Questo metodo fornisce un surrogato comportamentale preclinico per la fotofobia, che è una lamentela principale dei pazienti con emicrania. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il rilevamento è automatico, quindi molto conveniente. Inoltre, l'avversione alla luce e l'ansia possono essere distinte conducendo questi test.
Il primo giorno, accendere l'apparato di analisi chiaro/scuro. Impostare l'intensità della luce su 27.000 lux. Mettere l'inserto scuro nella camera chiara / scura.
Aprire il software di tracciamento e impostare un nuovo protocollo. Nella nuova impostazione del protocollo, impostare la durata su 30 minuti. Nella nuova impostazione di analisi, impostare i raccoglitori di dati per durata su 300 secondi.
Nell'impostazione Nuova zona, scegliere zone predefinite. Sceglietene due, quindi orizzontale. Controllare se la camera è divisa in due zone di uguali dimensioni orizzontalmente per la registrazione.
Prima del test, abituare i topi alla sala di test per un'ora, mantenendo la luce della stanza accesa in modo da non disturbare il ritmo circadiano dei topi. Assicurarsi che tutte le apparecchiature per il test chiaro/scuro siano accese consentendo ai topi di acclimatarsi completamente all'ambiente della sala prove. Selezionare acquisisci dati, inserire gli ID del mouse e avviare il protocollo.
Tirare il cassetto all'esterno del cubicolo di attenuazione del suono per accedere alla camera chiara/scura e all'inserto scuro. Posizionare delicatamente un mouse nella zona luminosa della camera e spingere il cassetto all'interno del cubicolo. Assicurarsi che il software rilevi immediatamente il mouse e inizi a registrare l'attività.
Attendi che la registrazione si interrompa automaticamente dopo 30 minuti. Riporta il mouse nella sua gabbia di casa. Pulire la camera e l'inserto scuro utilizzando salviette monouso germicide con odore di alcol per sradicare eventuali segnali olfattivi lasciati dal topo precedente.
Il quarto giorno, ripeti tutti i passaggi eseguiti il primo giorno. Il settimo giorno, ripetere i passaggi eseguiti il primo giorno, ma solo fino all'assuefazione dei topi. Dopo l'assuefazione, somministrare ai topi CGRP intraperitoneale.
Quindi riporta i topi nelle loro gabbie di casa. Dopo 30 minuti, riprendere il protocollo ed eseguire il mouse nella camera chiaro/scuro come accennato in precedenza. Pulire la camera e l'inserto scuro come descritto in precedenza.
Il giorno 10, ripeti tutti i passaggi eseguiti il primo giorno. Accendere l'apparecchio e impostare l'intensità della luce su 27.000 lux. Aprire il software di tracciamento e impostare un nuovo protocollo come dimostrato in precedenza.
Nelle nuove impostazioni della zona, scegline una seguita da centro. Impostare la periferia come 3,97 centimetri e il centro come 19,05 per 19,05 centimetri. Abituare i topi alla sala prove come dimostrato in precedenza.
Somministrare i topi con CGRP intraperitoneale. Riporta i topi alle loro gabbie di casa. Dopo 30 minuti, avviare il protocollo.
Tirare il cassetto estraibile all'esterno del cubicolo di attenuazione del suono e posizionare delicatamente un mouse al centro della camera a campo aperto. Spingere il cassetto all'interno del cubicolo. Tieni traccia del comportamento del mouse per 30 minuti, quindi riporta i topi nelle loro gabbie di casa.
Pulire l'apparecchio come dimostrato in precedenza. I risultati hanno rivelato che l'iniezione intraperitoneale di CGRP ha ridotto significativamente la durata del tempo trascorso nella zona di luce nel test luce / buio nei topi 6J neri CD1 e C57, ma non ha influenzato il tempo trascorso dai topi al centro nel test in campo aperto nei topi CD1 e C57 black 6J. Il trattamento con CGRP ha anche aumentato la quantità di tempo in cui i topi hanno riposato nella zona scura, ma non nella zona chiara in entrambi i topi 6J neri CD1 e C57.
La stimolazione ottica dei neuroni nei nuclei talamici posteriori, ha portato ad una corrispondente diminuzione della durata dei topi trascorsi nella zona di luce nel saggio luce/buio nei topi iniettati di channelrhodopsin-2 rispetto ai topi iniettati con virus di controllo. Un aumento del tempo di riposo nella zona scura ma non nella zona chiara è stato osservato anche nel caso dei topi iniettati con channelrhodopsin-2, rispetto ai topi iniettati dal virus di controllo. È importante ricordare che quando si mette il mouse nella camera chiara / scura, il mouse deve essere maneggiato delicatamente per evitare il maggior stress possibile.
Questa tecnica aprirà la strada per esplorare i meccanismi alla base dell'emicrania e di altri disturbi correlati alla fotofobia e testare l'efficacia preclinica per potenziali terapie.
