Name: application of two-spotted spider mite tetranychus urticae for plant-pest interaction studies
Uploaded: 2014-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
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This project was funded by the Government of Canada through Genome Canada and the Ontario Genomics Institute (OGI-046), and Ontario Research Fund&#8211;Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (to M.G. and V.G.). T.V.L. is a postdoctoral fellow of the Fund for Scientific Research Flanders (FWO).

1. Manutenzione del ragnetto Popolazione NOTA: Acari sono allevati in California fagioli rossi (Phaseolus vulgaris). <ol><li> Coltivare piante di fagioli da semi per 2-3 settimane prima infestazione. </li><li> Intermix queste piante con piante infestate; acari adulti saranno ben presto colonizzare materiale vegetale fresco. </li><li> Rimuovere le vecchie piante di fagiolo infestate ogni 7-10 giorni, la loro sostituzione con piante fresche. </li></ol> 2. Raccolta Adult Female acari <ol><li> Acari Collection utilizzando il metodo di lavaggio <ol><li> Per raccogliere gli acari, posizionare un impianto di fagioli freschi in contatto con le piante infestate 1-2 giorni prima dell&#39;esperimento. </li><li> Utilizzare 20-30 piante di fagioli freschi di raccogliere 1.000 a 2.000 acari femmina adulta. </li><li> Preparare una soluzione di Tween 20 a 0,001% con acqua di rubinetto a temperatura ambiente. </li><li> Lavare piante di fagiolo infestate nella soluzione di Tween 20, utilizzando 2 a 3 piante alla volta. </li><li&gt; Ogni impianto viene lavato 2-3x per raccogliere tutti gli acari da foglie. </li><li> Passaggio Complete 2.1.4 entro 10 minuti per evitare la mortalità acaro. </li></ol></li><li> Isolamento di femmina adulta acari dalla filtrazione della sospensione Mite attraverso vagli di definito Mesh Size <ol><li> Preparare setacci delle seguenti dimensioni delle maglie: 500 micron (per rimuovere i detriti) e 300 micron (per raccogliere acari adulti di sesso femminile) (Figura 1A). </li><li> Filtrare la sospensione attraverso il setaccio micron 500. </li><li> ReFilter la sospensione attraverso il setaccio 300 micron. Saranno conservati per adulti acari femminili. </li><li> Immergere un setaccio di 300 micron con adulti acari femminili in acqua di rubinetto pulita per rimuovere il Tween 20. </li><li> Diffondere acari in un unico strato sul fondo dello staccio. </li><li> Utilizzare carta assorbente per togliere l&#39;acqua in eccesso dalla rete e sui lati del setaccio. NOTA: Ciò avviene perché gli acari hanno bisogno di asciugarsi rapidamente per recuperare. </li><li> Preparare un assieme come mostrato in Figura 1B; questo permetterà acari di muoversi liberamente, ma impedirà loro di fuggire. </li><li> Posizionare il setaccio da acari in cima al setaccio che viene utilizzato come supporto. </li><li> Surround setaccio fondo con acqua per evitare gli acari di disperdersi. NOTA: Gli acari si avvierà il recupero dopo circa 5 min. Dopo circa 30 minuti, il numero di acari movimento è sufficiente per avviare la raccolta (Figura 1D). Gli acari devono essere raccolti entro 1 ora, in quanto producono la seta che interferirà con la collezione. </li></ol></li></ol> 3. Infestazione Pianta con acari NOTA: Una volta che gli acari femmina adulti hanno recuperato, possono essere utilizzati per gli impianti infestazione. Ci sono due metodi utilizzati per infestare impianti sperimentali con gli acari femmina adulta: a) utilizzando un pennello sottile (sezione protocollo 3.1) e b) utilizzando una pompa o linea di vuoto (sezione protocollo 3.2). <ol><li> Mite infestazione utilizzando un pennello NOTA: Spider acaricon un pennello viene usato per l&#39;applicazione di un massimo di 30 acari per pianta. <ol><li> Utilizzare un capello morbido pennello arte round di dimensioni 00 o più fine. </li><li> Il pennello bagnato con acqua di rubinetto RT. </li><li> Prendere delicatamente acari dal setaccio con la punta del pennello e trasferirli alla pianta. </li></ol></li><li> Infestazione di acari utilizzando una pompa NOTA: infestazione delle piante da acari raccolti da una linea / pompa del vuoto viene utilizzato quando vengono applicati più di 30 acari. Per questo metodo, una pompa a vuoto per componenti microelettronici pickup o una linea di vuoto può essere utilizzato. È importante mantenere costante il flusso dell&#39;aria e sufficientemente resistente (2-4 psi). <ol><li> Attaccare una punta di pipetta 1 ml al tubo che si collega alla linea o pompa del vuoto utilizzando un taglio 1,5 ml provetta da centrifuga a fondo come un adattatore tra il tubo della pompa / del vuoto e la punta. </li><li> Posizionare un pezzo di carta assorbente tra la punta della pipetta e l&#39;adattatore (1,5 ml provetta). NOTA: lo scopo di questo è di acari intrappolare all&#39;interno tegli punta di pipetta durante il processo di aspirazione ed anche per ridurre il flusso d&#39;aria (Figura 1C). </li><li> Raccogliere acari direttamente dal setaccio usando la punta della pipetta. </li><li> In alternativa, raccogliere gli acari uno per uno da foglie infestate con uno stereoscopio. </li><li> Quando il numero di acari è stato raccolto, rimuovere la punta della pipetta dal tubo, facendo in modo che il pezzo di carta assorbente sul retro della punta della pipetta è stata toccata. </li><li> Raccogliere acari toccando la punta della pipetta e aggregazione gli acari insieme. Poi, metterli sulla foglia; in pochi secondi, gli acari inizieranno a disperdersi sulla foglia. </li></ol></li></ol> 4. Registrazione e valutazione del danno Flora <ol><li> Danni registrazione Flora NOTA: Per A. thaliana, danni pianta viene valutata dopo 4 giorni di alimentazione acaro. Il danno è registrata come la superficie totale di macchie clorotiche. Per la misurazione danni, l&#39;intero rosetta viene tagliato e scansione.Parametri di scansione descritti sono per uno scanner Epson V30, ma agirà come un buon punto di partenza per qualsiasi scanner piano simile. Mantenere parametri di scansione costanti per tutti gli esperimenti che permette il confronto tra singole corse esperimento. <ol><li> Coprire letto scanner con foglio trasparente per evitare di contaminare la superficie dello scanner con materiale vegetale. </li><li> Tagliare un intero rosone e posto sul piatto dello scanner in modo adaxial (superiore) lato delle foglie si trovano ad affrontare la sorgente luminosa scanner e elemento di cattura. In alternativa, se le rosette sono troppo densi per catturare singole foglie senza sovrapposizione, sezionare la rosetta in fogli singoli o gruppi di foglie non sovrapposte con le forbici sottili prima di mettere sul piatto dello scanner. Più rosette possono essere acquisiti simultaneamente. </li><li> Coprire rosette o foglie con un pezzo di carta bianco per evitare adesione e la contaminazione del coperchio dello scanner. </li><li> Chiudere il coperchio dello scanner ed eseguire una scansione con i seguenti parametri: Risoluzione: 1,200 dpi; Modo colore: Adobe RGB; Luminosità: +25; Tipo di file: JPEG massima qualità. </li><li> Salvare i file di immagine per la successiva analisi dei danni. </li></ol></li><li> Danni pianta Quantificazione NOTA: L&#39;area del danno è calcolato manualmente con Photoshop. A causa di notevoli differenze in forma di foglia e l&#39;intensità del colore dei sintomi a seguito dell&#39;alimentazione acari, metodi automatici erano inaffidabili. Così, un metodo griglia viene usata per valutare i danni pianta: <ol><li> Aprire l&#39;immagine della pianta con Photoshop. </li><li> Create un nuovo livello, poi sovrapporre un&#39;immagine digitalizzata con una griglia di 0,25 mm x 0,25 millimetri divisioni (View o Visualizza - Mostra - Grid, scorciatoia da tastiera Ctrl + &#39;). </li><li> Su uno strato sovrapposto, indicare le zone di foglie danneggiate utilizzando un punto (utilizzare la funzione &quot;Pencil Tool&quot;, scorciatoia da tastiera B). Utilizzare un singolo punto per ogni quadrato della griglia di sotto del quale vi è un danno concernente più metà dell&#39;unità griglia. La dimensione del punto è definito in pixel (cioè, </em&gt; 52 pixel per punto). </li><li> Quando tutte le caselle della griglia che mostrano i danni stabilimento che copre almeno la metà delle unità di rete sono contrassegnati con un punto, utilizzare lo strumento istogramma (Finestra - Istogramma) per determinare il numero totale di pixel del livello. Lo strumento istogramma consente di misurare il numero di pixel. Poiché ogni punto è rappresentato da un numero costante e nota di pixel, lo strumento istogramma misurerà il numero totale di pixel, che rappresenta il numero totale di punti, e, per estensione, il numero totale di caselle marcate. </li><li> Calcolare il numero di &quot;punti&quot; contrassegnate utilizzando la formula: Numero di punti = numero totale di pixel / numero di pixel per punto. </li><li> Calcolare l&#39;area totale dei danni moltiplicando il numero di punti marcati sul immagine dalla superficie di 1 quadrato della griglia, come un punto corrisponde ad un quadrato della griglia. </li></ol></li></ol>

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	<li>Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mites injurious to economic plants. , (1975).</li><li>Migeon, A., Dorkeld, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spider+Mites+Web:+a+comprehensive+database+for+the+Tetranychidae.">Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae.</a> http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).</li><li>Croft, B. A., Vandebaan, H. 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The authors have nothing to disclose.

Questo video dimostra protocolli utilizzati per isolare e ad infestare le piante con un gran numero di acari adulti di sesso femminile. Anche se abbiamo presentato questo protocollo usando A. thaliana, può essere usato per qualsiasi sistema di interazione acaro pianta-ragno e viene attualmente applicato con successo anche su piante di pomodoro e vite (Vitis vinifera). I rendimenti protocollo risultati riproducibili, indicando che gli acari raccolti sono stato fisiologico paragonabile (Figura 3...

Interazione pianta-parassita è un argomento di grande importanza scientifica ed economica. È stato storicamente studiata utilizzando entrambe le piante coltivate (come pomodoro) e pianta modello, A. thaliana. In entrambi i casi, la suscettibilità della pianta erbivoro potrebbe essere misurata sia direttamente attraverso la valutazione degli impianti fenotipo dopo l&#39;attacco di erbivori o indirettamente attraverso la valutazione delle prestazioni dei parassiti. Misure dirette di pianta suscettibilità sono stati utilizzati precedentemente per un certo numero di specie di parassiti utilizzando una serie di metodi. Ad esempio, herbivory di larve di lepidotteri è misurato come una stima della porzione di tessuto vegetale consumata da uno Plutella xylostella (diamondback falena) o Trichoplusia ni (cavolo looper) ad occhio nudo con l&#39;aiuto di una griglia 12. Inoltre, ci sono metodi che utilizzano l&#39;imaging digitale di danni foglia con successiva analisi quantitativa delle immagini. Tali metodi sono stati usati instudi di A. interazione thaliana con Frankliniella occidentalis (tripidi fiore occidentali) 13, Scaptomyza flava (foglia-mining drosophila) 14, e T. ni 15. Misure indirette di piante suscettibilità sono ampiamente utilizzati negli studi di interazione pianta-parassita. Ad esempio, suscettibilità di A. thaliana Peach afide Myzus persicae erbivori in genere viene valutata attraverso l&#39;analisi dei parassiti fecondità e la descrizione della morfologia lorda di un impianto dopo l&#39;interazione 16,17. Un altro tipico indicatore indiretto di A. thaliana suscettibilità a un parassita è una valutazione del peso secco o umido del erbivoro. Questo parametro è comunemente utilizzato per caratterizzare erbivori di lepidoterans, come Pieris rapae (piccolo bianco), P. xylostella, o T. ni al loro larve o pupe stadi 15,17. Acari sono cellule-content feeders. Mite danno indotto è riconosciuto come un insieme di macchie clorotiche che variano di colore dal bianco al verde pallido. La suscettibilità di una pianta ospite per ragnetto erbivori è stato precedentemente valutato sia indirettamente attraverso l&#39;analisi dei giorni di spettacolo ragnetto post-infestazione 18,19, o direttamente con morfologia lordo delle piante settimane post-infestazione 18 o utilizzando un imaging digitale di foglie esposte agli acari per giorni con successiva analisi delle immagini automatizzata 19. Questi metodi sono stati sviluppati e utilizzati per lo studio di interazioni tra piante di pomodoro e T. urticae, e in genere utilizzato un piccolo numero di acari (5-15 al trattamento) che sono stati raccolti dalla popolazione di acari mista e sono stati collocati sulla superficie del foglio con una spazzola a setole morbide. Tuttavia, questi metodi non sono adatti per studi in cui devono essere applicate maggior numero di acari. Inoltre, durante l&#39;elaborazione diretta delle immagini foglia in software di analisi dell&#39;immaginecome Adobe Photoshop (San Jose, CA) o ImageJ 20 possono essere utilizzate per l&#39;analisi di danni pomodoro, questi protocolli devono essere modificate in modo da applicare a foglie che hanno una maggiore riflettività della superficie o sono leggermente colorate e hanno tricomi altamente visibili ( ad esempio, A. thaliana) che interferiscono con la selezione automatica delle macchie clorotiche che segnano danni pianta. Inoltre, lo stadio di sviluppo di acari che possono essere facilmente utilizzati con i metodi precedenti si limita alle femmine adulte più diffusi e facilmente identificabili ed esclude l&#39;utilizzo di altri stadi di sviluppo. Il primo passo fondamentale verso l&#39;analisi high-throughput di interazione acari pianta ragno è di stabilire, protocolli semplici e robuste riproducibili a sfidare le piante con acari e affidabile valutare i risultati di interazione. In questo video, un metodo efficiente per la raccolta rapida e semplice di un grande numeroro di acari adulti di sesso femminile, la loro applicazione su un host impianto sperimentale, e la valutazione dei danni dell&#39;impianto a causa di alimentazione ragnetto sono descritti. Il protocollo presentato consente la raccolta veloce ed efficiente di centinaia di persone, in qualsiasi stadio di sviluppo (uova, larve, ninfe, maschi adulti e femmine) che può essere utilizzata per la successiva applicazione sperimentale. Inoltre, questi protocolli possono essere applicati a qualsiasi pianta ospite acari, ma sono specificamente dimostrato nel caso di A. thaliana.

<table><tbody><tr><td>Plant material:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>California red kidney bean</td><td>Stokes, Thorold, ON, Canada</td><td></td><td>2 week old, well infested with spider mites 2 or 3 days before use. Other cultivars of &lt;em&gt;Phaseolus vulgaris&lt;/em&gt; can be used.</td></tr><tr><td>Chemicals:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>1% stock solution is prepared to simplify aliquoting</td></tr><tr><td>Tap water</td><td></td><td></td><td>At room temperature, heat- and cold-shock affect mite survival rate and performance</td></tr><tr><td>Other materials and equipment:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic tray</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Set of scissors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 L beakers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paper towels</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sets of sieves</td><td>Manufactured in house</td><td></td><td>Detailed instructions are available</td></tr><tr><td>Thin brush</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette tips</td><td></td><td></td><td>0.2 and 1 ml</td></tr><tr><td>1.5 ml centrifuge tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Air pump</td><td></td><td></td><td>Aquarium type pump with inverted air flow. Vacuum line can be used. Required pressure drop is approx. 2-4 psi</td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scanner</td><td>Epson</td><td>V30</td><td>Any flatbed scanner allowing necessary degree of control over scan quality. We use Epson V30 for our experiments.</td></tr><tr><td>Computer</td><td></td><td></td><td>Windows or OS X PC which is compatible with scanner hardware and Adobe Photoshop software.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop software</td><td>Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA</td><td>various</td><td>Any version with Histogram tool included.</td></tr></tbody></table>

application of two-spotted spider mite tetranychus urticae for plant-pest interaction studies

Il ragnetto due maculato, Tetranychus urticae, è un onnipresente erbivoro artropode polifago che si nutre di una notevole vasta gamma di specie, con più di 150 di valore economico. Si tratta di un parassita importante di colture in serra, specialmente in Solanacee e Cucurbitacee (ad esempio, pomodori, melanzane, peperoni, cetrioli, zucchine) e ornamentali serra (ad esempio, rose, crisantemi, garofani), colture annuali di campo (come il mais, cotone, soia e barbabietola da zucchero), e in colture perenni (erba medica, fragole, uva, agrumi, e susine) 1,2. Oltre al polyphagy estremo che rende un importante parassiti agricoli, T. urticae ha una tendenza a sviluppare resistenza ad una vasta gamma di insetticidi e acaricidi che sono usati per il suo controllo 3-7. T. urticae è un ottimo organismo sperimentale, in quanto ha un ciclo vitale rapido (7 giorni a 27 ° C)e può essere facilmente mantenuta ad alta densità in laboratorio. Metodi per saggiare l&#39;espressione genica (compresi ibridazione in situ e colorazione degli anticorpi) e per inattivare l&#39;espressione del ragnetto geni endogeni utilizzando RNA interference sono stati sviluppati 8-10. Recentemente, l&#39;intera sequenza del genoma di T. urticae è stata riportata, creando l&#39;opportunità di sviluppare questo parassita erbivoro come organismo modello con risorse genomiche equivalenti che già esistono in alcune delle sue piante ospiti (Arabidopsis thaliana e il pomodoro Solanum lycopersicum) 11. Insieme, questi organismi modello potrebbero fornire approfondimenti basi molecolari delle interazioni pianta-parassiti. Qui, un metodo efficiente per la raccolta rapida e semplice di un gran numero di acari femmina adulta, la loro applicazione su un host impianto sperimentale, e la valutazione del danno pianta causa alimentazione ragnetto sono descritti. Il protocollo presentato enAbles raccolta veloce ed efficiente di centinaia di persone, in qualsiasi stadio di sviluppo (uova, larve, ninfe, maschi adulti e femmine) che può essere utilizzata per la successiva applicazione sperimentale.

Utilizzo di 20-30 piante di fagiolo infestate, si può raccogliere circa 2.000 acari femmina adulta con setacci. Il tempo necessario per infestare 10 impianti con 20 acari per pianta è di circa 15 minuti se si utilizza un pennello per trasferire gli acari. Combinazioni di metodi di raccolta e di applicazione sono mostrati nella Figura 2. Questo protocollo genera risultati riproducibili di danni pianta, dimostrando che gli acari raccolti sono stato fisiologico simile e adatt...

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Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Protocolli per la preparazione efficiente di campioni omogenei di acari, infestazione di piante sperimentali, e la valutazione del danno dell&#39;impianto, come richiesto per gli studi di interazione pianta-parassita sono stati sviluppati.

Applicazione di due-macchiato Spider Mite<em&gt; Tetranychus urticae</em&gt; Per gli Studi Plant-parassita di interazione

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

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Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

17.6K Views.  The University of Western Ontario.  Protocolli per la preparazione efficiente di campioni omogenei di acari, infestazione di piante sperimentali, e la valutazione del danno dell'impianto, come richiesto per gli studi di interazione pianta-parassita sono stati sviluppati. 

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Remote Sensing Evaluation of Two-spotted Spider Mite Damage on Greenhouse Cotton

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the two-spotted spider mite (TSSM), Tetranychus urticae Koch, on greenhouse grown cotton. TSSM is a polyphagous pest which occurs on a variety of field and horticultural crops. It often becomes an early season pest of cotton in damaging proportions as opposed to being a late season innocuous pest in the mid-southern United States. Evaluation of acaricides is important for maintaining the efficacy of and preventing resistance to the currently available arsenal of chemicals and newly developed control agents. Enumeration of spider mites for efficacy evaluations is laborious and time consuming. Therefore, subjective visual damage rating is commonly used to assess density of spider mites. The NDVI (Normalized Difference Vegetation Index) is the most widely used statistic to describe the spectral reflectance characteristics of vegetation canopy to assess plant stress and health consequent to spider mite infestations. Results demonstrated that a multispectral optical sensor is an effective tool in distinguishing varying levels of infestation caused by T. urticae on early season cotton. This remote sensing technique may be used in lieu of a visual rating to evaluate insecticide treatments.

This manuscript describes a multispectral optical sensor that effectively detected damage to early season cotton artificially infested with varying densities of the two-spotted spider mite populations.

Valutazione Remote Sensing of Two-macchiato Danni ragnetto su Greenhouse Cotton

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the ...

Ricerca

Ambiente

Development of Metarhizium anisopliae as a Mycoinsecticide: From Isolation to Field Performance

A major concern when developing commercial mycoinsecticides is the kill speed compared to that of chemical insecticides. Therefore, isolation and screening for the selection of a fast-acting, highly virulent entomopathogenic fungus are important steps. Entomopathogenic fungi, such as Metarhizium, Beauveria, and Nomurea, which act by contact, are better suited than Bacillus thuringiensis or nucleopolyhedrosis virus (NPV), which must be ingested by the insect pest. In the present work, we isolated 68 Metarhizium strains from infected insects using a soil dilution and bait method. The isolates were identified by the amplification and sequencing of the ITS1-5.8S-ITS2 and 26S rDNA region. The most virulent strain of Metarhizium anisopliae was selected based on the median lethal concentration (LC50) and time (LT50) obtained in insect bioassays against III-instar larvae of Helicoverpa armigera. The mass production of spores by the selected strain was carried out with solid-state fermentation (SSF) using rice as a substrate for 14 days. Spores were extracted from the sporulated biomass using 0.1% tween-80, and different formulations of the spores were prepared. Field trials of the formulations for the control of an H. armigera infestation in pigeon peas were carried out by randomized block design. The infestation control levels obtained with oil and aqueous formulations (78.0% and 70.9%, respectively) were better than the 63.4% obtained with chemical pesticide.

Development of Metarhizium anisopliae as a Mycoinsecticide: From Isolation to Field Performance

Here, we report the different stages involved in the knowledge-based development of an effective mycoinsecticide, including the isolation, identification, screening, and selection of the "best-fit" entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae, for the control of insect pests in agriculture.

Sviluppo di<em&gt; Metarhizium anisopliae</em&gt; Come micosintetizzatore: dall&#39;isolamento al campo

A major concern when developing commercial mycoinsecticides is the kill speed compared to that of chemical insecticides. Therefore, isolation and ...

Detached Leaf Assays to Simplify Gene Expression Studies in Potato During Infestation by Chewing Insect Manduca sexta

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more streamlined herbivory protocols. Perturbations of chewing insects are usually studied in whole plant systems. While this whole organism strategy is popular, it is not necessary if similar observations can be replicated in a single detached leaf. The assumption is that basic elements required for signal transduction are present within the leaf itself. In the case of early events in signal transduction, cells need only to receive the signal from the perturbation and transmit that signal to neighboring cells which are assayed for gene expression.
The proposed method simply changes the timing of the detachment. In whole plant experiments, larvae are confined to a single leaf which is eventually detached from the plant and assayed for gene expression. If the order of excision is reversed, from last in whole plant studies, to first in the detached study, the feeding experiment is simplified.
Solanum tuberosum var. Kennebec is propagated by nodal transfer in a simple tissue culture medium and transferred to soil for further growth if desired. Leaves are excised from the parent plant and relocated to Petri dishes where the feeding assay is conducted with the larval stages of M. sexta. Damaged leaf tissue is assayed for the expression of relatively early events in signal transduction. Gene expression analysis identified infestation-specific Cys2-His2 (C2H2) transcription factors, confirming the success of using detached leaves in early response studies. The method is easier to perform than whole plant infestations and uses less space.

The presented method creates natural herbivore damaged plant tissue through the application of Manduca sexta larvae to detached leaves of potato. The plant tissue is assayed for expression of six transcription factor homologs involved in early responses to insect herbivory.

Secondo i saggi foglia distaccati per semplificare gli studi sull'espressione genica nelle patate durante l'infestazione da mawing Insect Manduca sexta

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form loose callus on Murashige and Skoog (MS) basal media with the plant hormones 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D, 1.0 mg L-1) and kinetin (KT, 0.1 mg L-1). Callus formed after 3 or 4 rounds of subculturing, each lasting 28 days. Loose callus (about 3 g) was then inoculated into B5 liquid media containing the same plant hormones and was cultured in a shaking incubator (120 rpm) in the dark at 25 &#177; 1 &#176;C. After 3&#8722;4 subcultures, a cell suspension derived from tea leaf was established at a subculture ratio ranging between 1:1 and 1:2 (suspension mother liquid: fresh medium). Using this platform, six insecticides (5 &#181;g mL-1 each thiamethoxam, imidacloprid, acetamiprid, imidaclothiz, dimethoate, and omethoate) were added into the tea leaf-derived cell suspension culture. The metabolism of the insecticides was tracked using liquid chromatography and gas chromatography. To validate the usefulness of the tea cell suspension culture, the metabolites of thiamethoxan and dimethoate present in treated cell cultures and intact plants were compared using mass spectrometry. In treated tea cell cultures, seven metabolites of thiamethoxan and two metabolites of dimethoate were found, while in treated intact plants, only two metabolites of thiamethoxam and one of dimethoate were found. The use of a cell suspension simplified the metabolic analysis compared to the use of intact tea plants, especially for a difficult matrix such as tea.

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

This work presents a protocol for establishing a cell suspension culture derived from tea (Camellia sinensis L.) leaves that can be used to study the metabolism of external compounds that can be taken up by the whole plant, such as insecticides.

Studio sul metabolismo di sei insetticidi sistemici in una nuova coltura di sospensione cellulare derivata dal tè (Camellia Sinensis L.) plurale di "leaf"

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Biochimica

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides in attempts to control its populations eliminates natural enemies and competitor flower thrips species, thereby increasing its populations. An unsustainable situation develops with concomitant resistant pest populations, secondary pest outbreaks, and environmental degradation. Integrated pest management utilizes knowledge of pest and natural enemy relationships to implement tactics that are environmentally friendly and sustainable. Minute pirate bugs are the most important worldwide predators of thrips. They can suppress and ultimately control Frankliniella species flower thrips. Flower samples taken at least weekly are needed to understand predator-prey dynamics. Shown here is the sampling of the flowers of fruiting vegetables and companion plants to estimate the densities of individual thrips and minute pirate bug species. Representative data illustrates how the protocol is used to determine the efficacy of management tactics over time and how to evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs. The sampling protocol is similarly adaptable to sampling thrips and minute pirate bugs in other plant species hosts.

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Presented here is a protocol to determine the number of thrips and minute pirate bug predators in crops over multiple dates in field experiments. Also illustrated is how to determine the efficacy of management tactics against thrips and evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs.

Campionamento per la stima delle specie di Frankliniella Dei corci e dei predatori delle specie di Orio negli esperimenti sul campo

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...

Leveraging Micro-CT Scanning to Analyze Parasitic Plant-Host Interactions

Micro-CT scanning has become an established tool in investigating plant structure and function. Its non-destructive nature, combined with the possibility of three-dimensional visualization and virtual sectioning, has allowed novel and increasingly detailed analysis of complex plant organs. Interactions among plants, including between parasitic plants and their hosts, can also be explored. However, sample preparation before scanning becomes crucial due to the interaction between these plants, which often differ in tissue organization and composition. Furthermore, the broad diversity of parasitic flowering plants, ranging from highly reduced vegetative bodies to trees, herbs, and shrubs, must be considered during the sampling, treatment, and preparation of parasite-host material. Here two different approaches are described for introducing contrast solutions into the parasite and/or host plants, focusing on analyzing the haustorium. This organ promotes connection and communication between the two plants. Following a simple approach, details of haustorium tissue organization can be explored three-dimensionally, as shown here for&#160;euphytoid, vine, and mistletoe parasitic species. Selecting specific contrasting agents and application approaches also allow detailed observation of endoparasite spread within the host body and detection of direct vessel-to-vessel connection between parasite and host, as shown here for an obligate root parasite. Thus, the protocol discussed here can be applied to the broad diversity of parasitic flowering plants to advance the understanding of their development, structure, and functioning.

Micro-CT is a non-destructive tool that can analyze plant structures in three dimensions. The present protocol describes the sample preparation to leverage micro-CT to analyze parasitic plant structure and function. Different species are used to highlight the advantages of this method when coupled with specific preparations.

Sfruttare la scansione micro-CT per analizzare le interazioni parassitarie pianta-ospite

Micro-CT scanning has become an established tool in investigating plant structure and function. Its non-destructive nature, combined with the possibility ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

Saggi biologici per la resistenza di monitoraggio Insetticida

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

Biologia

Parassita artificiale dell'ospite mediante Trichogramma dendrolimi ed estrazione del veleno

Extracting Venom from the Parasitoid Wasp Trichogramma dendrolimi Using an Artificial Host

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, parasitoid wasps inject venom into their hosts to suppress their hosts&#39; immunity, modulate hosts&#39; development, metabolism, and even behavior. With over 600,000 estimated species, the diversity of parasitoid wasps surpasses that of other venomous animals, such as snakes, cone snails, and spiders. Parasitoid wasp venom is an underexplored source of bioactive molecules with potential applications in pest control and medicine. However, collecting parasitoid venom is challenging due to the inability to use direct or electrical stimulation and the difficulty in dissection because of their small size. Trichogramma is a genus of tiny (~0.5 mm) egg parasitoid wasps that are widely used for the biological control of lepidopteran pests in both agriculture and forests. Here, we report a method for extracting venom from T. dendrolimi using artificial hosts. These artificial hosts are created with polyethylene film and amino acid solutions and then inoculated with Trichogramma wasps for parasitism. The venom was subsequently collected and concentrated. This method enables the extraction of large amounts of Trichogramma venom while avoiding contamination from other tissues caused by dissection, a common issue in venom reservoir dissection protocols. This innovative approach facilitates the study of Trichogramma venom, paving the way for new research and potential applications.

Autore in primo piano: Metodo efficiente di estrazione del veleno dalle vespe parassitoidi Trichogramma 

Here, we present a protocol for extracting venom from Trichogramma dendrolimi using an artificial host created with polyethylene film and amino acid solution.

Estrazione del veleno dalla vespa parassitoide Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, ...

Applicazione di due-macchiato Spider Mite

Riepilogo

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Valutazione Remote Sensing of Two-macchiato Danni ragnetto su Greenhouse Cotton

Sviluppo di

Secondo i saggi foglia distaccati per semplificare gli studi sull'espressione genica nelle patate durante l'infestazione da mawing Insect Manduca sexta

Studio sul metabolismo di sei insetticidi sistemici in una nuova coltura di sospensione cellulare derivata dal tè (Camellia Sinensis L.) plurale di "leaf"

Campionamento per la stima delle specie di Frankliniella Dei corci e dei predatori delle specie di Orio negli esperimenti sul campo

Sfruttare la scansione micro-CT per analizzare le interazioni parassitarie pianta-ospite

Saggi biologici per la resistenza di monitoraggio Insetticida

Estrazione del veleno dalla vespa parassitoide Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale

Estrazione del veleno dalla vespa parassitoide Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale

Estrazione del veleno dalla vespa parassitoide Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale