This work was supported by the National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (RO1 AA014925 awarded to Dr. Patricia H. Janak at University of California, San Francisco, CA, USA), Fonds de recherche du Quebec &#8211; Sant&#233; (NC) and the Natural Sciences and Engineering Research Council (NC, 387224-2010). The open-access publication of this article was made possible by sponsorship from Med Associates Inc.

Tutte le procedure sono approvate dal Comitato di Ricerca Animal Ethics alla Concordia University e concordano con le raccomandazioni del Consiglio canadese Animal Care. 1. Gli animali <ol><li> Ottenere ratti maschio lungo-Evans (220 - 240 g all&#39;arrivo). </li><li> Mantenere i ratti in una temperatura (21 ° C) e umidità (44%), controllata di cura degli animali, su un ciclo luce-buio 12 ore con le luci accese alle ore 7:00. </li><li> Pair-house ratti all&#39;arrivo. Dopo 3 giorni, i ratti casa singolarmente in gabbie scatola da scarpe di plastica con biancheria da letto di beta-chip, un osso di nylon, e l&#39;accesso gratuito al ratto chow standard ed acqua. Utilizzare coperchi gabbia che hanno doppi occhielli per consentire la successiva disposizione di una seconda bottiglia, oltre alla borraccia. NOTA: I ratti possono essere alloggiati individualmente, non appena arrivano nella struttura di cura degli animali. </li><li> Inizia a gestire ratti ogni giorno. NOTA: Come guida, una settimana di trattamento è di solito sufficiente per loro ambientarsi ad essere picked e gestito dallo sperimentatore. </li></ol> 2. intermittente etanolo Access nella casa Cage NOTA: Comportamento intermittente accesso etanolo nella gabbia casa per garantire che i ratti saranno bere quantità fisiologicamente rilevanti di etanolo prima della fase di formazione comportamentale dell&#39;esperimento inizia 17-19. Avviare la procedura durante la fase di luce, anche se potrebbe essere iniziato in qualsiasi momento durante il ciclo di chiaro o scuro. <ol><li> Preparare due bottiglie per ogni ratto. <ol><li> Utilizzare una plastica da 100 ml cilindro graduato come la bottiglia di etanolo e una bottiglia d&#39;acqua di plastica standard di 473 ml. Utilizzare una relativamente piccola bottiglia di capacità etanolo, riempita quasi a capacità massima di volume, per ridurre al minimo la perdita di etanolo a causa di perdite ed evaporazione. </li><li> Riempire una bottiglia con il 15% di etanolo, fatta diluendo etanolo al 95% in acqua di rubinetto. NOTA: altre concentrazioni di etanolo, come ad esempio il 10% o il 20%, può essere utilizzato al posto del 15% di etanolo. </li><li> Fill la seconda bottiglia con acqua del rubinetto. </li><li> Inserire un tappo di gomma, con un tubo di aspirazione che contiene un cuscinetto a sfere per ridurre al minimo le perdite, in ogni bottiglia. </li></ol></li><li> Impostare due gabbie di controllo, trattati in modo identico alle gabbie a casa con l&#39;eccezione che le gabbie di controllo non contengono ratti o biancheria da letto. <ol><li> Preparare bottiglie di etanolo e acqua per le gabbie di controllo come specificato nei punti 2.1.1 - 2.1.4. </li><li> Utilizzare le misure ottenute dalle gabbie di controllo per controllare per spandimenti e / o evaporazione che possono verificarsi nel corso della sessione di accesso etanolo (come descritto ai punti 2.8.1 - 2.8.2). </li></ol></li><li> Pesare tutte le bottiglie di etanolo e di acqua. Registrare tutti i pesi. </li><li> Pesare tutti i topi. Registrare tutti i pesi. </li><li> Inserire la bottiglia etanolo e la bottiglia d&#39;acqua su ogni gabbia casa e controllare gabbia allo stesso tempo. Lasciare entrambe le bottiglie sulle gabbie per 24 ore. </li><li> Alla fine del periodo di 24 ore, rimuovere entrambe le bottiglie dallagabbie allo stesso tempo. </li><li> Pesare tutte le bottiglie di etanolo e di acqua. Registrare tutti i pesi. </li><li> Per determinare la quantità di etanolo e acqua è stata consumata durante il periodo di 24 ore, sottrarre il peso di ogni bottiglia quando è stato tolto dalla gabbia casa dal peso della bottiglia quando è stato posto sulla gabbia a casa 24 ore prima per ogni ratto. <ol><li> Fare lo stesso per le due gabbie di controllo, e quindi calcolare l&#39;importo medio di versamento per ciascun fluido. </li><li> Sottrarre la quantità media di etanolo e di fuoriuscita di acqua, rispettivamente dalle corrispondenti misure di etanolo e di consumo di acqua per ogni ratto. </li><li> Utilizzare queste misure di differenza fuoriuscita controllata per calcolare il consumo di etanolo in g / kg, consumo di acqua, etanolo e la preferenza. </li></ol></li><li> Per calcolare il consumo di etanolo (g / kg), prima convertire il peso (g) di soluzione di etanolo consumato in volume (ml) in base alla densità della soluzione totale (componenti etanolo + acqua), secondoal volume formula (ml) = Peso (g) / Densità (g / ml). NOTA: La densità della soluzione varierà in funzione della concentrazione di etanolo. <ol><li> Successivamente, moltiplicare il volume (ml) di soluzione di etanolo consumata dalla densità (g / ml) di etanolo in scala per la soluzione percentuale specifica utilizzata, a dare il peso (g) di etanolo consumato. </li><li> Dividere il peso (g) di etanolo consumata dal peso di ratto (kg) per ottenere la g / kg di misura del consumo di etanolo. </li></ol></li><li> Per calcolare etanolo preferenza, esprimere assunzione di etanolo (ml) in percentuale del totale di liquidi (acqua + etanolo, ml) di aspirazione. </li><li> Riportare il flacone solo acqua torna alla home gabbia del ratto. Per il prossimo 24 ore, dare la ratti accesso all&#39;acqua, ma non etanolo. Invece di una bottiglia di etanolo, posizionare una seconda bottiglia di pre-pesato acqua sulla gabbia di casa. </li><li> Alla fine del periodo di 24 ore, rimuovere entrambi bottiglie di acqua dalla gabbia allo stesso tempo. </li><li> Pesare entrambe le serie di bottiglie d&#39;acqua. Registrare tutti weicombatte. </li><li> Sottrarre il peso di ogni bottiglia quando è stato tolto dalla gabbia casa dal peso della bottiglia quando è stato posto sulla gabbia a casa 24 ore prima, sottraendo la misura media fuoriuscita ottenuto da gabbie di controllo come descritto ai punti 2.8.1 - 2.8.2. </li><li> Utilizzare queste misure differenza fuoriuscita controllata per calcolare il consumo di acqua. </li><li> Inizia il ciclo di nuovo, fornendo sia l&#39;etanolo e bottiglie d&#39;acqua ai ratti, come descritto nei punti da 2.1 a 2.14. <ol><li> Ripetere questo ciclo per più (circa 12) sedute di indurre livelli elevati e stabili di consumo di etanolo. Vedere la Figura 1 per risultati rappresentativi di consumo di etanolo (g / kg) nella gabbia casa. </li><li> Alternate la posizione spaziale della bottiglia etanolo e acqua sul coperchio della gabbia tra le sessioni per prevenire lo sviluppo di una preferenza laterale. </li><li> Fare una soluzione di etanolo fresco una volta alla settimana per garantire la concentrazione accurata e stabile etanolo attraversosessioni. Ridurre al minimo l&#39;impatto di evaporazione di etanolo per periodi prolungati di tempo che utilizzano questo approccio. </li></ol></li></ol> 3 Apparecchiatura <ol><li> Casa ciascuna camera di condizionamento all&#39;interno di un ventilato,-attenuazione del suono box. </li><li> Costruire ciascuna camera di condizionamento di un metallo in acciaio inox asta pavimento, un soffitto in policarbonato trasparente, in policarbonato trasparente parete posteriore e porta d&#39;ingresso, e fianchi in alluminio del pannello di metallo. <ol><li> Installare una porta fluido centrale, vicino alla base della parete laterale destra metallo. Dotare l&#39;ingresso al porto fluido con una fotocellula a raggi infrarossi per rilevare le entrate nella porta. </li><li> Collegare tubo di polietilene dal retro della porta fluido a una siringa da 20 ml contenente etanolo utilizzando un ago a punta smussata. Posizionare la siringa in una pompa a siringa situata al di fuori del box-attenuazione del suono. Per le sessioni di allenamento discriminazione di Pavlov, caricare etanolo nella siringa prima di metterlo nella pompa. Prime il tubo by avanzare manualmente la pompa, e poi asciugare l&#39;eccesso di etanolo dal porto fluido. </li><li> Sul fianco sinistro, installare un houselight bianca centrale, vicino al soffitto della camera. </li><li> Installare un clicker (2 ciclo Hz) e un generatore di rumore bianco con un altoparlante nell&#39;angolo superiore sinistro del fianco sinistro. </li></ol></li><li> Dotare ogni camera di condizionamento, con una specifica configurazione di visive, olfattive, tattili e stimoli per creare un contesto caratteristico. <ol><li> Utilizzare due contesti diversi, designato Contesto 1 e Context 2 Configurare la metà delle camere condizionata Contesto 1 e l&#39;altra metà come Context 2. </li><li> Per creare Contesto 1, posizionare pannelli neri di cartone sopra il soffitto e pareti anteriore e posteriore della camera, odore spruzzo di limone (10% v / v, fatta diluendo olio di limone in acqua di rubinetto) in una capsula di Petri e posizionarlo al centro di un vassoio di rifiuti metallici sotto il pavimento della camera e inserire un chiaro pannello di pavimento in policarbonato sopra il metallo rod pavimento. Foderare il contenitore scorie con tovagliolo di carta assorbente o da banco liner. </li><li> Per creare Contesto 2, lasciare il soffitto e pareti anteriore e posteriore della camera di scoperta, in modo che siano chiare, spruzzo odore di mandorle (10% v / v, fatta diluendo benzaldeide in acqua di rubinetto) in una capsula di Petri e posizionarlo centralmente in un contenitore scorie di metallo sotto il pavimento della camera e inserire un pannello perforato pavimento di metallo sul pavimento asta di metallo. Foderare il contenitore scorie con tovagliolo di carta assorbente o da banco liner. </li></ol></li></ol> 4. assuefazione Abituare i ratti alla sala formazione comportamentale e ciascuno dei due contesti all&#39;interno condizionamento camere. Per questa fase dell&#39;esperimento, non caricare l&#39;etanolo nelle siringhe da 20 ml. <ol><li> Abituare i ratti al processo di essere trasportati dalla struttura di cura degli animali alla sala formazione comportamentale in laboratorio in due sessioni assuefazione brevi. <ol><li> Nella prima sessione, caricare i ratti in loro gabbie di casa su un carrello a ruote nello stabilimento di cura degli animali, e li trasportano al pronto formazione comportamentale in laboratorio. Illuminare le luci della stanza, accendere i ventilatori in ogni suono attenuazione cubicolo, uscite dalla stanza, chiudere la porta e lasciare che i ratti adattarsi a questo nuovo ambiente per 20 minuti, pur rimanendo nelle loro gabbie a casa sul carrello. Al termine di questo periodo di 20 minuti, restituire i ratti alla funzione di cura degli animali. </li><li> Nella seconda sessione, portare i topi alla sala formazione comportamentale in laboratorio. Come prima, lasciare le luci e ventilatori cubicolo nella stanza. Rimanere nella stanza, con la porta chiusa per ridurre al minimo le distrazioni, e la maniglia e pesare ogni ratto nella sala formazione comportamentale. Registrare i pesi, e quindi restituire i ratti alla struttura di cura degli animali. </li></ol></li><li> Abituare i ratti alle camere di condizionamento in due sessioni assuefazione brevi. <ol><li> Trasportare i ratti alla sala formazione comportamentale, registrare il peso di ciascun ratto,e caricare ogni ratto nella sua camera di condizionamento designato. </li><li> Nella prima sessione di assuefazione impostare la metà delle camere come Context 1 e il resto come Context 2. </li><li> Nella seconda sessione di assuefazione configurare ogni camera con il contesto che non è stato utilizzato nella sessione precedente. </li><li> Condurre sessioni di assuefazione in modo controbilanciato, in modo tale che la metà dei ratti vengono prima esposto a Context 1, seguito da Context 2, e l&#39;altra metà vengono prima esposti a Context 2, seguito da Context 1 Idealmente, condurre entrambe le sessioni di assuefazione nel stesso giorno, anche se potevano essere distribuite in due giorni, se necessario. </li><li> Per le sessioni di assuefazione, utilizzare un programma per computer per illuminare il houselight 1 min dopo che il programma è stato rilasciato. Annotare il numero totale di voci di porta fluido effettuate durante una sessione di 20 min. Al termine della sessione, programmare la houselight per spegnere. Non presenta alcun etanolo o segnali durante le sessioni di assuefazione. </li></ol></li&gt; <li> Rimuovere i ratti dalle camere, li tornare alle loro gabbie a casa, e trasportarli di nuovo alla funzione di cura degli animali. </li><li> Pulire le attrezzature (ad esempio, pannelli a pavimento, vassoi rifiuti, piastre di Petri). Vedere il punto 5.7 per ulteriori dettagli. </li></ol> 5. pavloviano Discriminazione Training (PDT) Treno ratti per comportamentale discriminano tra un cue uditivo che è accoppiato con etanolo e un secondo spunto uditivo che non è. Per questa fase dell&#39;esperimento, riempire le siringhe da 20 ml con 15% di etanolo. <ol><li> Dotare ogni camera di condizionamento, con una specifica configurazione di visiva, olfattiva, e stimoli tattili per creare un contesto caratteristico, come descritto ai punti 3.3.2 e 3.3.3 <ol><li> Assegnare la metà dei ratti a Contesto 1 e l&#39;altra metà a Contesto 2 in modo controbilanciato, in base al consumo di etanolo e di preferenza in media attraverso le ultime 2 sessioni della procedura di accesso etanolo gabbia a casa. Fare riferimento alla context usato durante la PDT come Contesto A. NOTA: Ogni ratto deve solo provare un contesto in questa fase di formazione. </li><li> Assicurarsi che lo stimolo olfattivo è l&#39;ultimo stimolo contestuale da aggiungere ad ogni camera di condizionamento. Chiudere le porte della camera e la cabina-attenuazione del suono per contenere lo stimolo olfattivo e ridurre al minimo la comingling di odori diversi. </li></ol></li><li> Portare i topi nella stanza formazione comportamentale, registrare il peso di ciascun ratto, e caricare ogni ratto nella sua camera di condizionamento designato. </li><li> Avviare il programma per computer che controlla la seguente sequenza di eventi durante ogni sessione di PDT. <ol><li> A 5 minuti dopo che il programma è stato rilasciato, illuminare il houselight. </li><li> Presentare lo stimolo rumore bianco e il clicker stimolo 16 volte ciascuno. Designa uno di questi stimoli uditivi essere il CS + e l&#39;altro per essere il CS, in modo controbilanciato attraverso entrambi i contesti. </li><li> Rendere ogni CS + e CS-prova last 10 sec. </li><li> Consegnare 0,2 ml di etanolo nella porta del fluido durante l&#39;ultimo 6 sec del CS +. Non fornire alcun etanolo durante il CS. </li><li> Rendere ogni sessione PDT ultimi 58 minuti in media. Presentare il CS + e CS-ciascuno su una variabile tempo 67 sec programma. </li><li> Record voci fluido porto durante la 10 sec intervallo CS (10 sec durante la presentazione CS), il 10 sec intervallo pre-CS (10 sec immediatamente prima dell&#39;inizio CS), e il 10 sec intervallo post-CS (10 sec immediatamente seguente Offset CS) sia per CS + e CS-presentazioni, così come totale di voci di porta fluido per l&#39;intera sessione. Registrare anche la durata di ogni voce porta fatta durante questi intervalli. </li><li> Al termine della sessione, ruotare la houselight off. </li></ol></li><li> Rimuovere i ratti dalle camere, li tornare alle loro gabbie a casa, e trasportarli di nuovo alla funzione di cura degli animali. </li><li> Controllare le porte del fluido per garantire che i ratti hanno consumato i 3,2 ml di etanolo consegnati in ogni PDT sESSIONE. </li><li> Lavare l&#39;etanolo fuori dal tubo di polietilene con una siringa da 60 ml contenente una piccola quantità di acqua. Quindi, passare 60 ml di aria attraverso il tubo utilizzando una seconda, siringa vuota, per assicurarsi che sia asciutto. </li><li> Pulire l&#39;apparecchiatura. Per la pulizia quotidiana, lavare i pannelli di pavimento, vassoi rifiuti, e piastre di Petri. Una volta alla settimana, pulire l&#39;intera camera di condizionamento. Non utilizzare prodotti di pulizia profumati per evitare l&#39;introduzione di odori indesiderati nella apparato sperimentale. </li><li> Continuare sedute di PDT tutti i giorni fino ratti mostrano discriminazione stabili nelle loro risposte ingresso porta al CS + vs CS. NOTA: le voci della porta fatte in risposta al CS + dovrebbero aumentare nel corso sessioni, mentre voci di porta fatte in risposta al CS dovrebbero rimanere bassi. Il numero esatto di sedute di PDT necessario per conseguire discriminati condizionata risposta può variare, ma, come una guida, intenzione di circa 20 sessioni. </li></ol> 6. Estinzione <ol><li> Outfit ogni condizionamento chamber con visiva, olfattiva, e stimoli tattili per creare un contesto che è distinto da quello dei ratti hanno sperimentato durante le sedute di PDT. Ad esempio, se Contesto 1 è stato utilizzato in PDT, configurare la camera come Contesto 2 per le sessioni di estinzione. Fare riferimento al contesto utilizzato durante l&#39;estinzione come Context B. </li><li> Condurre sessioni di estinzione identico a sedute di PDT, ma non fornire alcuna etanolo durante il CS +. <ol><li> Utilizzare lo stesso programma informatico che è stato utilizzato durante PDT per presentare il CS + e CS. </li><li> Per mantenere la coerenza tra le fasi dell&#39;esperimento, caricare una siringa vuota nella pompa a siringa, e lasciare la pompa accesa. Assicurarsi che il tubo di polietilene non contiene etanolo prima sessione di estinzione. </li></ol></li><li> Continuare sessioni di estinzione tutti i giorni fino ratti non è più spettacolo discriminazione risponde tra il CS + e CS. NOTA: le voci della porta fatte in risposta al CS + dovrebbe diminuire gradualmente tra le sessioni di estinzione, fino a quando non vi è alcuna difference tra voci di porta fatte in risposta al CS + e le voci di porta fatte in risposta al CS. Il numero esatto di sessioni di estinzione necessarie per estinguere condizionata rispondere può variare, ma come una guida, ha intenzione di circa 8 sessioni. </li><li> Pulire l&#39;apparecchiatura al termine di ogni sessione, come descritto nel passaggio 5.7. </li></ol> 7 Context-indotta Rinnovo di prova <ol><li> Dotare ogni camera di condizionamento con i, olfattiva, e stimoli tattili visive per creare il contesto che è stato sperimentato durante le sedute di PDT. Ad esempio, se un determinato topo esperto Contesto 1 a sedute di PDT, configurare sua camera come Contesto 1 nella sessione di test. Fare riferimento al contesto utilizzato durante la prova di rinnovamento come Context A. </li><li> Effettuare il test di rinnovamento indotta contesto identico a sedute di PDT, ma non fornire alcuna etanolo durante la prova di rinnovo. Presentare il CS + e CS-come prima durante le sedute di PDT, ma trattenere l&#39;etanolo. <ol><li> Utilizzare lo stesso pr del computerOgram che è stato utilizzato durante PDT per presentare il CS + e CS. </li><li> Per mantenere la coerenza tra le fasi, caricare una siringa vuota nella pompa a siringa, e lasciare la pompa accesa. Assicurarsi che il tubo di polietilene non contiene etanolo prima della sessione di test. </li></ol></li><li> Osservare il rinnovo indotta contesto pavloviano condizionata comportamenti alcol-ricerca. NOTA: Questo effetto rinnovamento sarà evidente da un aumento selettivo del numero di voci portuali effettuate in risposta al CS +, con nessun cambiamento nel comportamento ingresso porto made in risposta al CS, rispetto al CS + e CS-rispondendo osservato il fine della formazione estinzione. </li><li> Pulire l&#39;attrezzatura al termine della sessione, come descritto al punto 5.7. </li></ol>

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Tutte le procedure sperimentali sono state approvate dal comitato di ricerca Animal Ethics Concordia University e sono conformi alle linee guida del Canadian Council on Animal Care. La pubblicazione open-access di questo articolo è stata resa possibile dalla sponsorizzazione da Med Associates Inc.

I risultati di questa procedura rivelano che stimoli ambientali discreti che normalmente accompagnano la consegna alcol può acquisire la capacità di guidare il comportamento-alcol in cerca. Essi dimostrano inoltre che gli stimoli contestuali associati alla disponibilità o l&#39;assenza di alcol prima può guidare condizionata risposte comportamentali a stimoli alcol-predittiva discreti. Passaggi critici all&#39;interno del protocollo I contesti nella presente compito incorporano stimoli esterni al ratto. Tuttavia, lo stato interoceptive del ratto a test può anche costituire un &#39;contesto&#39; che potrebbero influenzare il rinnovamento 20. E &#39;quindi importante abituare i ratti a tutte le procedure che possono verificarsi prima della prova di rinnovamento e modificare il loro stato interoceptive, come microinfusions intracraniche o iniezioni sistemiche. Inoltre, assuefazione a microinfusions o iniezioni sistemiche dovrebbe essere condotta prima sia estinzione e PDT sessions, per evitare che tali procedure di diventare associata ad una specifica fase dell&#39;esperimento. Parametri temporali, come la durata CS, intervallo CS-USA, e l&#39;intervallo tra le prove (ITI), sono da tempo noti per influenzare condizionata rispondere in una varietà di paradigmi di condizionamento 21-26. Analogamente, i parametri temporali possono influenzare l&#39;osservazione dell&#39;effetto rinnovamento nella nostra procedura. Ogni set di parametri diversi da quelli specificati nel protocollo deve essere convalidato sperimentalmente in studi pilota prima di procedere ad impiegarli nelle indagini più grandi. Modifiche e risoluzione dei problemi Precedenti ricerche hanno trovato che la quantità di etanolo che i ratti consumano nella gabbia casa può variare in funzione del fornitore da cui i ratti vengono acquistati 17,27. Fornitore è quindi una considerazione importante per questa fase dello studio. Analogamente, la scelta del ceppo ratto dovrebbe essere considered con attenzione, in quanto vi sono numerose segnalazioni di differenze di ceppi di consumo di etanolo 28-31. Prima opera in un paradigma di condizionamento avversivo ha dimostrato che l&#39;età evolutiva dei ratti influenza l&#39;osservazione di rinnovamento di un pavloviano condizionata risposta di paura 32. La mancanza di un effetto di rinnovamento in ratti molto giovani (di età inferiore ai 20 giorni dopo la nascita) è stato suggerito di essere dovuto alla codifica compromissione di informazioni contestuali 33. L&#39;età evolutiva di ratti da utilizzare nel presente procedimento deve quindi essere preso in considerazione. Rinnovo pavloviano condizionata comportamento alcol-ricerca è stato osservato quando il 10% 9,16, 15% 14, o 20% 15 soluzioni di etanolo sono stati utilizzati durante la gabbia di casa accesso etanolo e PDT fasi dell&#39;esperimento. I ricercatori potrebbero usare una qualsiasi di queste concentrazioni di etanolo, ai fini della costituzione di tale procedura nel loro laboratories. Durante l&#39;acquisizione di una formazione discriminazione pavloviano è importante controllare le porte del fluido dopo ogni sessione per garantire che tutti i etanolo che è stato consegnato è stato consumato. Lasciando topi nelle camere di condizionamento per un ulteriore 10 - 15 minuti dopo ogni sessione può essere fatto all&#39;inizio del PDT per incoraggiare il consumo di qualsiasi etanolo che non è stato consumato durante la sessione. Il numero di ratti che lasciano etanolo non consumato nei porti dovrebbe diminuire, come progredisce PDT. Se entro la fine di ratti PDT sono (a) non consumare tutto il etanolo e / o (b) non risponde al CS + allora queste discipline deve essere eliminato dallo studio. La maggior parte dei ratti affidabile rispondere più al + CS rispetto al CS. Tuttavia, alcuni ratti possono rispondere ad alti livelli per entrambe le indicazioni, quindi non mostra evidenza di discriminazione. I ratti che mostrano elevata rispondono sia al CS + e CS-durante PDT non vengono eliminati dallo studio. Nella nostra esperienza, questi soggetti mostrano discriminazione notevoledurante la prima sessione di estinzione in assenza di etanolo, suggerendo che i loro livelli elevati di rispondere alla CS durante PDT sono guidati dalla presenza di etanolo nella valvola liquido. Questi soggetti tendono a mostrare gli effetti di rinnovo robusti. Limiti della procedura Poiché il test rinnovo viene condotta in assenza di etanolo, voci di porta condizionati indotte dal CS + diminuiscono gradualmente tutta la sessione di test. Pertanto, l&#39;importo complessivo del comportamento generato prova, contro la quale i cambiamenti sperimentalmente indotte possono essere valutate, è piuttosto bassa. Perché in questo compito risposta tende ad essere superiore al via contro la fine della sessione di test, è importante esaminare gli effetti delle manipolazioni sperimentali sulla condizionato rispondono a titolo di prova-by-processo. Le voci nella presa del fluido forniscono la misura di dipendente principale in questo compito. Tuttavia, una voce porta errata potrebbe essere registrata se un animale è abbastanza vicino alla presa del fluido di rompere il raggio infrarosso attraverso l&#39;apertura della porta fluido con i baffi. Anche se poco frequenti, le risposte errate sono evidenti come un drammatico aumento in porto totale voci relative al comportamento del soggetto in sessioni precedenti. Videoregistrando gli animali faciliterebbe l&#39;individuazione di possibili risposte errate, e consentire un&#39;analisi più raffinata dei comportamenti esibiti dai ratti per tutta la formazione e la sperimentazione. Importanza della tecnica rispetto ai metodi esistenti / alternative Rinnovamento Contesto-indotta del comportamento farmaco-seeking è ampiamente studiata utilizzando un compito di condizionamento strumentale in cui la variabile dipendente primaria è una risposta operante, come ad esempio una pressa a leva 8,34 o il naso colpire 12. Nel presente procedimento, la risposta in cerca di droga è &#39;approccio condizionato&#39; alla porta del fluido che si manifesta da presentazioni diil + CS. Questa risposta è probabilmente acquisita attraverso l&#39;apprendimento pavloviano, che è il processo di apprendimento che media la formazione di associazioni tra stimoli ambientali e gli effetti farmacologici delle sostanze d&#39;abuso negli esseri umani. Le applicazioni future Questo compito può essere utilizzato in combinazione con neurofarmacologia, neurochimica optogenetics e per studiare i meccanismi neurali che sono coinvolti nel rinnovamento indotta contesto dei comportamenti alcol-cerca pavloviano condizionata 16. Inoltre, i meccanismi comportamentali e neurali che regolano l&#39;acquisizione e l&#39;estinzione di pavloviano condizionata comportamenti alcol-ricerca possono essere studiate. Infine, questo compito può essere utilizzato per esplorare manipolazioni di estinzione che potrebbero impedire il rinnovamento, una direzione importante per la ricerca traslazionale volta a ridurre l&#39;impatto del farmaco associato contesti ambientali sulla reattività di droga segnali predittivi dopo la terapia di esposizione spunto in addi umanocts.

Rimanendo sobrio è una notevole sfida per gli individui che soffrono di disturbi da abuso di alcool. L&#39;astinenza è un momento di vulnerabilità per l&#39;impatto comportamentale, psicologico e fisiologico degli stimoli ambientali che abitualmente accompagnano l&#39;uso di alcol, che possono, attraverso il condizionamento pavloviano, diventano associati ebbrezza 1,2. L&#39;esposizione a stimoli predittivi alcol può suscitare risposte condizionate come alcol desiderio, che possono promuovere comportamenti alcol-cerca che facilitano la ricaduta 3,4. Le sequenze stereotipate di comportamento che portano al consumo di alcol può causare alcuni tipi di stimoli per essere regolarmente sperimentato immediatamente prima che gli effetti farmacologici di assunzione di alcol. Ad esempio, la vista, l&#39;olfatto e il gusto di alcol sono proprietà sensoriali di alcol che precedono affidabile intossicazione. Oltre a tali segnali, che sono indicati come &#39;discreti&#39; o &#39;Proximaspunti l &#39;, contesti ambientali in cui i farmaci vengono regolarmente utilizzati possono anche provocare desiderio 5,6. L&#39;esposizione a luoghi fisici in cui i farmaci sono stati precedentemente utilizzati possono dunque essere un trigger critico per recidiva 7. I modelli animali sono stati sviluppati per studiare i meccanismi neurali che mediano l&#39;impatto della droga contesti associati al comportamento di droga ricerca di 8-13. La procedura qui descritta permette l&#39;indagine di come contesti associati al consumo di alcol possono modulare il comportamento-alcol alla ricerca che si manifesta da un discreto, alcool predittivo cue pavloviano. Formazione discriminazione pavloviano è condotto in un contesto ambientale specifico, in cui i ratti sono addestrati a behaviorally distinguere tra due stimoli uditivi condizionata, un + CS che è associato con l&#39;alcol, e un CS che non è. Sessioni di estinzione vengono poi condotti in un contesto diverso, in cui rispondendo alla CS+ Diminuisce a causa di alcol trattenuta. Successivamente, riesposizione al alcol associato, nell&#39;ambito della formazione pavloviano innesca un aumento selettivo dei comportamenti alcol-cerca suscitato dal CS +, con nessun cambiamento nel rispondere alla CS. Questo risultato, che abbiamo sempre replicato 9,14-16, si estende risultati di procedure strumentali di condizionamento in cui sono stati trovati per stimolare il rinnovamento delle risposte operanti connessi con la somministrazione di farmaci 10,13 contesti di droga.

<table><tbody><tr><td>Heavy-duty utility cart</td><td>Rubbermaid</td><td>#4520-88</td><td>Used to transport rats in their home cage from the colony room to the behavior room or other facilities</td></tr><tr><td>Rats, Long-Evans</td><td>Harlan</td><td></td><td>Rats weighed 220-240 g on arrival</td></tr><tr><td>Ohaus scale</td><td>Fisher</td><td>#S402421</td><td>For weighing rats; tare the bottom of a plastic container first, then put the rat in it to weigh it</td></tr><tr><td>Beta-chips, aspen</td><td>Harlan</td><td>#7090A</td><td>Bedding for home cage</td></tr><tr><td>Nylabone</td><td>Bio-Serv</td><td>#K3580</td><td>Enrichment provided in the home cage</td></tr><tr><td>Autoclavable rodent chow</td><td>Agribrands, Charles River</td><td>#5075</td><td>For feeding rats</td></tr><tr><td>Wire bar cage lid</td><td>Ancare</td><td>#R20SS2B</td><td>Custom made with two slots for&amp;nbsp; bottles</td></tr><tr><td>Cage bottom</td><td>Ancare</td><td>#R20PC</td><td>To house rats</td></tr><tr><td>Stoppers</td><td>Ancare</td><td>#8.5</td><td>Rubber stoppers to occlude opening in water bottles &amp;amp; graduated cylinders; goes with ball point sipper tubes&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Ball point tubes, 1.5&quot; length</td><td>Ancare</td><td>#TD-99</td><td>Inserted in stoppers, enables rats to drink from water bottles and graduated cylinders</td></tr><tr><td>Water bottles</td><td>Ancare</td><td>#FSPC8HT</td><td>473 ml (16 oz) capacity, needs to be occluded with stopper</td></tr><tr><td>Graduated cylinders, 100 ml</td><td>Fisher</td><td>#0300741</td><td>To contain ethanol during alcohol exposure in the home cage; spouted end needs to be cut off to enable occlusion with stoppers</td></tr><tr><td>Mettler scale</td><td>Mettler Toledo</td><td>#MS6001S</td><td>For weighing water bottles and ethanol cylinders</td></tr><tr><td>Polyethylene tubing, 1/32&quot; inner diameter,&amp;nbsp; 1/32&quot; wall thickness, 3/32&quot; outside diameter</td><td>Fisher</td><td>#14-169-1A</td><td>To connect 20 ml ethanol syringe to fluid port</td></tr><tr><td>Needle, 18 g, 1.5&quot; length</td><td>Fisher</td><td>#B305199</td><td>To connect polyethylene tubing to ethanol syringes; needs to be filed</td></tr><tr><td>Syringes, 20 ml, Luer-Lok non-sterile</td><td>Fisher</td><td>#1482316J</td><td>To contain ethanol on the fluid pumps; needs to be connected to the polyethylene tubing by a 18 G 1 1/2 needle</td></tr><tr><td>Syringes, 60 ml, Luer-Lok non-sterile</td><td>Fisher</td><td>#14-820-11</td><td>To flush polyethylene tubing after PDT sessions</td></tr><tr><td>Single speed syringe pump, 3.33 rpm</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-018MD</td><td>To hold 20 ml ethanol syringes and deliver ethanol</td></tr><tr><td>Fluid port</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-254-CB</td><td>To enable ethanol delivery during PDT sessions; connected to ethanol syringes with polyethylene tubing</td></tr><tr><td>Port entry infrared detector</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-215M</td><td>Fixed on both sides of&amp;nbsp; fluid port; need 2 per fluid port</td></tr><tr><td>Houselight, 28 V, 100 mA</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-135M</td><td>Provides general lighting in conditioning chamber</td></tr><tr><td>Clicker module</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-225SM</td><td>Auditory stimulus for conditioning chamber</td></tr><tr><td>White noise generator with speaker</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#PHM-100</td><td>Auditory stimulus for conditioning chamber</td></tr><tr><td>Bar floor</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A-GF</td><td>To go with modular test chamber</td></tr><tr><td>Bench coat, absorbent</td><td>VWR</td><td>#89126-790</td><td>Absorbent paper to put in metal tray, needs to be cut to fit the metal tray</td></tr><tr><td>Polycarbonate sheet, 1/8&quot; thick, 12-5/8&quot; x 10&quot;</td><td>Johnston Plastics</td><td>#30102515</td><td>To make smooth transparent floor insert used for context 1. Needs to be cut in 11.5&quot; x 12.25&quot; pieces</td></tr><tr><td>Aluminium sheet perforated, 0.063&quot; thick, 48&quot; x 96&quot;, 0.250&quot; holes x 0.375&quot; centers</td><td>Anica Steel</td><td></td><td>To make perforated floor insert used for context 2. Needs to be cut in 11.5&quot; x 12.25&quot; pieces</td></tr><tr><td>Black cardboard, 0.053&quot; thick, 28&quot; x 44&quot;</td><td>Omer DeSerres</td><td>#P1909</td><td>To construct panels covering the ceiling, door and back wall of the conditioning chamber in context 1. Needs to be cut to size. Each chamber needs three panels measuring approximately 11.5&quot; x 13.25&quot;. The panels can be joined by the narrower side using duct tape.</td></tr><tr><td>All-purpose strength duct tape, 1.88&quot; x 45 yd.</td><td>Duck Tape</td><td></td><td>Adhesive material to connect the black cardboard panels used to cover the back wall, ceiling and door in context 1.</td></tr><tr><td>Modular test chamber</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A</td><td>Conditioning chamber</td></tr><tr><td>Sound attenuating cubicles</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-200R3AM</td><td>Comes with installed 28 V DC fan (#ENV-025F)</td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>Fisher</td><td>#08748B</td><td>Bottom only, to contain the sprayed solution that provides the odor stimulus; needs to be centered in the metal tray in conditioning chambers</td></tr><tr><td>PCI interface package</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-700P2-R2</td><td>Connects tabletop interface cabinet to computer; includes 1 interface card, 1 Decode card, 1 ribbon cable and 1 28 V DC power cable</td></tr><tr><td>Large tabletop cabinet and power supply</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SG-6510D</td><td>Used to contain the 12 cards included in the SmartCrtrl 8 Input, 16 Output package</td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 Input, 16 Output package</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-716P2</td><td>Used to connect and control the devices in the conditioning chamber. The package includes all the cables, the interface module and the connection panel.</td></tr><tr><td>Med PC IV software</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SOF-735</td><td>Software to run programs. Needs to be installed on the computer.</td></tr><tr><td>Monitor LG, 19&quot; LCD</td><td>Concordia computer store</td><td>#W1942TQ-BF</td><td>Computer monitor; to go with computer running Med PC IV</td></tr><tr><td>HP Z200 tower workstation</td><td>Concordia computer store</td><td>#BZ788US#ABA</td><td>Computer on which Med PC IV is run</td></tr><tr><td>Benzaldehyde, &amp;ge;99%</td><td>Les produits chimiques OMEGA Chemical Company Inc.</td><td>#B37-50</td><td>Dilute in tap water for almond context odor</td></tr><tr><td>Lemon oil, cold pressed, California</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#W262528-1KG-K</td><td>Dilute in tap water for lemon context odor</td></tr><tr><td>Ethyl alcohol, 95%</td><td>Commercial Alcohols</td><td></td><td>Dilute in tap water to desired concentration</td></tr></tbody></table>

a procedure to observe context-induced renewal of pavlovian-conditioned alcohol-seeking behavior in rats

Contesti ambientali in cui l&#39;abuso di droghe vengono consumate può innescare desiderio, una soggettiva risposta pavloviano condizionata che può facilitare il comportamento di droga ricerca e tempestiva ricaduta in tossicodipendenti astinenti. Abbiamo sviluppato una procedura per studiare i processi comportamentali e neurali che mediano l&#39;impatto del contesto sul comportamento alcol-seeking nei ratti. Dopo acclimatazione al gusto e gli effetti farmacologici del 15% di etanolo nella gabbia casa, ratti maschi a lungo Evans ricevano una formazione discriminazione pavloviano (PDT) in camere di condizionamento. In ciascuna sessione giornaliera (lun-ven) PDT, 16 studi ciascuno dei due stimoli diversi 10 sec uditivo condizionata verificano. Durante uno stimolo, il CS +, 0,2 ml di 15% etanolo viene consegnato in una porta di fluido per il consumo orale. Il secondo stimolo, il CS, non è accoppiato con etanolo. Attraverso sessioni, le voci nella porta del fluido durante l&#39;aumento CS +, mentre le voci durante il CS stabilizzare a un livello inferiore, indicando che una predictive associazione tra il CS + e l&#39;etanolo è acquisito. Durante PDT ciascuna camera è dotata di una configurazione specifica di stimoli contestuali visivi, olfattivi e tattili. A seguito di PDT, formazione estinzione è condotto nella stessa camera che è ora dotato di una diversa configurazione di stimoli contestuali. Il CS + e CS sono presentati come prima, ma l&#39;etanolo sia ritirato, che causa un graduale declino in voci di porta durante il CS +. Alla prova, i ratti vengono inseriti di nuovo nel contesto PDT e presentati con il CS + e CS-come prima, ma senza etanolo. Questa manipolazione innesca un aumento robusto e selettivo il numero di voci di porta fatte durante l&#39;alcool predittivo CS +, con nessun cambiamento nel rispondere durante il CS. Questo effetto, denominato rinnovamento indotta contesto, illustra la potente capacità di contesti legati al consumo di alcol per stimolare comportamenti alcol-cerca in risposta a stimoli di alcol di Pavlov.

Accesso etanolo intermittente nella gabbia di casa: Il consumo di etanolo (g / kg) e l&#39;etanolo aumento preferenza attraverso sessioni di accesso etanolo intermittente nella gabbia di casa, in genere di raggiungere livelli stabili entro 8-12 sessioni (Figura 1). Nel set di dati mostrata nella figura 1, il consumo stabile di etanolo media attraverso le ultime due sessioni di gabbia di casa accesso etanolo variava 1,33-6,44 g / kg per i singoli ratti. La gabbia casa fase il consumo di etanolo dell&#39;esperimento può essere interrotto una volta che il g / kg il consumo è stabilizzato, e ratti sono mantenuta a questo livello stabile di bere per un certo numero di sedute. Per analizzare i dati di questa fase, condurre analisi separata misure ripetute della varianza (ANOVA) attraverso il fattore entro i soggetti della sessione per il consumo di etanolo (g / kg) e l&#39;etanolo preferenza. Schematica della procedura di rinnovo indotta contesto: Ogni fase delprocedura sperimentale (PDT, l&#39;estinzione, prova rinnovo) è illustrato nella figura 2. Vedere la didascalia per ulteriori dettagli. Risposta misure e analisi dei dati: In tutte le fasi comportamentali descritte di seguito, le risposte di ingresso della porta fatte durante il CS + e CS sono normalizzati con riferimento alle pre-CS basali risposte di ingresso della porta. Per creare le misure normalizzate CS, sottrarre il numero di voci portuali effettuate durante l&#39;intervallo di riferimento pre-CS (10 secondi immediatamente prima dell&#39;inizio CS) dal numero di voci portuali effettuati durante le presentazioni del CS + e CS. Le misure CS normalizzati normalizzato CS + e servono come indicatori di comportamento suscitato particolare da presentazioni CS, elevati sopra dei livelli basali. Condurre misure ripetute ANOVA separati con i fattori oggetto entro ripetute di sessione e tipo CS (CS + vs CS) per le fasi di estinzione e PDT. Per i confronti tra fase (PDT, estinzione, rinnovareal test), i dati di utilizzo media attraverso le ultime due sedute di PDT e l&#39;estinzione e la una sessione di dati di test di rinnovo in ripetute misure ANOVA. Per dare seguito a significativi effetti principali e le interazioni, t-test uso post hoc per campioni indipendenti o appaiati che sono corretti per confronti multipli. Criterio di significatività è fissato a α = 0.05. PDT: risposte ingresso porta per l&#39;aumento CS + attraverso sedute di PDT, considerando che le risposte di ingresso porta al CS rimane bassa e stabile, nel complesso. Si noti che le risposte di ingresso porta al CS può aumentare leggermente nei primi sessioni di allenamento PDT; Tuttavia, voci di porta fatte in risposta alla CS stabilizzare a un livello molto più basso rispetto a quelli realizzati in risposta al CS +. Discriminazione di successo è evidenziato da un innalzamento statisticamente significativo in voci di porta durante il CS + rispetto al CS (Figura 3). Questo risultato indica che pavloviano condizionata comportamenti alcol-ricerca ha essereen istituito per il CS +, ma non il CS. Estinzione: risposte ingresso porta per il CS + graduale declino tra le sessioni di estinzione. Risposte ingresso di porta al CS rimangono bassi e stabili tra le sessioni di estinzione. Idealmente, discriminati risposta è abolito entro la fine della formazione di estinzione, come dimostra l&#39;assenza di una differenza statisticamente significativa tra i valori delle porte al CS + e CS. Tuttavia, non è raro che un certo grado di discriminazione rispondere a rimanere, anche alla fine della formazione estinzione. In questo caso, è importante verificare che le risposte di ingresso porta al CS + alla fine della formazione estinzione sono statisticamente inferiore risposte ingresso porta al CS + all&#39;inizio di estinzione, nonché al termine della PDT (figura 3) . Questo modello di risultati indica che pavloviano condizionata comportamento alcol-ricerca è stata notevolmente estinta. Context-indotta prova rinnovo: Portrisposte ingresso all&#39;aumento CS + nel test rinnovo indotta contesto, relativa alle voci portuali CS + osservati alla fine della formazione estinzione. Tale incremento è selettivo per il CS +, come voci di porta al CS rimangono inalterate. Inoltre, voci di porta al CS + sono statisticamente elevati rispetto a voci di porta al CS nel test rinnovo indotta contesto (Figura 4). Conferma statistica dei confronti tra voci di porta CS + tra l&#39;estinzione e la prova, così come i confronti di CS + e CS voci di porta all&#39;interno di test, indica un rinnovamento selettivo di comportamento-alcol in cerca pavloviano condizionata indotta dal contesto di alcol associato a test. <img alt="Figura 1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig1highres.jpg" width="400" /> Figura 1 Escalation del consumo di etanolo e di preferenza indotta da etanolo accesso intermittente nella gabbia casa. Media &amp;# 177; SEM (A) consumo di etanolo (g / kg) e (B) la preferenza etanolo attraverso 12 sessioni di accesso etanolo intermittente nella gabbia casa. Entrambe le misure aumentano tipicamente tra le sessioni e poi si stabilizzano. Consumo di etanolo Stabile media attraverso le ultime due sessioni di gabbia di casa accesso etanolo variava 1,33-6,44 g / kg per i singoli ratti. Questi dati sono stati ottenuti utilizzando ratti maschi lungo Evans potabile 15% (v / v) di etanolo. <img alt="Figura 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" width="400" /> . Figura 2 Uno schema della procedura sperimentale La procedura si compone di tre fasi: formazione discriminazione pavloviano (PDT), l&#39;estinzione, e test di rinnovamento indotta contesto. Durante ogni sessione di PDT, ratti ricevono 16 studi di uno stimolo uditivo condizionato (CS +) che segnala la consegna di etanolo e 16 studi diun secondo stimolo uditivo (CS), che non è associato con la consegna di etanolo. Sedute di PDT avvengono in Context A, composto da una configurazione specifica di visivo, olfattivo e stimoli tattili. Durante le sessioni di estinzione, che si svolgono nel contesto B, composto da un diverso insieme di stimoli visivi, olfattivi, tattili e, il CS + e CS vengono presentati, ma l&#39;etanolo sia ritirato. Per la prova di rinnovamento indotta contesto, i ratti vengono restituiti Contesto A, e il CS + e CS sono presentati senza etanolo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig3highres.jpg" width="400" /> Figura 3 Acquisizione ed estinzione di discriminate Pavlov condizionata, di rispondere per l&#39;etanolo. Media ± SEM voci di porta normalizzato made durante il CS + e CS-attraverso PDT (sessioni 1-18) in contesto A e di estinzione (sessioni 19-26) in contesto B. Questi dati sono stati ottenuti utilizzando ratti maschi a lungo Evans, addestrato con il 10% (v / v) etanolo come stimolo incondizionato (US) che è stato presentato in collaborazione con il + CS durante la PDT. * P &lt;0,05, CS + rispetto al CS. Figura originariamente pubblicato in Chaudhri, Sahuque, e Janak (2008). Usato con il permesso di Elsevier. <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig4highres.jpg" width="500" /> Figura 4 Context-indotta rinnovo del ± SEM voci di Pavlov condizionata, di rispondere per l&#39;etanolo. Media normalizzata portuali effettuate durante il CS + e CS-in sedute di PDT in contesto A, sessioni di estinzione in contesto B, e test di rinnovamento nel contesto A. I dati sono media degli ultimi due sessioni per PDT e di estinzione; il test di rinnovamento è una singola sessione. Questei dati sono stati ottenuti utilizzando ratti maschi a lungo Evans, addestrati con il 10% (v / v) di etanolo come stimolo incondizionato (US) che è stato presentato in collaborazione con il CS + durante la PDT. * P &lt;0,05; ** P &lt;0,001, CS + rispetto al CS. #p &lt;0.05, CS + PDT rispetto CS + estinzione. ^ P &lt;0.05, CS + estinzione contro CS + prova. Figura originariamente pubblicato in Chaudhri, Sahuque, e Janak (2008). Usato con il permesso di Elsevier.

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A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Una procedura per studiare la capacità di un contesto ambientale di alcol associato per attivare il rinnovamento dei comportamenti alcol-seeking nei ratti è descritto.

Una Procedura di osservare Context-indotta Rinnovo pavloviano condizionata alcol-seeking comportamento in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

a-procedure-to-observe-context-induced-renewal-pavlovian-conditioned

Research

JoVE Journal

Behavior

12.7K Views.  Concordia University.  Una procedura per studiare la capacità di un contesto ambientale di alcol associato per attivare il rinnovamento dei comportamenti alcol-seeking nei ratti è descritto. 

Video: A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods require saccharin/sucrose fading, water deprivation and/or extended training to initiate operant responding in rats. This paper describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol that is convenient for experimenters and does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading, thus eliminating the potential confound of using sweeteners in ethanol operant self-administration studies. With this method, Wistar rats typically acquire and maintain self-administration of a 20% ethanol solution in less than two weeks of training. Furthermore, blood ethanol concentrations and rewards are positively correlated for a 30 min self-administration session. Moreover, naltrexone, an FDA-approved medication for alcohol dependence that has been shown to suppress ethanol self-administration in rodents, dose-dependently decreases alcohol intake and motivation to consume alcohol for rats self-administering 20% ethanol, thus validating the use of this new method to study the reinforcing properties of alcohol in rats.

This protocol describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol in rats that, contrary to standard methods, does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading to initiate responding.

Un metodo per valutare le proprietà di rinforzo di etanolo in ratti senza acqua privazione, Saccarina dissolvenza o di formazione accesso esteso

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

Ricerca

Comportamento

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

Pavloviano Training Approach condizionati in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

Un metodo generale per la valutazione di incubazione della brama di saccarosio in ratti

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Neuroscienze

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to acquire a conditioned place preference in a drug-paired compartment, and after the post-conditioning test, they perform several sessions to extinguish the established preference. The CPP permits the evaluation of the conditioned rewarding effects of drugs related to environmental cues. Then, the extinguished CPP can be robustly reinstated by the non-contingent administration of a priming dose of the drug, and by exposure to stressful stimuli. Both methods will be explained here. When the animal reinitiates the behavioral response, a reinstatement of the conditioned reward is considered to have taken place.
The main advantages of this protocol are that it is non-invasive, inexpensive, and simple with good validity criteria. In addition, it allows the study of different environmental manipulations, such as stress or diet, which can modulate relapse into drug seeking behaviors. However, one limitation is that if the researcher aims to explore the motivation and primary reinforcing effects of the drug, it should be complemented with self-administration procedures, as they involve operant responses of animals.

This protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse. This procedure permits the measurement of relapse in laboratory animals, considering the impact of drug-associated environmental cues as craving and relapse in abstaining addicts is currently the focus of drug-abuse treatment programs.

Reintegrazione di droga in Cerca nei topi utilizzando il paradigma di Conditioned Place Preference

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Un protocollo di Conditioned Place Preference per l'incubazione di Craving nei ratti di misura

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

A Procedure to Study Stress-Induced Relapse of Heroin Seeking after Punishment-Imposed Abstinence

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with drug-taking. This model has been implemented in experiments using different types of substances of abuse such as methamphetamine, cocaine, and alcohol. However, punishment-induced abstinence in heroin-trained animals has not been demonstrated. Furthermore, acute stress is a key trigger for relapse in humans and animal models. It was previously demonstrated that acute food deprivation robustly induced reinstatement of extinguished cocaine and heroin seeking. The procedure described here can be used to assess the effects of acute stress exposure on heroin seeking after punishment-imposed abstinence. A total of 8 rats were implanted with chronic intravenous (i.v.) catheters and trained to self-administer heroin (0.1 mg/kg/infusion) for 18 days under a seek-take chained schedule. Completing the seek link gave access to the take lever, which was paired with a heroin infusion. The seek lever was programmed with a variable interval 60 schedule of reinforcement (VI60), and the take lever was programmed with a fixed-ratio 1 reinforcement schedule (FR1). Following self-administration training, a mild foot shock was delivered on 30% of the completed seek links instead of the extension of the take lever. Footshock intensity was increased by 0.1 mA per daily session from 0.2 mA to 1.0 mA. Heroin-seeking tests were performed after 24 h of food deprivation (FD) or sated conditions. Rats under acute food deprivation condition robustly increased heroin seeking after punishment-imposed abstinence.

A procedure that demonstrates a robust acute food deprivation-induced relapse to heroin seeking after punishment-imposed abstinence is described. A punishment-imposed abstinence model was successfully implemented using the seek and take chain schedule for heroin self-administration. Heroin-seeking tests are then performed following 24 h of food-deprivation stress.

Una procedura per studiare la ricaduta indotta dallo stress della ricerca di eroina dopo l'astinenza imposta dalla punizione

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain undergoes rapid organizational change and is similar to accelerated brain changes that occur during the third trimester in humans. This model of fetal alcohol spectrum disorders (FASDs) produces severe brain damage, mimicking the amount and pattern of binge-drinking that occurs in some pregnant alcoholic mothers. We describe the use of trace eyeblink classical conditioning (ECC), a higher-order variant of associative learning, to assess long-term hippocampal dysfunction that is typically seen in alcohol-exposed adult offspring. At 90 days of age, rodents were surgically prepared with recording and stimulating electrodes, which measured electromyographic (EMG) blink activity from the left eyelid muscle and delivered mild shock posterior to the left eye, respectively. After a 5 day recovery period, they underwent 6 sessions of trace ECC to determine associative learning differences between alcohol-exposed and control rats. Trace ECC is one of many possible ECC procedures that can be easily modified using the same equipment and software, so that different neural systems can be assessed. ECC procedures in general, can be used as diagnostic tools for detecting neural pathology in different brain systems and different conditions that insult the brain.

Trace eyeblink classical conditioning (ECC) was used to assess hippocampal-dependent associative learning in adult rats that were administered a high concentration (11.9% v/v) of alcohol during early neonatal brain development. In general, ECC procedures are sound diagnostic tools for detecting brain dysfunction across many psychological and biomedical settings.

L'uso di traccia Eyeblink condizionamento classico per valutare la disfunzione Hippocampal in un modello del ratto dei disturbi dello spettro fetale alcol

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue reactivity, the sensitivity to cues previously linked with the drug-taking experience, plays a prominent role in human craving during abstinence. Cue reactivity can be assessed as the attentional orientation toward drug-associated cues that is measurable as appetitive approach behavior in both preclinical and human studies. Herein describes an assessment of cue reactivity in rats trained to self-administer cocaine. Cocaine self-administration is paired with the presentation of discrete cues that act as conditioned reinforcers (i.e., house light, stimulus light, infusion pump sounds). Following a period of abstinence, lever presses in the cocaine self-administration context accompanied by the discrete cues previously paired with cocaine infusion are measured as cue reactivity. This model is useful to explore neurobiological mechanisms underlying cue reactivity processes as well as to assess pharmacotherapies to suppress cue reactivity and therefore, modify relapse vulnerability. Advantages of the model include its translational relevance, and its face and predictive validities.&#160;The primary limitation of the model is that the cue reactivity task can only be performed infrequently and must only be used in short duration (e.g., 1 hour), otherwise rats will begin to extinguish the pairing of the discrete cues with the cocaine stimulus. The model is extendable to any positively reinforcing stimulus paired with discrete cues; though particularly applicable to drugs of abuse, this model may hold future applications in fields such as obesity, where palatable food rewards can act as positively reinforcing stimuli.

Cue reactivity is conceptualized as sensitivity to cues linked with drug-taking experiences that contribute to craving and relapse in abstinent humans. Cue reactivity is modeled in rats by measuring attentional orientation toward drug-associated cues that results in appetitive approach behavior in a cue reactivity test following self-administration and forced abstinence.

Un protocollo per la misurazione Cue reattività in un modello del ratto di disturbo da uso di cocaina

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

A Prediction Error-driven Retrieval Procedure for Destabilizing and Rewriting Maladaptive Reward Memories in Hazardous Drinkers

Maladaptive reward memories (MRMs) can become unstable following retrieval under certain conditions, allowing their modification by subsequent new learning. However, robust (well-rehearsed) and chronologically old MRMs, such as those underlying substance use disorders, do not destabilize easily when retrieved. A key determinate of memory destabilization during retrieval is prediction error (PE). We describe a retrieval procedure for alcohol MRMs in hazardous drinkers that specifically aims to maximize the generation of PE and therefore the likelihood of MRM destabilization. The procedure requires explicitly generating the expectancy of alcohol consumption and then violating this expectancy (withholding alcohol) following the presentation of a brief set of prototypical alcohol cue images (retrieval + PE). Control procedures involve presenting the same cue images, but allow alcohol to be consumed, generating minimal PE (retrieval-no PE) or generate PE without retrieval of alcohol MRMs, by presenting orange juice cues (no retrieval + PE). Subsequently, we describe a multisensory disgust-based counterconditioning procedure to probe MRM destabilization by re-writing alcohol cue-reward associations prior to reconsolidation. This procedure pairs alcohol cues with images invoking pathogen disgust and an extremely bitter-tasting solution (denatonium benzoate), generating gustatory disgust. Following retrieval + PE, but not no retrieval + PE or retrieval-no PE, counterconditioning produces evidence of MRM rewriting as indexed by lasting reductions in alcohol cue valuation, attentional capture, and alcohol craving.

This manuscript describes a memory retrieval procedure for destabilizing robust reward memories and rewriting them with counterconditioning prior to their reconsolidation.

Una procedura di recupero guidato di errore Pronostico per destabilizzare e riscrittura disadattivi ricompensa ricordi nei bevitori pericolosi

Maladaptive reward memories (MRMs) can become unstable following retrieval under certain conditions, allowing their modification by subsequent new ...

Intermittent-Access Two-Bottle Choice Drinking with Lick Detection in Rats

Modeling Alcohol Consumption in Rodents Using Two-Bottle Choice Home Cage Drinking and Microstructural Analysis

Two-bottle choice home cage drinking is one of the most widely used paradigms to study ethanol consumption in rodents. In its simplest form, animals are provided with access to two drinking bottles, one of which contains regular tap water and the other ethanol, with daily intake measured by change in bottle weight over the 24 h period. Consequently, this approach requires no specialized laboratory equipment. While such ease of implementation is likely the greatest contributor to its widespread adoption by preclinical alcohol researchers, the resolution of drinking data acquired using this approach is limited by the number of times the researcher measures bottle weight (e.g., once daily). However, the desire to examine drinking patterns in the context of overall intake, pharmacological interventions, and neuronal manipulations has prompted the development of home cage lick detection systems that can acquire data at the level of individual licks. Although a number of these systems have been developed recently, the open-source system, LIQ HD (Lick Instance Quantifier Home cage Device), has garnered significant attention in the field for its affordability and user friendliness. Although exciting, this system was designed for use in mice. Here, we review appropriate procedures for standard and lickometer-equipped two-bottle choice home cage drinking. We also introduce methods for adapting the LIQ HD system to rats including hardware modifications to accommodate larger cage size and a redesigned 3D printed bottle holder compatible with standard off-the-shelf drinking bottles. Using this approach, researchers can examine daily drinking patterns in addition to levels of intake in many rats in parallel thereby increasing the resolution of acquired data with minimal investment in additional resources. These methods provide researchers with the flexibility to use either standard bottles or a lickometer-equipped apparatus to interrogate the neurobiological mechanisms underlying alcohol drinking depending on their precise experimental needs.

This protocol describes a standard intermittent-access two-bottle choice home cage drinking paradigm to model alcohol consumption in rats. In addition, it provides step-by-step instructions to augment the standard protocol with a DIY lick detection system that enables microstructural analysis of drinking behavior.

Two-bottle choice home cage drinking is one of the most widely used paradigms to study ethanol consumption in rodents. In its simplest form, animals are ...