Name: whisker-signaled eyeblink classical conditioning in head-fixed mice
Uploaded: 2016-03-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 14 s
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Questo lavoro è stato finanziato dal Dipartimento della Difesa (W81XWH-13-01-0243) e il National Institutes of Health (R37 AG008796). Ringraziamo Alan Baker nel negozio di macchina della Northwestern University per costruire l&#39;apparato cilindro di testa fissa. Ringraziamo il Dott Shoai Hattori per la sua guida in MATLAB e Solidworks. Ringraziamo il Dr. John Power per il software LabView che controllava l&#39;esperimento.

Tutte le procedure che coinvolgono i topi sono stati eseguiti in conformità con i protocolli approvati dalla Institutional Animal Care della Northwestern University e del Comitato Usa sulla base di linee guida emanate dal National Institute of Health. 1. Il cilindro (Figura 2A) <ol><li> Costruire il cilindro come descritto da Chettih et al. E Heiney et al. Da un cilindro lungo di schiuma 14-15. Tagliare una lunghezza di 10 cm di cilindro e praticare un foro attraverso il centro per adattare l&#39;assale, un metallo asta di 12,7 mm (0,5 in.) Di diametro. Montare il cilindro con il suo asse su una basetta ottico metallo come descritto da Heiney et al., O un altro supporto (ad esempio, plexiglas) 15. </li><li> Eretti due aste metalliche verticali di 12,7 mm di diametro su entrambi i lati del cilindro. </li><li> Fissare due supporti ad angolo retto sulle aste di metallo. </li><li> Fissare altre due aste (lunghi 5 cm, 12,7 mm di diametro) attraverso i supporti ad angolo retto. Bevel °e termina di queste canne e il livello delle loro estremità sopra il centro del cilindro (figura 2G). </li><li> Forare e toccare un foro attraverso le estremità rivolte delle aste per adattarsi due 4-40 viti di macchina che conterrà le ali del connettore in posizione (Figura 2G). </li></ol> 2. Assemblaggio del sistema di stimolazione Baffo (Figura 2B) <ol><li> Tagliare un segmento di 10 denti di pettine da un normale pettine. </li><li> Tagliare una fessura circa 2-3 mm di larghezza e circa 5 mm di profondità nella parte superiore del pettine per accettare un attuatore flessione rettangolare 2 strati. </li><li> Saldare un filo ad ogni superficie dell&#39;attuatore piegatura. Utilizzare la saldatura e flusso fornito dal produttore. Coprire l&#39;attuatore e saldatura con nastro isolante per proteggere il mouse e utente dalla corrente elettrica. </li><li> Infilare la striscia attuatore nella fessura tagliata a pettine in modo che la striscia attuatore piegatura siede perpendicolare al piano del pettine. Angle il pettine in modo che sia inclinato di 45 ° e più naturale segue la curva del viso del mouse. </li><li> Fissare l&#39;estremità della striscia attuatore all&#39;inizio del pettine con rapida impostazione epossidica. Nota: I fili saldati alla striscia attuatore flessione devono essere collegati a un reostato che fornisce 40 volt a dell&#39;attuatore. Precedenti esperimenti hanno dimostrato che 40 volt è efficace per il condizionamento, ma non evoca tutte le risposte spavento. </li><li> Posizionare l&#39;attuatore piegatura e il pettine su un monte mobile. Un supporto pipetta attaccato ad una base magnetica come normalmente utilizzati per impianti di perforazione in vitro elettrofisiologia funziona bene. </li></ol> 3. Montaggio del connettore che monta a Canne al di sopra del cilindro (Figura 2C, 2E) Nota: Il connettore è un 3-D stampato striscia 7 buche modellata dalla striscia di nylon serie 221 Amphenol utilizzato per la cavezza da Weiss e Disterhoft e Galvez et al 10,17. <ol><li> Toccare il primo foro nella striscia di 0-80 x-1&quot;Vite di macchina. Questo servirà come una vite di bloccaggio per fissare il casco al connettore. Applicare un 0-80 dado alla testa della vite di bloccaggio con colla cianoacrilato per facilitare ruotando la vite a mano. </li><li> Lascia un buco vuoto dopo il foro filettato (per lasciare spazio per il dado 0-80 della macchina) e spingere cinque basi relia-tac placcati in oro attraverso i restanti cinque fori. </li><li> Striscia il rivestimento off cinque fili lunghi (fili ottenuti da un cavo Ethernet) e saldare le estremità delle prese. Nota: le prime due fili saranno utilizzati per registrare i segnali elettromiografici (EMG) che rileverà una risposta eyeblink seguente filtraggio del segnale e l&#39;amplificazione da un amplificatore. La seconda di due consegnerà il segnale scossa da un isolatore stimolo. L&#39;ultimo cavo servirà come collegamento a terra. Questi fili saranno collegati ai sistemi utilizzati per la consegna temporizzato CS-US. </li><li> Garantire la connettività elettrica tra i cavi e le prese con una multImeter. Mettere il multimetro l&#39;impostazione continuità e tenere una delle sonde per il perno e l&#39;altra sonda alle estremità spellata del filo. I perni ed i fili sono collegati elettricamente quando la resistenza è bassa e il multimetro emette un tono. <ol><li> In alternativa, se il multimetro non ha un&#39;impostazione di continuità, misurare la resistenza tra i pin e cavi. C&#39;è continuità elettrica se c&#39;è poca resistenza misurata. </li></ol></li><li> Preparare le ali del connettore dal transistor stile due TO-220. Tagliare i cavi di emettitore, di base e di collettore del transistore e livellare la superficie in modo che possa essere fissata al connettore. </li><li> Tagliare il bordo della linguetta di montaggio a violare il foro per la scheda può scivolare sotto la testa della vite. </li><li> Epossidico transistori al connettore. Il foro nella linguetta di montaggio verrà utilizzato per fissare il connettore alle aste sopra il cilindro. </li><li> Applicare epossidica alla base dei fili protruding dalle prese e consentire la resina epossidica ad asciugare. La resina epossidica isolerà e proteggere le connessioni. </li></ol> 4. Preparare il copricapo (Figura 2D, 2E) Nota: La striscia testata è un 3-D stampato striscia 7 buche modellata dalla striscia di nylon serie Amphenol 221 utilizzato per la testata da Weiss e Disterhoft e Galvez et al 10,17.. Questo pezzo non viene più prodotta commercialmente. Il file stampante può essere scaricato dal sito web di questo giornale. <ol><li> Toccare il primo foro nella striscia per una vite 0-80 x 1 &quot;e lasciare un buco vuoto dopo il primo buco. </li><li> Premere cinque perni dorati attraverso il fondo dei restanti cinque fori (attraverso le estremità più strette). Utilizzare una morsa per facilitare spingere i perni nella striscia in modo uniforme. </li><li> Utilizzando un estrattore termico, rimuovere circa 0,5 cm di rivestimento in poliimmide l&#39;estremità di un filo di acciaio inossidabile (0,005 in. Diametro), saldare l&#39;estremità nuda del wire all&#39;apertura di uno dei perni e tagliare il filo di 0,6-0,7 cm. </li><li> Striscia circa 0,2 cm dall&#39;estremità del filo per permettere il passaggio di corrente per l&#39;animale. </li><li> Ripetere i passaggi 4,3-4,4 per i restanti tre fili. Nota: le prime due fili registra le risposte EMG mentre il secondo di due servirà ad erogare uno shock per l&#39;animale. </li><li> Come l&#39;ultimo (quinta) filo servirà come un filo di terra, taglio di circa 5 cm di filo non rivestito di acciaio inossidabile (0.005 in. Di diametro), e saldare al pin rimanenti. </li><li> Garantire la continuità tra i fili e per i perni con un multimetro. (Nel caso del filo di terra, che è rivestito, la sonda multimetro può essere posizionato in qualsiasi punto lungo il filo.) </li></ol> 5. Preparazione chirurgica (Figura 2F) <ol><li> Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici, compresa la testata. Sterilizzare il casco immergendola in alcool e poi risciacquo con soluzione salina sterile. </li><li> Anestetizzare il mouse in una camera di induzione con 3-4% vaporized isoflurano mescolato con una portata di 1-2 L di ossigeno al minuto. </li><li> Accertare che l&#39;animale è completamente anestetizzato con un pizzico punta. Il mouse è completamente anestetizzato quando non risponde di riflesso per il pizzico punta. </li><li> Una volta che l&#39;animale è stato completamente anestetizzato, iniettare una dose di buprenorfina cloridrato come analgesico (0,05-2 mg / kg, sc), radere parte superiore della testa dell&#39;animale, posizionarlo su una piastra elettrica coperta sulla base del telaio stereotassico , accertare che l&#39;animale è completamente anestetizzato, e fissare la testa al telaio. Mantenere flusso di isoflurano vaporizzato all&#39;animale, commutazione al 2% ad una portata di 1-2 L di ossigeno al minuto. Applicare una piccola quantità di pomata oftalmica alle cornee. </li><li> Disinfettare il cuoio capelluto con povidone-iodio e alcol tre volte ciascuna, alternando tra i due. </li><li> Con una lama numero 10 o 15 bisturi, fare un&#39;incisione lungo la linea mediana del cuoio capelluto, esponendo il cranio dalla parte anteriore della tha gli occhi di oltre l&#39;osso interparietale (~ 1,5-2 cm). </li><li> Trattenere i lembi della pelle con micro clip. Inserire una clip sopra l&#39;occhio, uno lungo il centro dell&#39;asse rostrale-caudale, ed una sul retro del cranio bilateralmente (cioè, utilizzare sei clip in tutto). Per evitare casco avulsione, esporre tanto del cranio possibile, compresi i lati e sul retro. Ciò aumenterà la superficie di applicazione del cemento cementazione adesiva. </li><li> Usando il bisturi, raschiare lungo la parte superiore del cranio per rimuovere il periostio e garantire una superficie di lavoro pulita e asciutta. Pulire la parte superiore del cranio con perossido di idrogeno al 3% per tre volte. </li><li> Praticare due fori nel cranio con una dimensione di 34 invertito Burr cono o una fresa 1,6 millimetri incisione punta da trapano di accettare 00-90 viti (0,0625 in. Lunga). Le viti forniranno il collegamento elettrico a terra. Inserire un foro davanti Bregma, e l&#39;altra di fronte Lambda, a sinistra della linea mediana quando condizionamento del right occhio. Mettere una vite in ogni buco. Abbassare la vite 0,28 millimetri nel cranio per ogni giro completo; due giri completi è sufficiente. </li><li> Creare diverse piccole zolle di circa 0,75 mm di diametro sul cranio al fine di aumentare la superficie e la forza di presa per il cemento. </li><li> Prendere la testata completato e avvolgere il cavo di terra in una configurazione a forma di otto intorno alle due viti. Consentire un certo allentamento (~ 1,5 cm tra la testata e la vite) nel cavo di terra in modo che il casco può essere posizionato correttamente in seguito. Nota: La figura otto norma assicura un buon collegamento elettrico tra il filo e le viti di terra. Il filo può essere saldato alla vite per assicurare un collegamento elettrico. </li><li> Applicare il cemento cementazione adesiva. Seguire le istruzioni del produttore per la miscelazione del cemento cementazione adesiva o miscelare 4 cucchiai di mix L-polvere, 8 gocce di base, e 2 gocce di catalizzatore in un piatto di miscelazione in ceramica a freddo (garantire la striscia di temperatura on il piatto di miscelazione è completamente nero.) La temperatura fredda estende il tempo di lavoro del cemento. <ol><li> Rivestire il cranio e le viti liberalmente con il cemento composito e consentire il cemento si asciughi. Questo dovrebbe prendere solo pochi minuti. </li></ol></li><li> Dopo il cemento è asciugata, posizionare la testata verticale, con i perni in piedi, sopra il cranio. Tenere il casco in posizione con un supporto simile al connettore Nota: vedere &quot;3. Montaggio del connettore&quot; -Il titolare deve essere solo una striscia di cinque fori con prese placcati in oro al fine di ricevere i perni della testata. Il supporto è attaccato ad un braccio sul telaio stereotassico. L&#39;utilizzo del supporto e del braccio facilita il posizionamento della testata ei fili. </li><li> Dopo la testata è stata posizionata, sbucciare indietro la pelle intorno alla zona periorbitale e posizionare i due fili d&#39;urto per permettere ai 0,2 cm fine spogliato di riposare sotto la pelle e di circa 2-4 mm direttamente caudale al eye. Evitare che le estremità dei due cavi si tocchino. Posizionare i due fili EMG sulla muscolare orbicolare al di sopra della cavità oculare. <ol><li> Se necessario, tagliare le estremità dei fili se sono troppo lunghi e sembrano come se possono direttamente graffiare l&#39;orbita e causare infezioni. Se tagliare le estremità del filo, assicurarsi che ci sia abbastanza filo nudo esposto. In alternativa, se i fili sembrano troppo lungo, piegare il filo indietro alla base, dove si estendono fuori dal casco. </li><li> Cemento base dei fili (cioè, l&#39;estremità vicino alla testata) in posizione sul cranio con una piccola diffusione del cemento composito adesivo e lasciare asciugare (uso la metà della porzione descritta in precedenza). </li></ol></li><li> Rimuovere le micro clip e piegare delicatamente i lembi di pelle indietro sopra il cemento. Lasciare la pelle di stabilirsi naturalmente a prevenire tensioni su qualsiasi parte della pelle per evitare distorsioni della palpebra, la prevenzione della risposta eyeblink,e disagi all&#39;animale. </li><li> Sigillare la zona esposta con cemento dentale, che copre tutto dalla pelle incisa al bordo della parte superiore della testata con cemento. Prestare particolare attenzione per evitare di gocciolare cemento sugli occhi o dei perni della testata. Parzialmente cemento indurito può essere lisciata e manipolato con un batuffolo di cotone che viene inumidito con solvente cemento dentale. Lasciare che il cemento si asciughi completamente prima di rimuovere il supporto testata. </li><li> Lasciare che l&#39;animale per recuperare da anestesia su una superficie riscaldata prima di sostituire l&#39;animale torna nella sua gabbia. Somministrare Metacam (1 mg / kg, SQ) e poi posto l&#39;animale torna nella sua gabbia. </li><li> Permettere all&#39;animale 5-7 giorni di recupero prima del test o di formazione. Mantenere cure post-operatorie standard per l&#39;animale secondo le direttive del vostro istituto. L&#39;animale deve essere controllato almeno una volta al giorno dopo che ha recuperato da un intervento chirurgico. Attenzione ai segni di scarsa mangiare e / o bere e il comportamento svogliato. Se il doloresi sospetta, fornire Metacam ogni 24 ore (stessa dose alla fine del post-chirurgico) fino alleviato. La lidocaina può essere applicato localmente sulla ferita se l&#39;animale si gratta o mostra segni di disagio. </li></ol> 6. posizionando il mouse sul cilindro e la formazione (Figura 2G) <ol><li> Per posizionare il mouse sul cilindro, frenare il mouse con una mano brevemente tenendola per la coda con una mano e poi afferrare il mouse dietro le spalle con indice e pollice con l&#39;altra. Avvolgere le altre dita intorno addome e il tronco del mouse. </li><li> Con la mano non frenare il mouse, collegare il connettore al casco sulla testa del mouse e ruotare la vite di bloccaggio. </li><li> Posizionare il mouse delicatamente sul cilindro e tenerlo in posizione mentre si collega il connettore al telaio. Utilizzare le due viti per fissare il connettore al bar sopra il cilindro. </li><li> Una volta che il connettore è stato fissato al telaio del cilindro, release la presa sul mouse. Dare il mouse un giorno due sessioni di assuefazione al cilindro. Consentire ogni sessione assuefazione la stessa durata di ogni sessione di condizionamento. <ol><li> Record velocità di intermittenza spontanea durante assuefazione e pre-esporre i topi alla vibrazione baffo CS per minimizzare il verificarsi di risposte trasalimento. Applicare il CS come durante una sessione attuale di, ma senza la scossa elettrica degli Stati Uniti. </li><li> Applicare la stimolazione baffo CS posizionando sistema Piezo stretta (circa 0,5 cm) al lato condizionata (lato destro) del mouse, mentre scivolare i denti del pettine sopra individuali baffi. Assicurarsi che le stesse basette vengono stimolati giorno per giorno posizionando il sistema Piezo nella stessa posizione da un giorno all&#39;altro. </li></ol></li><li> Iniziare la formazione con il mouse sul condizionamento classico. Consegnare due sessioni di allenamento al giorno per cinque giorni. Lasciare circa due ore tra una sessione di allenamento. <ol><li> Per il gruppo condizionata, deliver trenta prove per sessione di un lungo 250 msec vibrazioni whisker CS (60 Hz) accoppiato con una lunghezza di 100 msec impulso elettrico US (0,3 mA - 3 mA, forniti da un WPI A385R stimolo sezionatore). Separare il CS e gli Stati Uniti con un msec lungo intervallo di traccia 250 priva di stimoli per rendere il compito dipende l&#39;ippocampo (Figura 1) 23. </li><li> Regolare l&#39;intensità dello shock elettrico per ogni animale in modo che un battito viene evocata. prove separate con un intervallo tra le prove casuale di 30-60 secondi (media di 45 secondi, la durata complessiva di 30 minuti per sessione.) </li><li> Invia trenta spaiato CS solo e noi soli sperimentazioni ciascuno (per un totale di sessanta studi) al gruppo pseudoconditioned, utilizzando gli stessi parametri di stimolo come indicato per il gruppo condizionata. Assicurarsi che il CS da solo e degli Stati Uniti prove da soli sono pseudorandomized in modo tale che nessuno stimolo è presentato più di due volte di fila. Separare ogni prova con un intervallo medio tra le prove di 22,5 sec. </li></ol></li><li> defegato rumore di fondo a 65 dB in tutto assuefazione e di formazione, al fine di mascherare qualsiasi rumore della vibrazione generata dal stimolatore soffio. </li></ol>

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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Major+Gene+Affecting+Age-Related+Hearing+Loss+Is+Common+to+at+Least+Ten+Inbred+Strains+of+Mice.">A Major Gene Affecting Age-Related Hearing Loss Is Common to at Least Ten Inbred Strains of Mice.</a> Genomics. 70 (2), 171-180 (2000).</li><li>Tseng, W., Guan, R., Disterhoft, J. F., Weiss, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trace+eyeblink+conditioning+is+hippocampally+dependent+in+mice.">Trace eyeblink conditioning is hippocampally dependent in mice.</a> Hippocampus. 14 (1), 58-65 (2004).</li><li>Joachimsthaler, B., Brugger, D., Skodras, A., Schwarz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spine+loss+in+primary+somatosensory+cortex+during+trace+eyeblink+conditioning.">Spine loss in primary somatosensory cortex during trace eyeblink conditioning.</a> J Neurosci. 35 (9), 3772-3781 (2015).</li><li>Boele, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellar+and+extracerebellar+involvement+in+mouse+eyeblink+conditioning:+the+ACDC+model.">Cerebellar and extracerebellar involvement in mouse eyeblink conditioning: the ACDC model.</a> Front in Cell Neurosci. 3 (19), (2010).</li><li>Koekkoek, S. K. E., Den Ouden, W. L., Perry, G., Highstein, S. M., De Zeeuw, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+kinetic+and+frequency-domain+properties+of+eyelid+responses+in+mice+with+magnetic+distance+measurement+technique.">Monitoring kinetic and frequency-domain properties of eyelid responses in mice with magnetic distance measurement technique.</a> J Neurophysiol. 88 (4), 2124-2133 (2002).</li><li>Ward, R. L., Flores, L. C., Disterhoft, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infragranular+barrel+cortex+activity+is+enhanced+with+learning.">Infragranular barrel cortex activity is enhanced with learning.</a> J Neurophysiol. 108 (5), 1278-1287 (2012).</li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Classical eyeblink condizionata è una forma di apprendimento associativo che è uno strumento utile per comprendere i substrati neurali alla base dell&#39;apprendimento e della memoria. I metodi precedenti utilizzati per il condizionamento eyeblink in roditori come topi coinvolti una camera che ha permesso per l&#39;animale di muoversi liberamente. Una preparazione testa fissa per il condizionamento eyeblink nei topi, con l&#39;apparecchiatura descritta da Chettih et al. E Heiney et al. E più recente...

condizionata Eyeblink è una forma di condizionamento pavloviano e un sistema modello per studiare i meccanismi neurali di apprendimento associativo e della memoria. E &#39;stata studiata in varie specie, compreso l&#39;uomo, conigli, gatti, ratti e topi. Il paradigma prevede la presentazione di due stimoli appaiati: un neutrale stimolo condizionato (CS, ad esempio, un tono, un lampo di luce, o la stimolazione baffo), e uno stimolo incondizionato saliente (USA, ad esempio, un soffio d&#39;aria per l&#39;occhio, o scossa periorbitale). Gli Stati Uniti suscita un incondizionato, riflessiva risposta eyeblink (vale a dire, UR). Alla fine, dopo varie presentazioni del abbinato CS-USA, il soggetto impara ad associare il CS con gli Stati Uniti. Questo apprendimento si manifesta sotto forma di una risposta condizionata (CR), un eyeblink suscitato dalla sola CS che precede la presentazione degli USA. condizionata Eyeblink sotto forma di traccia include un intervallo libero da stimoli di pochi hmillisecondi undred che separa il CS e gli Stati Uniti (Figura 1). Trace condizionata è una forma di apprendimento dichiarativa in quanto richiede la consapevolezza delle contingenze stimolo 1. Il divario temporale richiede l&#39;animale a mantenere un neurale &#39;traccia&#39; del CS in regioni del cervello anteriore, come l&#39;ippocampo in modo che gli Stati Uniti ed il CS di diventare associato 1-6. Insieme con le regioni prosencefalo, tracce di condizionamento dipende anche il cervelletto 7. condizionata Eyeblink è, quindi, un paradigma utile per la ricerca dei molteplici aspetti di memoria, compresi l&#39;acquisizione, il consolidamento e recupero. Durante condizionata eyeblink, un gruppo di controllo di animali è presentato con stimoli spaiati in ordine casuale per verificare pseudoconditioning o sensibilizzati risposte al CS che possono essere causati dalla presentazione Stati Uniti da soli, piuttosto che una associazione CS-US imparato. Un appara comunemente usatoTus per l&#39;indagine di condizionamento eyeblink nei roditori è una camera in cui i roditori sono autorizzati a muoversi liberamente durante il processo di formazione 8-10. Con questo tipo di apparecchiatura, un tether è normalmente collegato a un casco che è apposto cranio del roditore. Il tether consente l&#39;erogazione degli Stati Uniti (e talvolta CS) e per trasmettere la risposta dell&#39;animale a tali stimoli (cioè, la risposta eyeblink) 10. Il tether stesso può essere modificato in base al tipo di stimoli consegnato e come viene registrata la risposta eyeblink. La ragione per usare &quot;liberamente in movimento&quot; topi legati per un condizionamento eyeblink è che i topi lotta contro la moderazione. Anche se altre specie possono essere più suscettibili di moderazione, il principale vantaggio di utilizzare topi negli esperimenti di condizionamento eyeblink è che la maggior parte dei disponibili ceppi mutanti geneticamente modificati sono ceppi di topi. Oltre alla lotta, res completiTraint di topi si traduce in difficoltà acuta. Una preparazione topo testa fissa che minimizza lo stress aumenterebbe le informazioni fisiologiche che possono essere ottenute durante il condizionamento eyeblink. Ad esempio, questo sistema permetterebbe di imaging di neuroni corticali con 2-photon microscopia a 11. Preparati Testa-fisso sono stati utilizzati in precedenti esperimenti di imaging ottico della corteccia attraverso protesi craniche rimovibili, in vivo registrazioni elettrofisiologiche del cervello dei roditori con array tetrodo, Calcio Imaging a due fotoni, e anche come piattaforma per il condizionamento eyeblink nei topi 11 -16. Nel sistema testa fissa, stimolazione affidabile e registrazioni sono assicurati senza completa ritegno del mouse (Figura 2). Un casco come quello utilizzato nel sistema liberamente mobile viene apposto cranio del mouse. Durante l&#39;allenamento, la testata viene apposto un connettore che è collegato a barre suun tapis roulant cilindrica per stabilizzare la testa del roditore (Figura 2A). Il tapis roulant cilindrica permette il mouse per riposare comodamente, ma se il mouse lo desidera, permette anche l&#39;esecuzione o camminare. Con l&#39;uso di questo sistema, i topi possono essere formati con una vibrazione baffo come CS ed una scossa elettrica periorbitale mite come gli Stati Uniti (Figura 1). Gli Stati Uniti è espresso attraverso i fili chirurgicamente posizionati sotto la pelle laterali per l&#39;occhio. Il CS è espresso tramite un pettine che è collegato a un 2-layer rettangolare flessione attuatore (Figura 2B). Il pettine e attuatore piegatura vengono poi attaccati ad una base magnetica che viene spostato nella posizione corretta durante la formazione ed è regolata per la consegna ottimale per ogni singolo animale. Il pettine è posizionato a cavalcare i baffi selezionati. Durante l&#39;erogazione del CS, un segnale viene inviato all&#39;attuatore flessione che sposta il pettine e porta alla vibrazione delle basette 17. 16,18,19. La stimolazione baffo motivo è stato scelto per il CS in questo paradigma sperimentale è la dipendenza degli animali murini sul loro vibrisse per l&#39;input informazioni somatosensoriali durante l&#39;esplorazione. Stimolazione baffo ha dimostrato di essere un affidabile ed efficace CS 20. Inoltre, dato il substrato ben consolidata e organizzato corticale del sistema vibrisse (vale a dire, la corteccia barile), la stimolazione baffo come il CS fornisce uno strumento elegante per mappare i cambiamenti corticali e la plasticità connessi con l&#39;apprendimento eyeblink condizionata 20,21. Un sistema di testa fissa consente la precisa stimolazione di baffi selezionati per confrontare le risposte tra i neuroni e neuroni ricevono input da baffi non-stimolata stimolati. Infine, molti ceppi di topi mostrano perdita dell&#39;udito legata all&#39;età come relativamente giovani adulti <sup&gt; 22, e la chiusura delle palpebre durante un batter condizionata altera un CS visivo (anche se un CS visiva fa migliorare i problemi con startle risposte 16). stimolazione baffo non è influenzata da una di queste complicazioni. Presentato qui sono modifiche uniche e importanti su altri preparati testa-fisso per eyeblink condizionata, compresi i metodi di CS e US consegna, e l&#39;acquisizione della risposta eyeblink. L&#39;affidabilità di questo apparecchio e il paradigma di formazione nel condizionamento eyeblink è dimostrato imparando curve da topi condizionata e una curva di apprendimento relativamente piatta da animali di controllo pseudoconditioned (Figura 7a).

<table><tbody><tr><td>Exervo TeraNova Foam Roller 36&quot; x 6&quot;&amp;nbsp;</td><td>Amazon</td><td>B002ONUM0E</td><td>For cylinder</td></tr><tr><td>Plexiglas</td><td></td><td></td><td>Custom-made; 1 cm thick</td></tr><tr><td>Metal Rods (12.7&amp;nbsp;mm diameter)</td><td></td><td></td><td>Custom-made</td></tr><tr><td>4-40 machine screw (.25&amp;nbsp;in. long)</td><td>Amazon Supply</td><td>B00F33Q8QO</td><td>For cylinder</td></tr><tr><td>Classic Design Hair Comb</td><td>Conair</td><td>93505WG-320</td><td>For whisker stimulation</td></tr><tr><td>2-Layer Rectangular Bending Actuator</td><td>Piezo Systems</td><td>T220-A4-303X&amp;nbsp;</td><td>For whisker stimulation</td></tr><tr><td>Solder and Flux Kit</td><td>Piezo Systems</td><td>MSF-003-NI</td><td>For whisker stimulation</td></tr><tr><td>Magnetic Base</td><td>Thor Labs</td><td>MB175</td><td>For whisker stimulation</td></tr><tr><td>Threaded rod for magnetic base</td><td></td><td></td><td>Custom-made</td></tr><tr><td>Strips based on 221 series nylon strip connectors from Electronic Connector Corp.</td><td></td><td></td><td>Custom-made, based on Weiss and Disterhoft, 2008</td></tr><tr><td>TO-220 Style Transistor</td><td>Amazon Supply</td><td>B0002ZPZYO&amp;nbsp;</td><td>For connector; for the wings</td></tr><tr><td>Relia-Tac Sockets</td><td>Electronic Connector Corp.</td><td>220-S02</td><td>For connector</td></tr><tr><td>Relia-Tac Pins</td><td>Electronic Connector Corp.</td><td>220-P02</td><td>For headpiece</td></tr><tr><td>0-80 stainless steel machine screw (1 in. long)</td><td>Amazon Supply</td><td>B000FN68EE</td><td>Locking Screw</td></tr><tr><td>0-80 stainless steel machine screw hex nut (5/32 in. thick)</td><td>Amazon Supply</td><td>B000N2TK7Y</td><td>Locking Screw Head</td></tr><tr><td>Loctite Super Glue-Liquid</td><td>Loctite</td><td>1365896</td><td>Cyanoacrylic glue; for the locking screw</td></tr><tr><td>Quick Setting Epoxy</td><td>Ace Hardware</td><td>18613</td><td>For connector and whisker stimulation system</td></tr><tr><td>Ethernet Cable Wires</td><td></td><td></td><td>Ethernet cable can be taken apart to use the individual wires for the connector</td></tr><tr><td>Polyimide coated stainless steel wires (2&amp;nbsp;in. long, .005 in. diameter)</td><td>PlasticsOne</td><td>005sw/2.0 37365 S-S&amp;nbsp;</td><td>For headpiece, EMG and shock wires</td></tr><tr><td>Stainless steel uncoated wire (.005&amp;nbsp;in. diameter)</td><td>AM Systems</td><td>792800</td><td>For headpiece, ground wires</td></tr><tr><td>Tenma Variable Autotransformer</td><td>Tenma</td><td>72-110</td><td>For the whisker stimulation; rheostat to adjust current to the bending actuator</td></tr><tr><td>Amplifier</td><td>A-M Systems</td><td>1700</td><td>Amplifier for filtering and amplifying EMG signals</td></tr><tr><td>WPI A385R stimulus isolator</td><td>World Precision Instruments</td><td>31405</td><td>For the electrical shock</td></tr><tr><td>Isothesia (Isoflurane)</td><td>Henry Schein: Animal Health</td><td>50031</td><td>For surgery; anesthesia</td></tr><tr><td>Buprenex Injectable CIII</td><td>Reckett Benckiser Pharmaceuticals Inc</td><td>NDC 12496-0757-1</td><td>For surgery; analgesic</td></tr><tr><td>Akwa Tears: Lubricant Ophthalmic Ointment&amp;nbsp;</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-062-35</td><td>Artificial tear ointment to prevent dry eyes while under anesthesia</td></tr><tr><td>Povidine-Iodine Prep Pads</td><td>PDI</td><td>NDC 10819-3883-1</td><td>For surgery; antiseptic</td></tr><tr><td>Alcohol Prep Pads</td><td></td><td></td><td>May be purchased from any standard pharmacy</td></tr><tr><td>Stainless steel surgical scalpel handles (no.3)</td><td>Integra Miltex&amp;nbsp;</td><td>4-7.</td><td>For surgery</td></tr><tr><td>Stainless steel surgical scalpel blades</td><td>Integra Miltex</td><td>4-310 or 4-315</td><td>For surgery; number 10 or 15 scalpel blade</td></tr><tr><td>3% Hydrogen Peroxide</td><td></td><td></td><td>May be purchased from any standard pharmacy</td></tr><tr><td>Micro Clip</td><td>Roboz</td><td>RS-5459</td><td>For surgery, to hold back skin</td></tr><tr><td>00-90 stainless steel machine screw (0.0625&amp;nbsp;in. long)</td><td>Amazon Supply</td><td>B002SG89X4&amp;nbsp;</td><td>For surgery, to wrap ground wire around</td></tr><tr><td>Professional Rotary Tool</td><td>Walnut Hollow</td><td>29637</td><td>Hand drill for surgery, to drill holes in skull</td></tr><tr><td>Inverted Cone Burr</td><td>Roboz</td><td>RS-6282C-34</td><td>Inverted cone burr size 34; for surgery, to drill holes in skull</td></tr><tr><td>Engraving Cutter Drill Bit</td><td>Dremel</td><td>106</td><td>Engraving cutter; 1.6 mm bit; for surgery, to drill holes in skull</td></tr><tr><td>C&amp;amp;B Metabond-Quick! Cement System &quot;B&quot; Quick Base</td><td>Parkell</td><td>S398</td><td>For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion</td></tr><tr><td>C&amp;amp;B Metabond-Quick! Cement System Clear L-Powder</td><td>Parkell</td><td>S399</td><td>For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion</td></tr><tr><td>C&amp;amp;B Metabond-Quick! Cement System &quot;C&quot; Universal TBB Catalyst 0.7 ml</td><td>Parkell</td><td>S371</td><td>For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion</td></tr><tr><td>C&amp;amp;B Metabond-Quick! Cement System Ceramic Mixing Dish with temperature strip</td><td>Parkell</td><td>S387</td><td>For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion</td></tr><tr><td>Swiss Tweezers, style #5</td><td>World Precision Instruments</td><td>504506</td><td>For surgery</td></tr><tr><td>Puritan Cotton-Tipped Applicators</td><td>VWR International</td><td>10806-005&amp;nbsp;</td><td>For surgery</td></tr><tr><td>Dental Caulk Grip Cement Kit</td><td>Dentsply</td><td>675570</td><td>For surgery; dental cement</td></tr></tbody></table>

whisker-signaled eyeblink classical conditioning in head-fixed mice

Eyeblink conditioning is a common paradigm for investigating the neural mechanisms underlying learning and memory. To better utilize the extensive repertoire of scientific techniques available to study learning and memory at the cellular level, it is ideal to have a stable cranial platform. Because mice do not readily tolerate restraint, they are usually trained while moving about freely in a chamber. Conditioned stimulus (CS) and unconditioned stimulus (US) information are delivered and eyeblink responses recorded via a tether connected to the mouse's head. In the head-fixed apparatus presented here, mice are allowed to run as they desire while their heads are secured to facilitate experimentation. Reliable conditioning of the eyeblink response is obtained with this training apparatus, which allows for the delivery of whisker stimulation as the CS, a periorbital electrical shock as the US, and analysis of electromyographic (EMG) activity from the eyelid to detect blink responses.

8-10 settimane di età topi maschi C57Bl6 / J sono stati formati sulla traccia eyeblink condizionata sull&#39;apparato tapis roulant cilindrica testa fissa. 8 topi sono stati addestrati con le presentazioni appaiate CS-Stati Uniti (gruppo condizionata) e 9 topi sono stati addestrati con le presentazioni spaiati CS e statunitensi (gruppo pseudoconditioned). Esempio EMG registrazioni di una risposta condizionata da un mouse cond...

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Whisker-signaled Eyeblink Classical Conditioning in Head-fixed Mice

The preparation presented here for whisker-signaled eyeblink conditioning in head-fixed mice precisely stimulates specific whiskers while allowing mice to ambulate on a cylindrical treadmill. A whisker stimulation conditioned stimulus (CS) paired with a periorbital shock unconditioned stimulus (US) results in reliable associative learning on this apparatus.

Baffo-segnalato Eyeblink condizionamento classico nei topi Head-fisso

Eyeblink conditioning is a common paradigm for investigating the neural mechanisms underlying learning and memory. To better utilize the extensive ...

whisker-signaled-eyeblink-classical-conditioning-in-head-fixed-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

12.9K Views.  Northwestern University. The preparation presented here for whisker-signaled eyeblink conditioning in head-fixed mice precisely stimulates specific whiskers while allowing mice to ambulate on a cylindrical treadmill. A whisker stimulation conditioned stimulus (CS) paired with a periorbital shock unconditioned stimulus (US) results in reliable associative learning on this apparatus.

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Flat-floored Air-lifted Platform: A New Method for Combining Behavior with Microscopy or Electrophysiology on Awake Freely Moving Rodents

It is widely acknowledged that the use of general anesthetics can undermine the relevance of electrophysiological or microscopical data obtained from a living animal&#8217;s brain. Moreover, the lengthy recovery from anesthesia limits the frequency of repeated recording/imaging episodes in longitudinal studies. Hence, new methods that would allow stable recordings from non-anesthetized behaving mice are expected to advance the fields of cellular and cognitive neurosciences. Existing solutions range from mere physical restraint to more sophisticated approaches, such as linear and spherical treadmills used in combination with computer-generated virtual reality. Here, a novel method is described where a head-fixed mouse can move around an air-lifted mobile homecage and explore its environment under stress-free conditions. This method allows researchers to perform behavioral tests (e.g., learning, habituation or novel object recognition) simultaneously with two-photon microscopic imaging and/or patch-clamp recordings, all combined in a single experiment. This video-article describes the use of the awake animal head fixation device (mobile homecage), demonstrates the procedures of animal habituation, and exemplifies a number of possible applications of the method.

This method creates a tangible, familiar environment for the mouse to navigate and explore during microscopic imaging or single-cell electrophysiological recordings, which require firm fixation of the animal&#8217;s head.

Appartamento con pavimento Platform aria sollevata: Un nuovo metodo per la combinazione di Comportamento con microscopia o Elettrofisiologia su Awake liberi di muoversi Roditori

It is widely acknowledged that the use of general anesthetics can undermine the relevance of electrophysiological or microscopical data obtained from a ...

Ricerca

Comportamento

Introducing Clicker Training as a Cognitive Enrichment for Laboratory Mice

Establishing new refinement strategies in laboratory animal science is a central goal in fulfilling the requirements of Directive 2010/63/EU. Previous research determined a profound impact of gentle handling protocols on the well-being of laboratory mice. By introducing clicker training to the keeping of mice, not only do we promote the amicable treatment of mice, but we also enable them to experience cognitive enrichment. Clicker training is a form of positive reinforcement training using a conditioned secondary reinforcer, the "click" sound of a clicker, which serves as a time bridge between the strengthened behavior and an upcoming reward. The effective implementation of the clicker training protocol with a cohort of 12 BALB/c inbred mice of each sex proved to be uncomplicated. The mice learned rather quickly when challenged with tasks of the clicker training protocol, and almost all trained mice overcame the challenges they were given (100% of female mice and 83% of male mice). This study has identified that clicker training for mice strongly correlates with reduced fear in the mice during human-mice interactions, as shown by reduced anxiety-related behaviors (e.g., defecation, vocalization, and urination) and fewer depression-like behaviors (e.g., floating). By developing a reliable protocol that can be easily integrated into the daily routine of the keeping of laboratory mice, the lifetime experience of welfare in the mice can be improved substantially.

The development of new refinement strategies for laboratory mice is a challenging task that contributes towards fulfilling the 3R principle. This protocol introduces clicker training as a cognitive enrichment program for laboratory mice.

L&#39;introduzione di Clicker Training come un arricchimento conoscitivo per topi di laboratorio

Establishing new refinement strategies in laboratory animal science is a central goal in fulfilling the requirements of Directive 2010/63/EU. Previous ...

Classical Short-Delay Eyeblink Conditioning in One-Year-Old Children

Classical eyeblink conditioning (EBC) refers to the learned association between a conditioned stimulus (an auditory tone) and an unconditioned stimulus (a puff of air to the cornea). Eyeblink conditioning is often used experimentally to detect abnormalities in cerebellar-dependent learning and memory that underlies this type of associative learning. While experiments in adults and older children are relatively simple to administer using commercial equipment, eyeblink conditioning in infants is more challenging due to their poor compliance, which makes correct positioning of the equipment difficult. To achieve conditioning in one-year-old infants, a custom-made or an adapted commercial system can be used to deliver the air puff to the infant's cornea. The main challenge lies in successfully detecting and classifying the behavioral responses. We report that automated blink detection methods are unreliable in this population, and that conditioning experiments should be analyzed using frame-by-frame analysis of supplementary video camera recordings. This method can be applied to study developmental changes in eyeblink conditioning and to examine whether this paradigm can detect children with neurological disorders.

This protocol describes an eyeblink conditioning paradigm appropriate for experiments with one-year-old infants. Commercial or custom-made equipment can be used to deliver the stimuli, and data collection and analysis should be performed on the video recordings.

Classica-ritardo Eyeblink condizionata a One-Year-Old Children

Classical eyeblink conditioning (EBC) refers to the learned association between a conditioned stimulus (an auditory tone) and an unconditioned stimulus (a ...

A System for Tracking the Dynamics of Social Preference Behavior in Small Rodents

Exploring the neurobiological mechanisms of social behavior requires behavioral tests that can be applied to animal models in an unbiased and observer-independent manner. Since the beginning of the millennium, the three-chamber test has been widely used as a standard paradigm to evaluate sociability (social preference) and social novelty preference in small rodents. However, this test suffers from multiple limitations, including its dependence on spatial navigation and negligence of behavioral dynamics. Presented and validated here is a novel experimental system that offers an alternative to the three-chamber test, while also solving some of its caveats. The system requires a simple and affordable experimental apparatus and publicly available open-source analysis system, which automatically measures and analyzes multiple behavioral parameters at individual and population levels. It allows detailed analysis of the behavioral dynamics of small rodents during any social discrimination test. We demonstrate the efficiency of the system in analyzing the dynamics of social behavior during the social preference and social novelty preference tests as performed by adult male mice and rats. Moreover, we validate the ability of the system to reveal modified dynamics of social behavior in rodents following manipulations such as whisker trimming. Thus, the system allows for rigorous investigation of social behavior and dynamics in small rodent models and supports more accurate comparisons between strains, conditions, and treatments.

Described here is a novel automated experimental system that offers an alternative to the three-chamber test and also solves several caveats. This system supplies multiple behavioral parameters that enable rigorous analysis of small rodent behavioral dynamics during the social preference and social novelty preference tests.

Un sistema per tenere traccia delle dinamiche del comportamento delle preferenze sociali nei piccoli roditori

Exploring the neurobiological mechanisms of social behavior requires behavioral tests that can be applied to animal models in an unbiased and ...

Investigating Migraine-Like Behavior Using Light Aversion in Mice

Migraine is a complex neurological disorder characterized by headache and sensory abnormalities, such as hypersensitivity to light, observed as photophobia. Whilst it is impossible to confirm that a mouse is experiencing migraine, light aversion can be used as a behavioral surrogate for the migraine symptom of photophobia. To test for light aversion, we utilize the light/dark assay to measure the time mice freely choose to spend in either a light or dark environment. The assay has been refined by introducing two critical modifications: pre-exposures to the chamber prior to running the test procedure and adjustable chamber lighting, permitting the use of a range of light intensities from 55 lux to 27,000 lux. Because the choice to spend more time in the dark is also indicative of anxiety, we also utilize a light-independent anxiety test, the open field assay, to distinguish anxiety from light-aversive behavior. Here, we describe a modified test paradigm for the light/dark and open field assays. The application of these assays is described for intraperitoneal injection of calcitonin gene-related peptide (CGRP) in two mouse strains and for optogenetic brain stimulation studies.

Rodents are not able to report migraine symptoms. Here, we describe a manageable test paradigm (light/dark and open field assays) to measure light aversion, one of the most common and bothersome symptoms in patients with migraines.

Studiare il comportamento simile all'emicrania usando l'avversione alla luce nei topi

Migraine is a complex neurological disorder characterized by headache and sensory abnormalities, such as hypersensitivity to light, observed as ...

Juxtacellular Monitoring and Localization of Single Neurons within Sub-cortical Brain Structures of Alert, Head-restrained Rats

There are a variety of techniques to monitor extracellular activity of single neuronal units. However, monitoring this activity from deep brain structures in behaving animals remains a technical challenge, especially if the structures must be targeted stereotaxically. This protocol describes convenient surgical and electrophysiological techniques that maintain the animal&#8217;s head in the stereotaxic plane and unambiguously isolate the spiking activity of single neurons. The protocol combines head restraint of alert rodents, juxtacellular monitoring with micropipette electrodes, and iontophoretic dye injection to identify the neuron location in post-hoc histology. While each of these techniques is in itself well-established, the protocol focuses on the specifics of their combined use in a single experiment. These neurophysiological and neuroanatomical techniques are combined with behavioral monitoring. In the present example, the combined techniques are used to determine how self-generated vibrissa movements are encoded in the activity of neurons within the somatosensory thalamus. More generally, it is straightforward to adapt this protocol to monitor neuronal activity in conjunction with a variety of behavioral tasks in rats, mice, and other animals. Critically, the combination of these methods allows the experimenter to directly relate anatomically-identified neurophysiological signals to behavior.

This protocol describes the design and surgical implantation of a head-restraining mechanism to monitor neuronal activity in sub-cortical brain structures in alert rats. It delineates procedures to isolate single neurons in the juxtacellular configuration and to efficiently identify their anatomical locations.

Monitoraggio Juxtacellular e localizzazione dei singoli neuroni nelle strutture cerebrali Sub-corticali di Alert, Rats Testa-trattenuto

There are a variety of techniques to monitor extracellular activity of single neuronal units. However, monitoring this activity from deep brain structures ...

Neuroscienze

Behavioral Training Procedures for Head-fixed Virtual Reality in Mice

Virtual reality (VR) combined with head-fixation is increasingly being utilized in behavioral neuroscience studies as it allows complex behavioral assays to be performed in head-fixed mice. This enables precise behavioral recordings while incorporating various neurophysiological techniques that require head-fixation to minimize movement-related signal noise during neural recordings. However, despite the growing use of VR, there is little published data on the detailed methodology of how to implement it. In this study, a training protocol is developed whereby male and female C57B16/J mice are trained to run down a virtual linear corridor, the length of which is increased from 1-3 m over multiple training sessions. Building upon this foundation, this study investigated the feasibility of mice performing complex behaviors within VR using a Y-maze paradigm. The task required navigating to the arm with black walls from the choice point in the Y-maze. After reaching a criterion of two consecutive days equal to or greater than 70% correct, the mice progressed to increasingly difficult sensory discrimination. The findings provide important details on the methodologies useful for the successful training of mice in VR and demonstrate that mice exhibit learning capabilities in navigating the Y-maze. The methodology presented not only offers insights into training duration in VR-based assays but also underscores the potential for probing intricate behaviors in mice, opening avenues for more comprehensive neuroscience investigations.

The article describes the experimental procedures for the commonly used linear track virtual reality (VR) paradigm in mice as well as determining the feasibility of running complex VR tasks by testing a Y-shaped signal discrimination task.

Procedure di addestramento comportamentale per la realtà virtuale con testa fissa nei topi

Virtual reality (VR) combined with head-fixation is increasingly being utilized in behavioral neuroscience studies as it allows complex behavioral assays ...

<meta charset="utf8"></head><body>Rilevamento in tempo reale dello strabismo oculare del mouse per il monitoraggio del dolore dell'emicrania con DeepLabCut

An Automated Squint Method for Time-syncing Behavior and Brain Dynamics in Mouse Pain Studies

Spontaneous pain has been challenging to track in real time and quantify in a way that prevents human bias. This is especially true for metrics of head pain, as in disorders such as migraine. Eye squint has emerged as a continuous variable metric that can be measured over time and is effective for predicting pain states in such assays. This paper provides a protocol for the use of DeepLabCut (DLC) to automate and quantify eye squint (Euclidean distance between eyelids) in restrained mice with freely rotating head motions. This protocol enables unbiased quantification of eye squint to be paired with and compared directly against mechanistic measures such as neurophysiology. We provide an assessment of AI training parameters necessary for achieving success as defined by discriminating squint and non-squint periods. We demonstrate an ability to reliably track and differentiate squint in a CGRP-induced migraine-like phenotype at a sub second resolution.

<meta charset="utf8"></head><body>Autore in primo piano: Decifrare le reti elettriche alla base di attività e disturbi cerebrali complessi

This protocol provides a method for tracking automated eye squint in rodents over time in a manner compatible with time-locking to neurophysiological measures. This protocol is expected to be useful to researchers studying mechanisms of pain disorders such as migraine.

Un metodo di strabismo automatizzato per il comportamento di sincronizzazione temporale e le dinamiche cerebrali negli studi sul dolore del topo

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Baffo-segnalato Eyeblink condizionamento classico nei topi Head-fisso

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