Gli autori desiderano ringraziare e riconoscere il Medical Research Council per il finanziamento di questa ricerca - MRC-FAP codice concessione G1000788-98812.

Fabrication 1.Scaffold e sterilizzazione <ol><li> Sciogliere PCL in 1,1,1,3,3,3-esafluoroisopropanolo per dare un 10% w / v concentrazione. Come descritto in Bosworth et al, 9 electrospin soluzione polimerica (parametri: 20 kV, 1 ml / hr, 20 cm). Raccogli fibre allineate sul bordo di un mandrino rotante (600 rpm). Con un bisturi rimuovere il nastro di fibra raccolte e poi tagliate in lunghezze più corte - 3 cm (per le depressioni e le navi rotanti) e 4 cm (per colture cellulari inserti) lunghezze. </li><li> Utilizzando una pinza sottile immergersi strisce individuali in acqua distillata e rimuovere. </li><li> Tenendo entrambe le estremità tra il pollice e l&#39;indice; ruotare manualmente il nastro fino a quando non assomiglia thread. </li><li> Brevemente immergere questo scaffold filiforme in acqua distillata e immissione sul pulito, carta non fibrose asciugare. </li><li> Una volta asciutto, posto singolarmente in tubi microcentrifuga pulito e aggiungere 1 ml di 50% v / v di etanolo in acqua distillata. Chiudere i coperchi e lasciare per 24 ore. Nota: Effettuare le seguenti operazioni sotto flusso laminare: </li><li> Inserire provette da microcentrifuga in una cappa a flusso laminare e aspirare il 50% v / v soluzione. Sostituire con 1 ml 70% v / v di etanolo in acqua distillata, chiudere i coperchi e lasciare per 24 ore. </li><li> Ripetere per 90% e il 100% v / v di etanolo in acqua distillata (1 ml volumi). </li><li> Lavare ponteggi due volte con tampone fosfato soluzione salina (PBS), 24 hr per lavaggio (2 x 1 ml). </li><li> Rimuovere PBS e sostituirlo con 1 ml di coltura cellulare multimediale. Nota: Ponteggi sono pronti per l&#39;uso post-24 ore. </li></ol> 2. Determinazione Area Scaffold superficie e numero di celle <ol><li> Utilizzando un microscopio e di imaging software luce, misurare il diametro del filo elettrofilate lungo la sua lunghezza per determinare un valore medio. </li><li> Si supponga che il filo ad una barra cilindrica e approssimare la superficie utilizzando: </li><li> Dove A = Superficie, r = raggio e h = lunghezza Nota: La superficie è stata calcolata essere 18.902, 800 micron 2. Inoltre, va notato che l&#39;area superficiale effettiva sarà maggiore di questo calcolo, il filo è costituito da centinaia di fibre fini, che aumentano la superficie. Di conseguenza un maggior numero di celle deve essere in grado di applicare al ponteggio. Tuttavia, questo non pregiudica un confronto diretto tra i gruppi di prova in corso. </li><li> Determinare il numero massimo di celle che possono attaccare alla superficie esposta scaffold da: Nota: Utilizzando un microscopio e di imaging software luce, il diametro di cellule staminali mesenchimali umane è stato determinato in 20 micron (cellule presumendo sono rotondi), quindi in questo caso, il numero di cellule = 60.200. </li></ol> 3. Scaffold Set-up - Colture Cellulari inserti (Figura 1A) <ol><li> Sotto flusso laminare, aprire i 6 e gli inserti di coltura cellulare sterili e separare gli anelli più brevi con i denti dai corpi più ampio inanellati. </li><li> Prendete l&#39;anello con i denti verso l&#39;alto. Telo unodei quattro centimetri scaffold sul centro del ring assicurandosi che sovrappone su entrambi i lati. Prendere il corpo e la posizione inanellati sopra l&#39;anello dentato e scaffold e spingere verso il basso assicurandosi che il ponteggio rimane in posizione e passa attraverso il centro dell&#39;inserto di coltura cellulare. </li><li> Collocare l&#39;inserto coltura cellulare con scaffold nel pozzo di una ben 6, basso piatto vincolante. </li><li> Aggiungere 10 ml di coltura al patibolo. </li></ol> 4. Scaffold Set-up - Trough (Figura 1B) <ol><li> Sotto flusso laminare, posto poli (tetrafluoroetilene) (PTFE) abbeveratoi in singole piastre di Petri e aggiungere 10 ml di terreni di coltura per la depressione. </li><li> Utilizzando pinze coprono una delle tre centimetri scaffold nel trogolo, assicurandosi che la sua lunghezza è parallelo al bordo più lungo del trogolo. </li></ol> 5. Scaffold Set-up - bioreattore Vessel (Figura 1C) <ol><li> Sotto flusso laminare, a meno di 10 ml di PBS sterile attraverso il bioreattore nave delporto principale e lasciare per 10 min. </li><li> Rimuovere la PBS e sostituirlo con 8 ml di coltura. </li><li> Utilizzando pinze, inserire uno dei ponteggi tre centimetri nel vaso attraverso la porta principale. </li><li> Chiudete la porta principale. </li></ol> 6. Conteggio delle cellule <ol><li> Le cellule staminali mesenchimali umane Cultura (hMSC) derivate dal midollo osseo in base al protocollo fabbricante, fino al passaggio 4 prima della raccolta. </li><li> Aspirare il supporto da 75 cm 2 pallone contenente hMSCs derivate dal midollo osseo (passaggio 4, 80% confluenza). </li><li> Lavare le cellule con 10 ml di PBS sterile e aspirare. </li><li> Aggiungere 3 ml di tripsina e incubare il matraccio a 37 ° C, 5% CO 2 finché le cellule hanno staccato dalla superficie matraccio. </li><li> Aggiungere 7 ml terreni di coltura per inattivare l&#39;enzima e trasferire questo volume totale (10 ml) in una provetta per centrifuga. </li><li> Risospendere la sospensione cellulare pipettando su e giù parecchie volte per disperdere in modo omogeneo le cellule all&#39;interno dellamedia e agglomerati di cellule limite (10 ml pipetta). </li><li> Rimuovere 20 ml di sospensione cellulare e trasferimento in un emocitometro. </li><li> Posizionare il emocitometro sotto un microscopio ottico e immagine a scopo x10. </li><li> Concentrarsi le griglie e contare il numero di cellule nei 4 x 4 quadrati in ogni angolo della rete e che rientra nell&#39;ambito di piazza e quelli che attraversano la mano destra o la linea di confine di fondo. Contare per ogni set di 4 x 4 quadrati (4 conteggi per griglia). </li><li> Ripetere il numero di risospensione e la cella per tre volte (passi 6,6-6,9). </li><li> Calcolare il numero medio di cellule e determinare il volume dei mezzi necessari per la risospensione delle cellule (concentrazione cellulare 60.200 in 200 ml). Ad esempio, determinare il numero di celle media dal emocitometro e quindi determinare il numero medio complessivo di cellule dai tre conteggi separati. Moltiplicare questo 1 x 10 4 invia il numero di cellule per ml e poi moltiplicare per il volume totale della sospensione cellulare per darenumero Tal di cellule. Utilizzare la seguente equazione per determinare il volume dei mezzi necessari per la risospensione: </li><li> Centrifugare la sospensione cellulare a 241 xg per 5 min. </li></ol> Seeding 7. cellulare <ol><li> Aspirare il supporto dal tubo centrifugato lasciando il pellet e sostituire con il volume del supporto calcolato. </li><li> Risospendere le cellule e dei media per una miscela omogenea. </li><li> Usando una pipetta P200 Gilson, lentamente erogare 200 ml di sospensione cellulare su ogni scaffold eseguendo la punta della pipetta lungo la lunghezza scaffold e sotto la superficie del supporto liquido. Lasciare riposare per 20 minuti. </li><li> Per le navi bioreattori, erogare 200 ml di sospensione cellulare attraverso la porta principale. Top-up il rimanente mezzo di coltura 2 ml tramite le porte siringa per dare un volume totale di 10 ml. </li></ol> 8. Avvio sperimentale <ol><li> Trasferire i vasi bioreattore al bioreattore RCC-4DQ e impostare la rotazione a 9 giri. </li><li> TranSFER le piastre e con inserti di coltura cellulare e bassi alla piastra shaker e impostare la rotazione a 30 giri al minuto. </li><li> Trasferire le piastre e con inserti di coltura cellulare e bassi per il ripiano di un incubatore di cellule a 37 ° C, 5% CO 2 (cultura statica). </li></ol> 9. DNA Assay <ol><li> Preparare le soluzioni tampone - lisi, tampone 1x TE, standard di DNA e di soluzioni di lavoro del DNA delle cellule - come da istruzioni del produttore. </li><li> Dopo 4 ore, togliere i campioni dal termostato e mettere sotto flusso laminare. </li><li> Rimuovere le frazioni multimediali da tutti i campioni e metterli in provette etichettati separatamente. Centrifugare le provette 241 xg. Rimuovere il surnatante e aggiungere tampone di lisi 3 ml. Risospendere la soluzione a rottura, il pellet di cellule. </li><li> Utilizzando pinze rimuovere i ponteggi e posto in provette contenenti 3 ml di tampone di lisi (per i ponteggi all&#39;interno dei vasi bioreattori, rimuovere l&#39;impalcatura prima aspirazione del media). Per ponteggi condotte nell&#39;ambito inserti di coltura cellulare, prima liberare l&#39;impalcatura tagliando il ponteggio vicino al bordo dell&#39;inserto con un bisturi. </li><li> Aggiungere 3 ml di tampone di lisi per ogni recipiente scaffold e raschiare la superficie (agitare energicamente per i vasi bioreattori). Rimuovere il tampone di lisi e mettere in provette etichettati separatamente. </li><li> Vortex ogni provetta da centrifuga per circa 1 min per garantire sufficiente agitazione delle cellule e bufferizzare e incoraggiare lisi della membrana cellulare. </li><li> In un nero 96 pozzetti, aggiungere 100 ml di tampone di lisi per ogni frazione del campione - impalcatura, media e ben (duplicare). </li><li> Nel buio, aggiungere 100 ml di soluzione di DNA delle cellule di tutti i pozzetti contenenti tampone di lisi e mescolare delicatamente. </li><li> Include pozzetti con tampone di lisi contenente nessun DNA e DNA cellulare soluzione per fornire un controllo negativo e positivo per la piastra bene. </li><li> Utilizzando una fluorescenza piatto-reader, l&#39;estinzione del pozzos utilizzando 485 nm di eccitazione e 520 nm di emissione. </li><li> Confrontare i dati con la curva standard generata dagli standard del DNA come da istruzioni del produttore. </li></ol> 10. Microscopio elettronico a scansione (SEM) Fixation <ol><li> Effettuare le seguenti operazioni in condizioni di flusso laminare: Dopo 4 ore, rimuovere tutti i ponteggi dai loro recipienti e posto all&#39;interno di un nuovo 6-pozzetti (pozzetti separati). </li><li> Lavare i ponteggi due volte con PBS. </li><li> Effettuare le seguenti operazioni sul banco aperto: per ogni bene, aggiungere 2 ml di 1,5% v / v glutaraldeide in PBS per garantire una copertura completa del patibolo. </li><li> Lasciare la piastra per almeno 30 minuti a 4 ° C per il fissaggio delle cellule. </li><li> Rimuovere la soluzione fissativo e lavare i ponteggi due volte con PBS. </li><li> Disidratare i ponteggi con concentrazioni crescenti di etanolo in acqua distillata partendo da 50% v / v, seguito dal 70% v / v e 90% v / v. Per ogni concentrazione, immergere completamente i ponteggi in solution (2 ml) e lasciare per 3 min. Scartare la soluzione e ripetere. </li><li> Disidratare in 100% etanolo submersing pienamente scaffold in soluzione (2 ml) e lasciando per 5 min. Scartare la soluzione e ripetere. </li><li> Chimicamente asciugare i ponteggi con esametildisilazano (HMDS) all&#39;interno di una cappa. Immergere i ponteggi in HMDS (2 ml) e lasciare per 5 min. Rimuovere le HMDS e ripetere. </li><li> Rimuovere le HMDS e permettere ai ponteggi asciugare. Montare i ponteggi su disponibili in commercio stub SEM (in questo caso mozziconi in acciaio inox con alette in carbonio adesive). </li><li> Per facilitare la visualizzazione all&#39;interno del SEM, cappotto i campioni utilizzando una verniciatura gold-polverizzazione per 2 minuti per assicurare una copertura sottile e uniforme. </li><li> I campioni all&#39;interno del SEM e visualizzare i ponteggi cellulari testa di serie con un fascio di elettroni 5 keV. </li></ol>

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The authors declare that they have no competing financial interests.

Matrici fibra elettrofilate fabbricati da biopolimeri vengono regolarmente utilizzati per sostenere l&#39;adesione delle cellule e la proliferazione di biomateriali e / o ingegneria dei tessuti applicazioni 11,12. In questi casi, le matrici sono spesso sottili fogli di fibre che coprono facilmente l&#39;intera base di una piastra di coltura cellulare bene e quindi sono in completo contatto con cellule seminate che migliora l&#39;adesione cellulare. Tuttavia, se il ponteggio biomateriale non copre completamente la base della piastra ben, c&#39;è un&#39;alta probabilità che una gran parte delle cellule seminate non rimanere in contatto con l&#39;impalcatura e alla fine non sarà in grado di collegare. Questo studio ha esaminato diversi metodi per la semina cellule su scaffold che non coprono la base del piatto bene, al fine di determinare una tecnica ottimizzata che potrebbe essere raccomandato per gli esperimenti a base di cellule futuri. Cinque diversi set-up sono stati studiati (Figura 1): ScaffoLDS (filati elettrofilate) ha tenuto con inserti di coltura di cellule all&#39;interno di pozzetti vincolante bassi e sia mantenuto in condizioni statiche o agitato al 30 rpm; ponteggi collocati all&#39;interno depressioni PTFE strette e detenuti statica o scosso al 30 rpm; e ponteggi alloggiati all&#39;interno dei vasi bioreattori che ruotano a 9 giri. Determinazione del numero di cellule che avevano aderito ai filati elettrofilate tramite test del DNA ha dimostrato una bassa percentuale di attacco per tutti semina set-up (Figura 2); e questo è stata ulteriormente confermata dalla scansione microscopio elettronico (SEM) (Figura 3). Adesione cellulare Greatest - 30% o ~ 18.060 cellule -è stato osservato per filati che si sono svolte all&#39;interno di inserti di coltura cellulare e sottoposti a movimento continuo. È interessante notare che l&#39;adesione cellulare più basso (15%) è stato raggiunto per i filati detenuti da inserti di colture cellulari, ma tenuti in condizioni statiche, che suggerirebbero che l&#39;inclusione del movimento radiale ha un effetto positivo sul mantenimento delle cellule a contatto con il patibolo. Tuttavia,va notato che circuitazione del flusso continuo dei media potrebbe essere responsabile per gli agglomerati cellulari osservati dalle immagini SEM. La piastra shaker è stato fissato sulla sua minima - 30 giri - che potrebbe essere una limitazione di questo set-up. Con un movimento radiale più bassa può aiutare a prevenire o ridurre l&#39;agglomerazione delle cellule e può anche migliorare l&#39;adesione delle cellule, come le cellule sperimenteranno meno forza. Esperimenti futuri dovrebbero concentrarsi sull&#39;ottimizzazione della velocità shaker ideale per il fissaggio delle cellule migliorata. Incorporando proposta di filati ricoperte all&#39;interno delle mangiatoie non ha comportato un andamento simile, con entrambi gli scenari cedendo il 18% di attacco (~ 10.836 cellule); se questo può essere dovuto al galleggiamento parziale dei ponteggi all&#39;interno delle depressioni (osservata per mangiatoie immessi sul piatto agitatore) in quanto non sono stati ancorati alla base. Parziale galleggiamento del ponteggio impedirà qualsiasi cellule che hanno toccato il fondo della vasca di venire a contatto con il materiale e aderente. Per tla sua particolare configurazione, la vasca è alloggiato all&#39;interno di una capsula di Petri e un volume totale di 10 ml di supporti aggiunto. Le ridotte dimensioni del trogolo significa che la maggioranza dei media è presente all&#39;interno della capsula di Petri e se c&#39;è alcun movimento, cellule può allontanarsi dal trogolo nella capsula di Petri e rimanere completamente fuori dalla portata del ponteggio. Per superare queste limitazioni, ulteriori esperimenti dovrebbero includere un ulteriore passo nel protocollo, per cui le estremità dei ponteggi sono riposte alla base delle depressioni mediante fine-aghi sterili, come questo dovrebbe impedire il loro galleggiamento e movimento (in particolare per ponteggi esposti a movimento radiale), che alla fine dovrebbe portare ad un aumento del numero di cellule inerenti al patibolo. 16% delle cellule era attaccato ai fili presenti all&#39;interno dei vasi rotanti. Pur essendo una tecnica ben consolidata per la cultura in 3D, i problemi si presentano con la rimozione dei ponteggi dal porto principale di vasi &#39;, che possa aver provocato attac vagamentecellule HED sta perdendo. Le navi che possono essere completamente aperte eliminerebbe questo problema; questi sono disponibili per l&#39;acquisto, ma sono molto più costosi di quelli delle navi e getta utilizzati in questo studio. Questo studio dimostra i problemi attuali con la semina ponteggi che non coprono l&#39;intera base di piatti e standard di coltura cellulare. Semina un numero di cellule noto portato in meno di un terzo fissaggio al ponteggio, nonostante superficie del ponteggio consentendo tutte le cellule di aderire. Ciò potrebbe avere conseguenze negative in altri saggi cellulari che possono valutare il comportamento biocompatibilità e cellula-materiale / cellula-cellula e le interazioni con il patibolo come futuro dispositivo medico potenziale. Ulteriori limitazioni dello studio possono includere il 4 hr time-point - nonostante sia abbastanza lungo per garantire semina cellula iniziale (cellule hanno dimostrato di fissare saldamente ai substrati in trenta minuti 13,14,15), può essere ragionevole investigate successivi punti temporali fornire cellule non proliferano durante un periodo di tempo più lungo in quanto ciò altrimenti inclinare il numero di cellule di partenza. Ridurre il volume del supporto, in questo caso 10 ml, potrebbe anche migliorare il contatto tra le cellule e scaffold ed infine aumentare l&#39;adesione cellulare. Studi futuri dovrebbero anche considerare la vitalità delle cellule, come il processo di semina cellulare può causare danni alle cellule e / o morte cellulare 16. Test del DNA cellulare non distinguono tra le cellule vitali e non vitali, come un live test del genere / morto, per esempio, potrebbe evidenziare il livello di redditività. Questa indagine sensibilizza al numero effettivo di cellule che si attaccano al ponteggio nonostante seminare una quantità nota. Per gli studi che si basano sul numero iniziale di cellule, è molto importante che i ricercatori sapere esattamente quanti di quella figura fanno infatti aderire al substrato di interesse.

Ponteggi sono regolarmente sviluppati e studiati per le applicazioni di biomateriali e di ingegneria tissutale. Come tali, essi sono comunemente seminati con cellule e il loro comportamento in vitro caratterizzati tramite saggi che determinano la proliferazione cellulare e il numero di cellule, per esempio. Per gli esperimenti di questo tipo, è imperativo che il numero cellula iniziale sia noto ricercatori spesso indicare la concentrazione semina in termini di numero di cellule per ml o cm 2. Mentre questo è buona pratica, specialmente per scopi di scale-up, non tiene conto del numero effettivo di cellule che aderiscono alla superficie ponteggio (che dipende anche le proprietà adesive della superficie biomateriale 1). Ciò è particolarmente vero per ponteggi che non coprono l&#39;intera base della piastra di coltura cellulare e le cellule potrebbero cadere dal costrutto e, a causa della natura spesso statica dell&#39;esperimento, non possono mai tornare a contatto con il materiale di interiposo. Filati di fibre elettrofilate sono un buon esempio di un ponteggio che non copre la base del pozzetto (Figura 1A). In questo caso, piastre basse e vincolanti che non sono stati trattati in superficie dovrebbero essere usati per impedire alle cellule di attaccarsi alla superficie del piatto e quindi falsare i risultati di qualsiasi test basato su bene. Pozzetti sono facilmente utilizzati per la semina delle cellule su impalcature, ma non sono l&#39;unico metodo disponibile. Sistemi di coltura di cellule del Rotary, un tipo di bioreattore sviluppato dalla divisione Life Sciences della NASA alla fine del 1980, possono essere usati in modo simile alle sementi ponteggi all&#39;interno di un (3D) ambiente tridimensionale con microgravità simulata. Questo tipo di bioreattore rimane una scelta popolare con i ricercatori di tutto il mondo ed è stata incorporata in studi per la segnalazione delle cellule 2,3, cellule staminali e ingegneria dei tessuti 4,5 6,7. Ciò che rende il bioreattore rotante preferibile pozzetti è il mantenimentodi un ambiente 3D, che aiuta a prevenire le cellule differenziate da dedifferentiating, come spesso accade quando coltivate all&#39;interno di condizioni 2D tradizionali 8. Questo documento esamina diverse tecniche per la semina di cellule staminali mesenchimali umane su poli elettrofilate (ε-caprolattone) fili di fibre come fabbricato in Bosworth et al., 9 al fine di massimizzare il numero iniziale di cellule inerenti a tali impalcature entro un periodo di 4 ore. Per la cultura 2D, filati si sono svolte in modo sicuro all&#39;interno di pozzetti o poli su misura (tetrafluoroetilene) (PTFE) abbeveratoi e tenuti in condizioni statiche, o agitati a 30 giri al minuto. Per la cultura 3D, filati e le cellule si sono svolte all&#39;interno dei vasi bioreattori che ruotano a 9 giri.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>in-house supply</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1117271000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>70013016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human mesenchymal stem cells</td>
			<td>PromoCell GmbH</td>
			<td>C-12974</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSC culture media</td>
			<td>PromoCell GmbH</td>
			<td>C-28010B</td>
			<td>Warmed to 37 oC before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplement mix</td>
			<td>PromoCell GmbH</td>
			<td>C-39810</td>
			<td>Add to culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic/antimyotic mix</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5955</td>
			<td>Add to culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.05 %) EDTA (0.02 %)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>59417C</td>
			<td>Warmed to 37 oC before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks (T75)</td>
			<td>Becton Dickinson Ltd</td>
			<td>353110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low binding 6-well plates</td>
			<td>Costar Corning</td>
			<td>3471</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well CellCrowns</td>
			<td>Scaffdex</td>
			<td>C00003S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dish 50 ml deep</td>
			<td>Sterilin</td>
			<td>124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE troughs</td>
			<td>in-house production</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable RCCS vessels 10 ml</td>
			<td>Synthecon</td>
			<td>D-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 Vessel Rotary Cell Culture System bioreactor</td>
			<td>Synthecon</td>
			<td>RCCS-4DQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker plate</td>
			<td>Stuart</td>
			<td>SSM1</td>
			<td>Mini Orbital Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haemocytometer</td>
			<td>Digital Bio</td>
			<td>DHC-F01</td>
			<td>Disposable C-Chip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube</td>
			<td>Deltalab</td>
			<td>352096, 429901</td>
			<td>15 ml and 50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich</td>
			<td>Rotafix 32 A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 3 ml</td>
			<td>Shield Medicare Ltd</td>
			<td>3039820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Sterilin</td>
			<td>40305, 47310, 40125</td>
			<td>5, 10 and 25 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson pipettes</td>
			<td>SLS</td>
			<td>F144801, F144802, F123600, F123601, F123602</td>
			<td>P2 - P1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips</td>
			<td>SLS</td>
			<td>PIP7852, PIP7834, PIP7840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro test tube 1.5 ml</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30125.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PicoGreen Assay</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P7589</td>
			<td>Assay set-up in the dark</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black 96-well plate</td>
			<td>Greiner Bio One</td>
			<td>655086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent plate-reader</td>
			<td>BGM Labtech</td>
			<td>FLUOstar Optima</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25 %</td>
			<td>TAAB Laboratories</td>
			<td>G002</td>
			<td>Made to a concentration of 1.5 % v/v in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>999-97-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium stubs (SEM)</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td>G301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon tabs (SEM)</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td>G3347N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold sputter coater</td>
			<td>Edwards</td>
			<td>S150B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope (SEM)</td>
			<td>Phenom World</td>
			<td>Phenom Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimizing attachment of human mesenchymal stem cells on poly(&#949;-caprolactone) electrospun yarns

La ricerca di biomateriali e ingegneria dei tessuti include spesso indagini basate sulle cellule in vitro, che richiedono la conoscenza iniziale del numero di cellule di partenza. Mentre i ricercatori comunemente riferimento loro densità di semina questo non indica necessariamente il numero effettivo di cellule che hanno aderito al materiale in questione. Ciò vale in particolare per i materiali, o ponteggi, che non coprono la base di piatti e standard di coltura cellulare. Questo studio indaga l&#39;attacco iniziale di cellule staminali mesenchimali umane seminate in un numero conosciuto su poli elettrofilate (ε-caprolattone) filato dopo 4 ore di cultura. Filati elettrofilate sono svolte all&#39;interno di diversi diversi set-up, comprese le navi bioreattore rotante a 9 giri, inserti di coltura cellulare posizionati in piastre e vincolanti bassi e politetrafluoroetilene (PTFE) abbeveratoi posti all&#39;interno piastre di Petri. Gli ultimi due sono stati sottoposti a condizioni sia statiche o posizionato su una tavola oscillante (30 37 ° C, 5% CO 2, la posizione di cellule seminate era determinato mediante saggio DNA cellulare. Scaffolds sono stati rimossi dai loro contenitori e collocate in tampone di lisi. La frazione di supporto è stato rimosso e centrifugato simile - il supernatante scartato e pellet rotto con tampone di lisi. Tampone di lisi è stato aggiunto a ciascun recipiente, o ben, e raschiato per liberare eventuali cellule che possono essere presenti. Il test del DNA delle cellule determinato la percentuale di cellule presenti nel patibolo, i media e le frazioni pure. Attaccamento cellulare era bassa per tutti nelle configurazioni, con la più grande attacco (30%) per i filati ricoperti nell&#39;ambito inserti di coltura cellulare e sottoposti a scuotimento movimento. Questo studio solleva la consapevolezza per il numero effettivo di cellule inerenti alle impalcature a prescindere dal dichiarato densità di semina delle cellule.

I risultati evidenziano la posizione delle celle seguenti 4 ore post-semina per ciascun set-up sperimentale indagato. Figura 2A mostra la percentuale di cellule che sono attaccati alla superficie ponteggio durante questo periodo. Un fattore di conversione di 8,5 pg / cella è stata utilizzata per convertire il contenuto di DNA misurata in numero di cellule e determinare la percentuale di cellule 10 così. Per tutti semina set-up studiato, la percentuale di adesione cellulare è relativamente bassa, con grande adesione cellulare (30%) per i ponteggi condotte nell&#39;ambito inserti colture cellulari e scosso al 30 rpm (Insert Shaker). Aderenza più basso (15%) è stato per ponteggi detenuti all&#39;interno degli inserti di coltura cellulare e tenuto in condizioni statiche (Insert statiche). Un gran numero di cellule erano presenti all&#39;interno della frazione supporto (Figura 2B), in particolare per gli inserti di coltura cellulare condotte nell&#39;ambito piastre basse vincolanti (Insert statiche) e imbarcazioni rotanti essendo il 50% e il 51%rispettivamente. Ponteggi ricoperte all&#39;interno delle depressioni hanno dimostrato un numero elevato di cellule presenti all&#39;interno del supporto stesso - 48% delle cellule per Trough Shaker e il 50% per Trough statico. Microscopia elettronica a scansione ha permesso una valutazione visiva degli scaffold di cellule-teste di serie (Figura 3). Immagini rappresentative evidenziato una limitata presenza di cellule sulla superficie fibrosa, indipendentemente semina set-up. Tuttavia, un numero maggiore di cellule e agglomerati cellulari erano presenti sui ponteggi condotte nell&#39;ambito degli inserti di coltura cellulare e scosso al 30 rpm (Insert Shaker). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52135/52135fig1.jpg" /> Figura 1. sperimentali Set-up, dove elettrofilate filato si svolge all&#39;interno; (A) inserti colture cellulari e piatto basso e vincolante; (B) poli (tetrafluoroetilene) (PTFE) attraverso e Petri; e (C) nave bioreattore. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52135/52135fig1highres.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52135/52135fig2.jpg" /> Figura 2. Posizione di celle a 4 ore post-semina su PCL elettrofilate Filati utilizzando diversi Seminatrice Set-up. (A) dimostra la percentuale di cellule che si sono collegati al patibolo PCL (media ± deviazione standard); (B) evidenzia la diffusione percentuale di posizione della cella all&#39;interno delle tre frazioni - dei media, bene e scaffold (n = 4, i dati presentati come I valori medi). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52135/52135fig2highres.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" src = &quot;/ files / ftp_upload / 52135 / 52135fig3.jpg&quot; /&gt; Figura 3. Rappresentante elettronici a scansione Micrografie per PCL elettrofilate Filati con cellule staminali mesenchimali umane, 4 ore dopo la semina iniziale utilizzando diversi set-up. (Tutte le immagini a 1,000X ingrandimento, barra della scala = 130 micron.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52135/52135fig3highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare un grande versione di questa figura.</a>

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Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&amp;#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

This article describes a range of set-ups for seeding human mesenchymal stem cells onto materials, in this case electrospun yarns, that do not cover the base of standard culture well plates in order to maximize and quantify the number of cells that initially attach compared to the known seeding density.

Ottimizzare Allegato di cellule staminali mesenchimali umane su Poli (ε-caprolattone) elettrofilate Filati

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

optimizing-attachment-human-mesenchymal-stem-cells-on-poly

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

9.6K Views.  The University of Manchester. This article describes a range of set-ups for seeding human mesenchymal stem cells onto materials, in this case electrospun yarns, that do not cover the base of standard culture well plates in order to maximize and quantify the number of cells that initially attach compared to the known seeding density.

Video: Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are a FACS-sorted population of 'pericytes' (CD146+CD34-CD45-) and 'adventitial cells' (CD146-CD34+CD45-), each of which we have previously reported to have properties of mesenchymal stem cells. PSCs, like MSCs, are able to undergo osteogenic differentiation, as well as secrete pro-osteogenic cytokines1,2. In the present protocol, we demonstrate the osteogenicity of PSCs in several animal models including a muscle pouch implantation in SCID (severe combined immunodeficient) mice, a SCID mouse calvarial defect and a femoral segmental defect (FSD) in athymic rats. The thigh muscle pouch model is used to assess ectopic bone formation. Calvarial defects are centered on the parietal bone and are standardly 4 mm in diameter (critically sized)8. FSDs are bicortical and are stabilized with a polyethylene bar and K-wires4. The FSD described is also a critical size defect, which does not significantly heal on its own4. In contrast, if stem cells or growth factors are added to the defect site, significant bone regeneration can be appreciated. The overall goal of PSC xenografting is to demonstrate the osteogenic capability of this cell type in both ectopic and orthotopic bone regeneration models.

Human perivascular stem cells (PSCs) are a novel stem cell class for skeletal tissue regeneration similar to mesenchymal stem cells (MSCs). PSCs can be isolated by FACS (fluorescence activated cell sorting) from adipose tissue procured during standard liposuction procedures, then combined with an osteoinductive scaffold to achieve bone formation in vivo.

L&#39;uso di cellule staminali per la rigenerazione ossea perivascolari

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

Ricerca

Bioingegneria

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to high levels of NK cells after 4 weeks culture and can undergo further 2-log expansion with artificial antigen presenting cells. hESC- and iPSC-derived NK cells developed in this system have a mature phenotype and function. The production of large numbers of genetically modifiable NK cells is applicable for both basic mechanistic as well as anti-tumor studies. Expression of firefly luciferase in hESC-derived NK cells allows a non-invasive approach to follow NK cell engraftment, distribution, and function. We also describe a dual-imaging scheme that allows separate monitoring of two different cell populations to more distinctly characterize their interactions in vivo. This method of derivation, expansion, and dual in vivo imaging provides a reliable approach for producing NK cells and their evaluation which is necessary to improve current NK cell adoptive therapies.

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

This protocol describes the development, expansion, and in vivo imaging of NK cells derived from hESCs and iPSCs.

Sviluppo, di espansione, e<em&gt; In vivo</em&gt; Monitoraggio delle cellule NK umane da cellule staminali embrionali umane (hESC) ed e cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells similar to pericyte-derived mesoangioblasts (iPSC-derived mesoangioblast-like stem/progenitor cells: IDEMs) can be established from iPSCs generated from patients affected by different forms of muscular dystrophy. Patient-specific IDEMs can be genetically corrected with different strategies (e.g. lentiviral vectors, human artificial chromosomes) and enhanced in their myogenic differentiation potential upon overexpression of the myogenesis regulator MyoD. This myogenic potential is then assessed in vitro with specific differentiation assays and analyzed by immunofluorescence. The regenerative potential of IDEMs is further evaluated in vivo, upon intramuscular and intra-arterial transplantation in two representative mouse models displaying acute and chronic muscle regeneration. The contribution of IDEMs to the host skeletal muscle is then confirmed by different functional tests in transplanted mice. In particular, the amelioration of the motor capacity of the animals is studied with treadmill tests. Cell engraftment and differentiation are then assessed by a number of histological and immunofluorescence assays on transplanted muscles. Overall, this paper describes the assays and tools currently utilized to evaluate the differentiation capacity of IDEMs, focusing on the transplantation methods and subsequent outcome measures to analyze the efficacy of cell transplantation.

Induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived myogenic progenitors are promising candidates for cell therapy strategies to treat muscular dystrophies. This protocol describes transplantation and functional measurements required to evaluate the engraftment and differentiation of iPSC-derived mesoangioblasts (a type of muscle progenitors) in mouse models of acute and chronic muscle regeneration.

Trapianto di progenitori miogenici pluripotenti derivati da cellule staminali indotte simili a mesoangioblasti nei modelli di topo di rigenerazione muscolare

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Electrospun Fibrous Scaffolds of Poly(glycerol-dodecanedioate) for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells

For tissue engineering applications, the preparation of biodegradable and biocompatible scaffolds is the most desirable but challenging task. &#160;Among the various fabrication methods, electrospinning is the most attractive one due to its simplicity and versatility. Additionally, electrospun nanofibers mimic the size of natural extracellular matrix ensuring additional support for cell survival and growth. This study showed the viability of the fabrication of long fibers spanning a larger deposit area for a novel biodegradable and biocompatible polymer named&#160;poly(glycerol-dodecanoate) (PGD)1 by using a newly designed collector for electrospinning. PGD exhibits unique elastic properties with similar mechanical properties to nerve tissues, thus it is suitable for neural tissue engineering applications. The synthesis and fabrication set-up for making fibrous scaffolding materials was simple, highly reproducible, and inexpensive. In biocompatibility testing, cells derived from mouse embryonic stem cells could adhere to and grow on the electrospun PGD fibers. In summary, this protocol provided a versatile fabrication method for making PGD electrospun fibers to support the growth of mouse embryonic stem cell derived neural lineage cells.

Electrospun Fibrous Scaffolds of Polyglycerol-dodecanedioate for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells

Synthesis and fabrication of electrospun long fibers spanning a larger deposit area via a newly designed collector from a novel biodegradable polymer named poly(glycerol-dodecanoate) (PGD) was reported. The fibers were able to support the growth of cells derived from mouse pluripotent stem cells.

Elettrofilate Fibrosa Ponteggi di Poli (glicerolo-dodecanedioate) per l&#39;ingegneria neurale tessuti da cellule staminali embrionali di topo

For tissue engineering applications, the preparation of biodegradable and biocompatible scaffolds is the most desirable but challenging task. &#160;Among ...

Isolation of Mesenchymal Stem Cells from Human Alveolar Periosteum and Effects of Vitamin D on Osteogenic Activity of Periosteum-derived Cells

Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in a variety of tissues and can be differentiated into numerous cell types, including osteoblasts. Among the dental sources of MSCs, the periosteum is an easily accessible tissue, which has been identified to contain MSCs in the cambium layer. However, this source has not yet been widely studied.
Vitamin D3 and 1,25-(OH)2D3 have been demonstrated to stimulate in vitro differentiation of MSCs into osteoblasts. In addition, vitamin C facilitates collagen formation and bone cell growth. However, no study has yet investigated the effects of Vitamin D3 and Vitamin C on MSCs.
Here, we present a method of isolating MSCs from human alveolar periosteum and examine the hypothesis that 1,25-(OH)2D3 may exert an osteoinductive effect on these cells. We also investigate the presence of MSCs in the human alveolar periosteum and assess stem cell adhesion and proliferation. To assess the ability of vitamin C (as a control) and various concentrations of 1,25-(OH)2D3 (10&#8722;10, 10&#8722;9, 10&#8722;8, and 10&#8722;7 M) to alter key mRNA biomarkers in isolated MSCs mRNA expression of alkaline phosphatase (ALP), bone sialoprotein (BSP), core binding factor alpha-1 (CBFA1), collagen-1, and osteocalcin (OCN) are measured using real-time polymerase chain reaction (RT-PCR).

We present a protocol to investigate the mRNA expression biomarkers of periosteum-derived cells (PDCs) induced by vitamin C (vitamin C) and 1,25-dihydroxy vitamin D [1,25-(OH)2D3]. In addition, we evaluate the ability of PDCs to differentiate into osteocytes, chondrocytes, and adipocytes.

Isolamento di cellule staminali mesenchimali da periostio alveolare umano e gli effetti della vitamina D su attività osteogenica delle cellule derivate dal periostio

Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in a variety of tissues and can be differentiated into numerous cell types, including osteoblasts. Among the ...

Exploring the Potential of Mesenchymal Stem Cell Sheet on The Development of Hepatocellular Carcinoma In Vivo

An in vivo animal model that mimics human cancer could have various applications that deliver significant clinical information. The currently used techniques for the development of in vivo cancer models have considerable limitations. Therefore, in this study, we aim to implement cell sheet technology to develop an in vivo cancer model. Hepatocellular carcinoma (HCC) is successfully developed in nude rats using cell sheets created from HCC cell line cells. The cancer cell sheets are generated through intracellular adhesion and the formation of a stratified structure, controlled by the extracellular matrix. This allows for the HCC sheet transplantation into the liver and the creation of a tumor-bearing animal model within a month. In addition, the role of mesenchymal stem cells (MSC) in the development of this cancer model is investigated. In addition to the HCC cell line sheet, another two cell sheets are created: a sheet of HCC cells and bone marrow MSCs (BMMSCs) and a sheet of HCC cells and umbilical cord MSCs (UCMSCs). Sheets that have a combination of both HCC cells and MSCs are also capable of producing a tumor-bearing animal. However, the addition of MSCs reduces the size of the formed tumor, and this adverse effect on tumor development varies depending on the used MSCs' source. This indicates that a cell sheet made of certain MSC subtypes could be utilized in tumor management and control.

Exploring the Potential of Mesenchymal Stem Cell Sheet on The Development of Hepatocellular Carcinoma In Vivo

Here, we present a protocol to develop an in vivo cancer model using cell sheet technology. Such a model could be very useful for the evaluation of anticancer therapeutics.

Esplorare il potenziale delle cellule staminali mesenchimali foglio sullo sviluppo di Carcinoma epatocellulare In Vivo

An in vivo animal model that mimics human cancer could have various applications that deliver significant clinical information. The currently used ...

Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells

Nanoparticles are the focus of an increased interest in drug delivery systems for cancer therapy. Lipid-coated nanoparticles are inspired in structure and size by low-density lipoproteins (LDLs) because cancer cells have an increased need for cholesterol to proliferate, and this has been exploited as a mechanism for delivering anticancer drugs to cancer cells. Moreover, depending on drug chemistry, encapsulating the drug can be advantageous to avoid degradation of the drug during circulation in vivo. Therefore, in this&#160;study, this design is used to fabricate lipid-coated nanoparticles of the anticancer drug falcarindiol, providing a potential new delivery system of falcarindiol in order to stabilize its chemical structure against degradation and improve its uptake by tumors. Falcarindiol nanoparticles, with a phospholipid and cholesterol monolayer encapsulating the purified drug core of the particle, were designed. The lipid monolayer coating consists of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), cholesterol (Chol), and 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (DSPE PEG 2000) along with the fluorescent label DiI (molar ratios of 43:50:5:2). The nanoparticles are fabricated using the rapid injection method, which is a fast and simple technique to precipitate nanoparticles by good-solvent for anti-solvent exchange. It consists of a rapid injection of an ethanol solution containing the nanoparticle components into an aqueous phase. The size of the fluorescent nanoparticles is measured using dynamic light scattering (DLS) at 74.1 &#177; 6.7 nm. The uptake of the nanoparticles is tested in human mesenchymal stem cells (hMSCs) and imaged using fluorescence and confocal microscopy. The uptake of the nanoparticles is observed in hMSCs, suggesting the potential for such a stable drug delivery system for falcarindiol.

This article describes the encapsulation of falcarindiol in lipid-coated 74 nm nanoparticles. The cellular uptake of the nanoparticles&#160;by human stem cells into lipid droplets is monitored by fluorescent and confocal imaging. Nanoparticles are fabricated by the rapid injection method of solvent shifting, and their size is measured with the dynamic light scattering technique.

Assorbimento di nuove nanoparticelle rivestite con lipidi contenenti Falcarindiol di cellule staminali mesenchimali umane

Nanoparticles are the focus of an increased interest in drug delivery systems for cancer therapy. Lipid-coated nanoparticles are inspired in structure and ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically carried out in low throughput. Rapid and ongoing expansion of induced pluripotent stem cell (iPSC) technology presents a new standard in cardiovascular research and alternate methods are now necessary to increase throughput of electrophysiological data at a single cell level. VF2.1Cl is a recently derived voltage sensitive dye which provides a rapid single channel, high magnitude response to fluctuations in membrane potential. It possesses kinetics superior to those of other existing voltage indicators and makes available functional data equivalent to that of traditional microelectrode techniques. Here, we demonstrate simplified, non-invasive action potential characterization in externally paced human iPSC derived cardiomyocytes using a modular and highly affordable photometry system.

Here we describe optical acquisition and characterization of action potentials from induced pluripotent stem cell derived cardiomyocytes using a high-speed modular photometry system.

Misurazione del potenziale d'azione ottico a singola cellula in cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...

A Culture Method to Maintain Quiescent Human Hematopoietic Stem Cells

Human hematopoietic stem cells (HSCs), like other mammalian HSCs, maintain lifelong hematopoiesis in the bone marrow. HSCs remain quiescent in vivo, unlike more differentiated progenitors, and enter the cell cycle rapidly after chemotherapy or irradiation to treat bone marrow injury or in vitro culture. By mimicking the bone marrow microenvironment in the presence of abundant fatty acids, cholesterol, low concentration of cytokines, and hypoxia, human HSCs maintain quiescence in vitro. Here, a detailed protocol for maintaining functional HSCs in the quiescent state in vitro is described. This method will enable studies of the behavior of human HSCs under physiological conditions.

This protocol enables the maintenance of quiescent human hematopoietic stem cells in vitro by mimicking the bone marrow microenvironment using abundant fatty acids, cholesterol, lower concentrations of cytokines, and hypoxia.

Un metodo di coltura per mantenere le cellule staminali ematopoietiche umane quiescenti

Human hematopoietic stem cells (HSCs), like other mammalian HSCs, maintain lifelong hematopoiesis in the bone marrow. HSCs remain quiescent in vivo, ...

In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages

As of 2000, the success of pancreatic islet transplantation using the Edmonton protocol to treat type I diabetes mellitus still faced some obstacles. These include the limited number of cadaveric pancreas donors and the long-term use of immunosuppressants. Mesenchymal stem cells (MSCs) have been considered to be a potential candidate as an alternative source of islet-like cell generation. Our previous reports have successfully illustrated the establishment of induction protocols for differentiating human dental pulp stem cells (hDPSCs) to insulin-producing cells (IPCs). However, the induction efficiency varied greatly. In this paper, we demonstrate the comparison of hDPSCs pancreatic induction efficiency via integrative (microenvironmental and genetic manipulation) and non-integrative (microenvironmental manipulation) induction protocols for delivering hDPSC-derived IPCs (hDPSC-IPCs). The results suggest distinct induction efficiency for both the induction approaches in terms of 3-dimensional colony structure, yield, pancreatic mRNA markers, and functional property upon multi-dosage glucose challenge. These findings will support the future establishment of a clinically applicable IPCs and pancreatic lineage production platform.

In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages

This protocol presents a comparison between two different induction protocols for differentiating human dental pulp stem cells (hDPSCs) toward pancreatic lineages in vitro: the integrative protocol and the non-integrative protocol. The integrative protocol generates more insulin producing cells (IPCs).

In vitro Induzione di cellule staminali della polpa dentale umana verso lignaggi pancreatici

As of 2000, the success of pancreatic islet transplantation using the Edmonton protocol to treat type I diabetes mellitus still faced some obstacles. ...