/80-specific fluorescence-mediated tomography.

Fluorescenza-mediata di tomografia per la rilevazione e la quantificazione di infiammazione intestinale murina del macrofago-correlati

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ischemia, when the blood supply and therefore oxygen is decreased to the intestine. This leads to intestinal barrier loss and damage to the underlying tissue. Intestinal stem cells reside at the base of the crypts of Lieberk&#252;hn and are responsible for intestinal renewal during homeostasis and following injury. Ex vivo cell culture techniques have allowed for the successful study of epithelial stem cell interactions by establishing culture conditions that support the growth of three-dimensional epithelial organ-like systems (termed "enteroids" and "colonoids" from the small and large intestine, respectively). These enteroids are composed of crypt and villus-like domains and mature to contain all of the cell types found within the epithelium. Historically, murine models have been utilized to study intestinal injury. However, a porcine model offers several advantages including similarity of size as well as gastrointestinal anatomy and physiology to that of humans. By utilizing a porcine model, we establish a protocol in which segmental loops of intestinal ischemia can be created within a single animal, enabling the study of differing time points of ischemic injury and repair in vivo. Additionally, we describe a method to isolate and culture the intestinal stem cells from the ischemic loops of intestine, allowing for the continued study of epithelial repair, modulated by stem cells, ex vivo.

This protocol will enable readers to successfully establish a porcine model of segmental intestinal ischemia and subsequently isolate and culture intestinal stem cells for the study of epithelial repair following injury.

Isolamento delle cellule staminali intestinale e cultura in un modello porcino di segmentale piccola Ischemia intestinale

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Utilizzo di una biopsia chimica per la valutazione della qualità dell'innesto

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Standardized Histomorphometric Evaluation of Osteoarthritis in a Surgical Mouse Model

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, primarily in the hip and knee joints, which results in significant impacts on patient mobility and quality of life. To date, there are no existing curative therapies for OA able to slow down or inhibit cartilage degeneration. Presently, there is an extensive body of ongoing research to understand OA pathology and discover novel therapeutic approaches or agents that can efficiently slow down, stop, or even reverse OA. Thus, it is crucial to have a quantitative and reproducible approach to accurately evaluate OA-associated pathological changes in the joint cartilage, synovium, and subchondral bone. Currently, OA severity and progression are primarily assessed using the Osteoarthritis Research Society International (OARSI) or Mankin scoring systems. In spite of the importance of these scoring systems, they are semiquantitative and can be influenced by user subjectivity. More importantly, they fail to accurately evaluate subtle, yet important, changes in the cartilage during the early disease states or early treatment phases. The protocol we describe here uses a computerized and semiautomated histomorphometric software system to establish a standardized, rigorous, and reproducible quantitative methodology for the evaluation of joint changes in OA. This protocol presents a powerful addition to the existing systems and allows for more efficient detection of pathological changes in the joint.

The current protocol establishes a rigorous and reproducible method for quantification of morphological joint changes that accompany osteoarthritis. Application of this protocol can be valuable in monitoring disease progression and evaluating therapeutic interventions in osteoarthritis.

Valutazione istomormetrica standardizzata dell'osteoartrite in un modello di topo chirurgico

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing enterocolitis (NEC). However, a mechanistic link between these two conditions remains yet to be discovered. We have adopted a murine model of chorioamnionitis involving lipopolysaccharide (LPS)-induced fetal exposure to maternal inflammation (FEMI). This model of FEMI induces a sterile maternal, placental, and fetal inflammatory cascade, which is also present in many cases of clinical chorioamnionitis. Although models exist that utilize live bacteria and more accurately mimic the pathophysiology of an ascending infection resulting in chorioamnionitis, these methods may cause indirect effects on development of the immature intestinal tract and the associated developing microbiome. Using this protocol, we have demonstrated that LPS-induced FEMI results in a dose-dependent increase in pregnancy loss and preterm birth, as well as disruption of normal intestinal development in offspring. Further, we have demonstrated that FEMI significantly increases intestinal injury and serum cytokines in offspring, while simultaneously decreasing goblet and Paneth cells, both of which provide a first line of innate immunity against intestinal inflammation. Although a similar model of LPS-induced FEMI has been used to model the association between chorioamnionitis and subsequent abnormalities of the central nervous system, to our knowledge, this protocol is the first to attempt to elucidate a mechanistic link between chorioamnionitis and later perturbations in intestinal development as a potential link between chorioamnionitis and NEC.

We developed a model of chorioamnionitis to simulate fetal exposure to maternal inflammation (FEMI) without complications of live organisms to examine the effects of FEMI on development of the offspring&#8217;s intestinal tract. This allows for study of mechanistic causes for development of intestinal injury following chorioamnionitis.

Un modello murino di esposizione fetale all'infiammazione materna per studiare gli effetti della corioamionite acuta sullo sviluppo intestinale appena nato

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable health and financial burden on individuals and society. Therefore, it is critical to investigate the mechanisms underlying the pathogenesis and development of IBD. Here, a gut microbiota antigen-specific T cell transfer colitis model is described. CBir1 flagellin has been recognized as the immunodominant gut bacterial antigen in experimental colitis and patients with Crohn&#39;s disease. CBir1 TCR transgenic na&#970;ve CD4+ T cells, specific to CBir1 flagellin, can induce chronic colitis after adoptive transfer into immune-deficient Rag1-/- mice. The disease severity is assessed by histopathology. The CD4+ T cell phenotypes in colonic lamina propria are also determined. This model closely resembles the development of IBD, which provides an ideal murine model for investigating the mechanisms driving the pathogenesis of IBD and testing the potential drugs for treating IBD.

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

In this protocol, a gut microbiota antigen-specific T cell adoptive transfer colitis model is described. CD4+ T cells are isolated from CBir1 TCR transgenic mice. These are specific for an immunodominant gut microbiota antigen CBir1 flagellin, which is transferred into recipient Rag1-/- mice, leading to intestinal inflammation.

Induzione dell'infiammazione intestinale mediante trasferimento adottivo di cellule T CBir1 TCR transgeniche CD4 + a topi immunodeficienti

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

Isolation of Murine Intestinal Mesenchyme Resulting in a High Yield of Telocytes

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, fibroblasts, myofibroblasts, smooth muscle cells, immune cells, and the recently identified cell type, telocytes. Telocytes are unique mesenchymal cells with long cytoplasmic processes, reaching a distance of tens to hundreds of microns from the cell body. Telocytes have recently emerged as an important intestinal stem cell niche component, providing Wnt proteins that are essential for stem and progenitor cell proliferation.
Although protocols on how to isolate mesenchyme from the mouse intestine are available, it is not clear whether these procedures allow the efficient isolation of telocytes. Isolating telocytes efficiently requires special protocol adjustments that would allow dissociation of the strong cell-cell contact between telocytes and neighboring cells without affecting their viability. Here, available intestinal mesenchyme isolation protocols were adjusted to support the successful isolation and culture of mesenchyme containing a relatively high yield of viable single-cell telocytes.
The obtained single-cell suspension can be analyzed by several techniques, such as immunostaining, cell sorting, imaging, and mRNA experiments. This protocol yields mesenchyme with sufficiently conserved antigenic and functional properties of telocytes, and can be used for several applications. For example, they can be used for co-culture with mouse- or human-derived organoids to support organoid growth with no growth factor supplementation, to better reflect the situation in the original tissue.

Here, we present a protocol to isolate murine intestinal mesenchyme, including telocytes. These can be used for several applications, such as co-culture with mouse or human-derived organoids, to support growth and better reflect the situation in the original tissue.

Isolamento del mesenchima intestinale murino con conseguente alta resa di telociti

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, ...

Manipolazione standardizzata di Tuina per l'artrosi del ginocchio nei ratti

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its mechanism. Therefore, the manipulation of animal models of knee osteoarthritis is critical. This protocol provides a standard process for Tuina manipulation on KOA rats and a preliminary exploration of the mechanism of Tuina for KOA. The press and kneading manipulation method (a kind of Tuina manipulation that refers to pressing and kneading the specific area of the body surface) is applied on 5 acupoints around the knee joint of rats. The force and frequency of the manipulation were standardized by finger pressure recordings, and the position of the rat during manipulation is described in detail in the protocol. The effect of manipulation can be measured by pain behavior tests and microscopic findings in synovial and cartilage. KOA rats showed significant improvement in pain behavior. The synovial tissue inflammatory infiltration was reduced in the Tuina group, and the expression of tumor necrosis factor (TNF)-&#945; was significantly lower. Compared to the control group, chondrocyte apoptosis was less in the Tuina group. This study provides a standardized protocol for Tuina manipulation on KOA rats and preliminary proof that the therapeutic effects of Tuina may be related to reducing synovial inflammation and delayed chondrocyte apoptosis.

Autore in primo piano: Comprendere il meccanismo della manipolazione del tuina nei ratti 

We present a protocol for Tuina manipulation performed on plaster-immobilized-induced knee osteoarthritis rats. Based on the preliminary results, it suggested that the efficacy of the method relied on the reduction of inflammation and cartilage loss.

Manipolazione del tuina per ridurre l'infiammazione e la perdita di cartilagine nei ratti affetti da osteoartrite del ginocchio

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...