Questo lavoro è stato supportato da NIH R15 1R15DK106666-01A1 (a J. Liu) e NIH RO1 HL071556 (di J.I. Shapiro).

tutti cura degli animali e gli esperimenti sono stati approvati dalla Marshall University istituzionali cura degli animali e uso Committee (IACUC) in conformità con la guida del National Institutes of Health (NIH) per la cura e l'uso di animali da laboratorio. I topi maschii C57BL/6 (10-12 settimane) sono stati alloggiati in una struttura animale libero agente patogeno in determinate stanze dotate di gabbie che forniscono aria purificata sotto un ciclo luce/buio di 12 h. Il cibo e l'acqua era fornito ad libitum.
 1. preparazione all'intervento Nota: I materiali e gli strumenti chirurgici sono ottenuti da diverse fonti che non sono specifici per gli interventi di chirurgia. Strumenti e materiali da altre fonti possono essere utilizzati anche per lo stesso scopo. Vedi la Tabella materiali per un elenco di strumenti chirurgici.
Tabella <ol><li>preparazione per la chirurgia <ol><li>posto di seguito alla portata di funzionamento: riscaldamento pad, lampada alogena, bombola di ossigeno e isoflurano serbatoio, vaporizzatore isoflurano, tagliatore di capelli, crema depilatoria, bilance, sterilizzati funzionamento insieme, lino chirurgico sterilizzato, tamponi di cotone, alcool al 70%, soluzione polyhydroxydine (contenente 1% di iodio), soluzione di NaCl 0,9%, 1 mL siringhe ed aghi (30 G), punti di sutura seta 3-0 e 4-0, buprenorfina e penicillina, pomata antibiotica, e unguento oculare lubrificante.</li>
		<li>Pulire una gabbia e posizionare una piastra di calore sotto la biancheria da letto per topi alloggiamento dopo chirurgia.</li>
	</ol></li></ol> 2. Chirurgia passo-uno: palo legatura del rene di sinistra Nota: mantenere condizioni sterili durante l'intervento chirurgico. Coprire gli strumenti chirurgici sterilizzati nell'autoclave con un tampone sterile. Tenere più di un set di strumenti chirurgici in mano per più di un intervento chirurgico per evitare la contaminazione incrociata durante l'intervento chirurgico. Se gli strumenti devono essere utilizzati nuovamente, nel caso di interventi chirurgici multipli, disinfettare gli strumenti con soluzione di betadine ed etanolo al 70% e quindi sterilizzare in uno sterilizzatore di perlina di vetro germinator per 5 min, disinfetta l'area operativa con etanolo al 70%. Indossare un abito, maschera (per coprire naso e bocca), PAC (per coprire la testa) e un paio di guanti sterili. Cambiare i guanti dopo ogni intervento chirurgico.
<ol><li>Lavare e disinfettare le mani e indossare guanti chirurgici sterili. Indossare un berretto in testa e una maschera.</li>
	<li>Disinfettare la tabella con alcool al 70%. Applicare l'unguento oculare lubrificante in entrambi gli occhi del mouse per prevenire la secchezza dell'occhio mentre sotto anestesia.</li>
	<li>Posizionare il mouse in una camera d'induzione di un sistema di vaporizzatore isoflurano e inducono anestesia con una miscela di 2,5% isoflurane con ossigeno al 100% (0,8 - 1,2 L/min) per un minimo di 1-2 
	Nota: L'efficacia dell'anestesia è stato determinato dall'assenza del riflesso di dolore suscitato pizzicando la coda, così come dall'assenza del riflesso palpebrale toccando la palpebra.</li>
	<li>Iniettare penicillina (40.000 unità/kg di peso corporeo, IM) e buprenorfina (0,02 mg/kg peso corporeo, SC) per prevenire l'infezione e dolore durante l'intervento chirurgico.</li>
	<li>Posizionare il mouse su un tappetino riscaldante (inizialmente fissato a 42 ° C) con un termometro rettale per mantenere e monitorare la temperatura corporea intorno ai 37 ° C durante la procedura. Posizionare il mouse naso nel cono di naso e ventilare con una miscela di 0.8-1.2% isoflurane con ossigeno 100% (0,8-1,2 L/min) durante l'intervento chirurgico.</li>
	<li>Posizionare il mouse sul lato destro. Radersi i capelli del campo operatorio con un tagliatore di capelli e poi rimuovere con la crema depilatoria. Disinfettare il sito con soluzione polyhydroxydine (contenente 1% di iodio), seguito da etanolo al 70%. Allineare la biancheria in autoclave chirurgico sulla zona chirurgica.</li>
	<li>Fare un'incisione lombare di cm ~1.0 e separare il muscolo e la fascia per esporre il rene di sinistra utilizzando il bisturi e pinze ( Figura 1a).</li>
	<li>Estrarre il rene di sinistra molto delicatamente, tirando il grasso perirenale con piccolo forcipe smussato. Nel processo, in modo da non disturbare la ghiandola surrenale, spostare la ghiandola surrenale verso l'alto dal rene con forcipe.</li>
	<li>Using forcipe smussato, stuzzicare delicatamente il tessuto connettivo e la ghiandola surrenale dall'estremità superiore del rene verso il piloro centrale del rene dove vasi sanguigni entrare ed uscire. Identificare e isolare l'uretere. 
	Nota: L'uretere si trova intorno alla metà inferiore del rene incorporato nel tessuto connettivo e chiaramente visibile sotto la luce.</li>
	<li>Delicatamente afferrare il tessuto connettivo e separata dal tessuto renale per garantire che l'uretere non è legato.</li>
	<li>Prima polar legature, utilizzare un righello sterile per identificare la parte superiore ed inferiore di 1/3 del rene. Il rene del topo è solitamente intorno 1.25-1.5 cm long.</li>
	<li>Legano usando una seta 3-0 suturare stringa e con adeguata forza, circa 0,4 cm dalla parte superiore verso la metà del piloro e allo stesso modo, 0,4 cm dalla parte inferiore verso il piloro ( Figura 1a, punteggiato linee).</li>
	<li>Dopo legatura entrambi i poli ( Figura 1b), consentire un periodo di osservazione di 2 min per assicurarsi che non esiste nessun sanguinamento. 
	Nota: Nel processo, è molto importante evitare la legatura del surrene, dell'arteria renale e dell'uretere. Se è legato l'uretere di sinistra, il mouse morirà dopo la rimozione del rene di destra nella chirurgia passo-due. La forza di legatura può limitare il flusso di sangue ai poli senza causare sanguinamento intra-renale. Entro 1-2 min dopo la legatura, i polacchi sono scoloriti a causa del limite di flusso sanguigno ai poli.</li>
	<li>Spingere indietro il rene di sinistra al posto originale. Chiudere il muscolo e la pelle con stringhe di sutura seta 4-0 e 3-0, rispettivamente. Applicare pomata antibiotica per l'area chirurgica per una migliore ripresa e disinfezione.</li>
	<li>Dopo la legatura, casa del mouse separatamente in una gabbia con una lampada di calore sopra la gabbia affinché la zona di biancheria da letto è vicino a 37 ° C (controllato con un termometro), prima di mettere gli animali in gabbie individuali. 
	Nota: Controllare il mouse fino a quando ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere decubito sternale.</li>
	<li>Consentire un facile accesso all'acqua e cibo durante il recupero. Amministrare la penicillina e buprenorfina ogni 12 h per il primo post-ambulatorio 3 giorni prevenire l'infezione e dolore. 
	Nota: Il mouse dovrebbe recuperare dal trauma dell'intervento chirurgico entro 2-3 giorni e dovrebbe essere tornato alla normale mangiare, bere e in movimento. In questo momento, casa del mouse individualmente per il pieno recupero. Devono essere monitorati i seguenti: bere, mangiare, camminare modelli, andatura goffa, gobba, scarico oculare e/o nasale e comportamento aggressivo. Eutanasia il mouse se Mostra segni di grippaggio, coma, infezione incurabile, difficoltà a camminare, perdita di andatura, in grado di mangiare e bere e perdita di più di 15% pre-operazione peso.</li>
</ol> 3. Passaggio-due chirurgia: rimozione del rene di destra <ol><li>sette giorni più tardi, esporre il rene di destra come descritto per il rene di sinistra nei passaggi 2.1 a 2.10, tranne posizionare il mouse sul suo lato sinistro.</li>
	<li>Inserire il rene di destra sulla biancheria e deselezionare circostante grasso e tessuto connettivo con forcipe smussato.</li>
	<li>Identificare l'arteria renale e la vena e quindi posizionare due legature (seta 3-0) ciascuna con un singolo nodo sciolto intorno ai vasi. Delicatamente prendere in giro il tessuto connettivo e surrenale ghiandola dall'estremità superiore del rene verso il piloro centrale del rene usando il forcipe smussato. Delicatamente spostare l'uretere dall'estremità inferiore e legare tutti i vasi insieme (seta 3-0) senza provocare sanguinamento.</li>
	<li>Spostare i due nodi di legatura sciolti lungo i vasi. Uno verso il lato dell'aorta addominale e l'altra verso il lato del rene.</li>
	<li>Prima legare il nodo di legatura (verso il lato dell'aorta addominale) con doppi nodi; un solido nodo cambierà il colore del rene di destra. Legare il nodo di legatura (verso il lato del rene) con doppi nodi. Lasciare spazio sufficiente tra questi due doppi nodi in modo da tagliare i vasi tra i due nodi senza tagliare i nodi legature.</li>
	<li>Tagliare i vasi renali tra i due nodi e rimuovere il rene di destra. Controllare i possibili emorragie dei vasi renali.</li>
	<li>Asciugare il rene di destra con garza sterile e pesare it.</li>
	<li>Chiudere l'incisione del muscolo con stringa di sutura seta 4-0 e quindi chiudere l'incisione cutanea con stringa di sutura seta 3-0.</li>
	<li>Casa del mouse separatamente in una gabbia pulita solitario con una lampada di calore sopra la gabbia (punto 2.15) con facile accesso all'acqua e cibo per almeno 24 h di recupero. Amministrare la penicillina e buprenorfina ogni 12 h per 3 giorni per prevenire l'infezione e dolore. 
	Nota: Il mouse dovrebbe recuperare dal trauma dell'intervento chirurgico entro 2-3 giorni e dovrebbe essere tornato alla normale mangiare, bere e in movimento.</li>
	<li>Dopo la chirurgia, monitorare i topi due volte al giorno per tre giorni e poi una volta al giorno per tutta la durata dell'esperimento. Seguire le procedure di monitoraggio e trattamento post-chirurgiche descritte nel passaggio 2.16.</li>
</ol> 4. Sham chirurgia <ol><li>per la chirurgia di sham, eseguire le stesse procedure di chirurgia, compresa l'esposizione del rene, la dissezione del tessuto e la chiusura della ferita, ma senza la legatura di palo del rene di sinistra o la rimozione del rene di destra.</li></ol>
 5. valutazione della cardiomiopatia uremica sperimentale <ol><li>un giorno prima del sacrificio, eseguire un ecocardiogramma transtoracico e catturare immagini 18. 
	Nota: Qui, l'ecocardiografia transtoracica è stata effettuata con un termometro rettale e tabella di gestione del mouse. Le immagini ecocardiografiche sono state acquisite utilizzando un 18-38 MHz trasduttore di frequenza di funzionamento collegato a un sistema di imaging. Spessore della parete relativa (RWT), indice di performance miocardica (MPI) e indice di massa ventricolo sinistro (orientamento) sono stati calcolati come descritto 18.</li>
	<li>Al momento del sacrificio, misurare il peso del corpo. Misurare l'ematocrito (HCT) con una centrifuga HCT secondo produttore &#39; s istruzioni. Preparare i campioni di plasma utilizzando provette sensibilizzate con eparina mediante centrifugazione i campioni di sangue per 10 min a 1.500 x g a 4 ° C in una centrifuga refrigerata da tavolo. Misurare la cistatina C, creatinina e BUN utilizzando kit seguendo il produttore &#39; s istruzioni. Eseguire le misurazioni in duplicato.</li>
	<li>Alla fine dell'esperimento, anestetizzare i topi con ketamina (90 mg/kg, IP) e xylaxine (10 mg/kg, IP) e sacrificio dal thoracotomy. Misurare il peso del cuore dopo averlo tolto dal petto. Preparare cardiaco (LV) e degli omogeneati del rene, come pure la determinazione di collagene di tipo 1 (COL-1), la fosforilazione di c-Src e proteina carbonilazione, come descritto prima 18 , 19.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Sarnak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+Disease+as+a+Risk+Factor+for+Development+of+Cardiovascular+Disease:+A+Statement+From+the+American+Heart+Association+Councils+on+Kidney+in+Cardiovascular+Disease,+High+Blood+Pressure+Research,+Clinical+Cardiology,+and+Epidemiology+and+Prevention.">Kidney Disease as a Risk Factor for Development of Cardiovascular Disease: A Statement From the American Heart Association Councils on Kidney in Cardiovascular Disease, High Blood Pressure Research, Clinical Cardiology, and Epidemiology and Prevention.</a> Circulation. 108 (17), 2154-2169 (2003).</li><li>Levey, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+the+epidemic+of+cardiovascular+disease+in+chronic+renal+disease:+what+do+we+know?+What+do+we+need+to+learn?+Where+do+we+go+from+here?+National+Kidney+Foundation+Task+Force+on+Cardiovascular+Disease.">Controlling the epidemic of cardiovascular disease in chronic renal disease: what do we know? What do we need to learn? Where do we go from here? National Kidney Foundation Task Force on Cardiovascular Disease.</a> Am J Kidney Dis. 32 (5), 853-906 (1998).</li><li>Schiffrin, E. L., Lipman, M. L., Mann, J. F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Kidney+Disease.">Chronic Kidney Disease.</a> Effects on the Cardiovascular System. 116 (1), 85-97 (2007).</li><li>Foley, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+echocardiographic+disease+in+patients+starting+end-stage+renal+disease+therapy.">Clinical and echocardiographic disease in patients starting end-stage renal disease therapy.</a> Kidney Int. 47 (1), 186-192 (1995).</li><li>Foley, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prognostic+importance+of+left+ventricular+geometry+in+uremic+cardiomyopathy.">The prognostic importance of left ventricular geometry in uremic cardiomyopathy.</a> J Am Soc Nephrol. 5 (12), 2024-2031 (1995).</li><li>Alhaj, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uremic+cardiomyopathy:+an+underdiagnosed+disease.">Uremic cardiomyopathy: an underdiagnosed disease.</a> Congest Heart Fail. 19 (4), 40-45 (2013).</li><li>Gulati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+fibrosis+with+mortality+and+sudden+cardiac+death+in+patients+with+nonischemic+dilated+cardiomyopathy.">Association of fibrosis with mortality and sudden cardiac death in patients with nonischemic dilated cardiomyopathy.</a> JAMA. 309 (9), 896-908 (2013).</li><li>London, G. M., Parfrey, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+disease+in+chronic+uremia:+pathogenesis.">Cardiac disease in chronic uremia: pathogenesis.</a> Adv Ren Replace Ther. 4 (3), 194-211 (1997).</li><li>Mohmand, B., Malhotra, D. K., Shapiro, J. 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M., Himmelfarb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tipping+the+redox+balance+of+oxidative+stress+in+fibrogenic+pathways+in+chronic+kidney+disease.">Tipping the redox balance of oxidative stress in fibrogenic pathways in chronic kidney disease.</a> Pediatr Nephrol. 24 (12), 2309-2319 (2009).</li><li>Himmelfarb, J., Stenvinkel, P., Ikizler, T. A., Hakim, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elephant+in+uremia:+oxidant+stress+as+a+unifying+concept+of+cardiovascular+disease+in+uremia.">The elephant in uremia: oxidant stress as a unifying concept of cardiovascular disease in uremia.</a> Kidney Int. 62 (5), 1524-1538 (2002).</li><li>Becker, B. N., Himmelfarb, J., Henrich, W. L., Hakim, R. 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T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+against+marinobufagenin+reverses+cardiac+fibrosis+in+rats+with+chronic+renal+failure.">Monoclonal antibody against marinobufagenin reverses cardiac fibrosis in rats with chronic renal failure.</a> Am J Hypertens. 25 (6), 690-696 (2012).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spironolactone+attenuates+experimental+uremic+cardiomyopathy+by+antagonizing+marinobufagenin.">Spironolactone attenuates experimental uremic cardiomyopathy by antagonizing marinobufagenin.</a> Hypertension. 54 (6), 1313-1320 (2009).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+of+Na/K-ATPase+Mediated+Oxidant+Amplification+with+pNaKtide+Ameliorates+Experimental+Uremic+Cardiomyopathy.">Attenuation of Na/K-ATPase Mediated Oxidant Amplification with pNaKtide Ameliorates Experimental Uremic Cardiomyopathy.</a> Sci Rep. 6, 34592 (2016).</li><li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+reactive+oxygen+species+in+a+feed-forward+mechanism+of+Na/K-ATPase-mediated+signaling+transduction.">Involvement of reactive oxygen species in a feed-forward mechanism of Na/K-ATPase-mediated signaling transduction.</a> J Biol Chem. 288 (47), 34249-34258 (2013).</li><li>Leelahavanichkul, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+overcomes+strain-dependent+resistance+of+rapid+CKD+progression+in+a+new+remnant+kidney+mouse+model.">Angiotensin II overcomes strain-dependent resistance of rapid CKD progression in a new remnant kidney mouse model.</a> Kidney Int. 78 (11), 1136-1153 (2010).</li><li>Ma, L. J., Fogo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+of+robust+induction+of+glomerulosclerosis+in+mice:+importance+of+genetic+background.">Model of robust induction of glomerulosclerosis in mice: importance of genetic background.</a> Kidney Int. 64 (1), 350-355 (2003).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Il ratto 5/6th PNx modello è stato ampiamente utilizzato per lo studio di CKD. A causa della dimensione molto più piccola del rene nel topo, la legatura dell'arteria classica e la resezione di palo sono molto impegnativi in modelli murini con possibili alti tassi di mortalità e la perdita di sangue sanguinamento inaspettato.
Abbiamo adottato un modello di topo PNx con legatura di palo per superare la perdita di sangue/sangue. Questo modello di PNx richiede meno tempo con il tasso...

CKD, noto anche come insufficienza renale cronica, è una perdita progressiva della funzione del rene nel tempo che si sviluppa poi in insufficienza renale permanente. CKD, dagli Stati di malattia renale fase precoce di malattia renale di stadio finale (ESRD), è un grande fattore di rischio per eventi cardiovascolari e mortalità e progressivamente si sviluppa al fenotipo clinico chiamato "cardiomiopatia uremica"1, 2,3. La cardiomiopatia uremica nei pazienti con CKD o ESRD è associata con le anomalie cardiovascolari, principalmente causate da sovraccarico di pressione ventricolare di sinistra (LV) e/o volume, portando a ipertrofia (LVH), la dilatazione di LV e la disfunzione sistolica LV4 ,5,6. Fibrosi cardiaca è un altro processo patologico comune di cardiomiopatia uremica che riduce la compliance cardiaca conseguente disfunzione diastolica di LV. La fibrosi cardiaca severa può portare alla morte cardiaca improvvisa, anche in quelli senza sintomi cardiaci7.
Il 5/6th PNx è un modello animale di CKD comunemente utilizzato per gli studi sugli animali che coinvolgono l'indebolimento renale, cardiomiopatia uremica e ipertensione. PNx è raggiunto tramite ablazione del parenchima renale 5/6. Modello del ratto è stato inizialmente sviluppato con i due più comuni protocolli impiegati essendo la resezione chirurgica o infarto. Il modello di PNx ratto è un modello estremamente utile per studiare la cardiomiopatia uremica con sostanziali aumenti nella pressione sanguigna, l'ipertrofia cardiaca e alterata funzione diastolica. Più tardi, i modelli murini di PNx, operati con le tecniche simili come modello del ratto, sono stati sviluppati grazie alla vasta disponibilità e facilità di effettuare manipolazioni genetiche del sistema del mouse.
È ben documentato che lo stress ossidativo sistemico è una caratteristica costante di entrambi cardiomiopatia uremica clinica e sperimentale8,9. Inoltre, lo sforzo dell'ossidante contribuisce alla sindrome uremica10e svolge un ruolo critico nella patogenesi delle anomalie cardiache visto in cardiomiopatia uremica11,12,13. A questo punto, abbiamo dimostrato che il roditore 5/6th PNx modello causa le caratteristiche fisiologiche, morfologiche e biochimiche di cardiomiopatia uremica14,15,16, 17. nel modello del topo di PNx descritto qui, topi PNx-azionati sviluppato forte stress ossidativo, almeno parzialmente mediato di Na/K-ATPasi funzione, che è fondamentale in cardiomiopatia uremica sperimentale PNx-mediata di segnalazione. Attenuazione di Na/K-atpasi di segnalazione non solo riduce l'amplificazione ossidativo, ma migliora anche le modifiche fenotipiche in cardiomiopatia uremica sperimentale PNx-mediata18.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="873">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Iris Scissors, 11.5 cm, Straight</td>
			<td style="width:235px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:172px;">501758</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">WPI Swiss Tweezers #5 11 cm, 0.1x0.06 mm Tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:299px;">Jewelers #5 Forceps, 11cm, Straight, Titanium</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>555227F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Iris Forceps, 10cm, Straight, Serrated</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tweezers #3, 11cm, 0.2x0.4mm Tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Medesy Iris 4.5&#34; Curved Scissors, Stainless Steel</td>
			<td>Net23</td>
			<td>3512</td>
			<td>www.Net32.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dr. Slick Iris Scissors; 3.5&#34;</td>
			<td>Avid Max</td>
			<td style="width:172px;">220-1-965-IrisScsrs-P&#160;</td>
			<td>www.Avid Max.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Miltex Iris Scissors 4 1/8&#34; Curved</td>
			<td>4mdmedical</td>
			<td style="width:172px;">V95-306</td>
			<td>www.4mdmedical.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5&#34; Hemostat clap, curved jaw</td>
			<td>PJTool</td>
			<td>4355</td>
			<td>www.pjtool.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">sklar Knapp Iris scissors, straight and sharp/blunt 4&#34;</td>
			<td>Medical Device depot</td>
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		</tr>
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		</tr>
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		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse 5/6th nephrectomy model that induces experimental uremic cardiomyopathy

Malattia renale cronica (CKD) è un grande fattore di rischio per eventi cardiovascolari e mortalità e progressivamente si sviluppa al fenotipo clinico chiamato "cardiomiopatia uremica". Descriviamo qui un modello sperimentale di topo CKD, denominato 5/6th il nephrectomy parziale (PNx) con legatura di palo, che ha sviluppato la cardiomiopatia uremica alla post-chirurgia quattro settimane. Questo modello di PNx è stato effettuato da un intervento chirurgico in due fasi. In chirurgia passo-uno, entrambi i poli del rene di sinistra erano legati. Nella chirurgia di passaggio-due, che è stata effettuata 7 giorni dopo l'intervento di passo-uno, è stato rimosso il rene di destra. Per la chirurgia di falsità, le stesse procedure di chirurgia sono state effettuate ma senza poli legatura del rene di sinistra o alla rimozione del rene di destra. Le procedure chirurgiche sono più facili e meno dispendio di tempo, rispetto ad altri metodi. Tuttavia, il residuo massa renale funzionale non è controllata come facilmente come la legatura dell'arteria renale. Quattro settimane dopo la chirurgia, in confronto ai topi falsità-azionati, i topi di PNx sviluppato fibrosi cardiaca, insufficienza renale, l'anemia, ipertrofia cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore.

I dati hanno indicato che questo modificato 5/6th PNx tramite la legatura di palo è un modello semplice ed efficace per studiare la cardiomiopatia uremica. Alla quattro settimane post-chirurgia, questo PNx modello presenta alterata funzione renale, l'anemia, l'ipertrofia cardiaca, fibrosi cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore. I risultati sono riassunti qui di seguito.
Alla pos...

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A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

Questo manoscritto fornisce una procedura chirurgica in due passaggi dettagliati per eseguire nefrectomia parzialeth da mouse 5/6 (PNx) con legatura di palo. Quattro settimane dopo la chirurgia, in confronto ai topi falsità-azionati, i topi di PNx sviluppato fibrosi cardiaca, insufficienza renale, l'anemia, ipertrofia cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore.

Un Mouse 5/6th Nephrectomy modello che induce cardiomiopatia uremica sperimentale

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

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Research

JoVE Journal

Biology

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

20.2K Views.  Marshall University. Questo manoscritto fornisce una procedura chirurgica in due passaggi dettagliati per eseguire nefrectomia parzialeth da mouse 5/6 (PNx) con legatura di palo. Quattro settimane dopo la chirurgia, in confronto ai topi falsità-azionati, i topi di PNx sviluppato fibrosi cardiaca, insufficienza renale, l'anemia, ipertrofia cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore.

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In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

Imaging in vivo e trattamenti terapeutici in un modello di mouse ortotopico di cancro ovarico

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Ricerca

Biologia

Oct4GiP Reporter Assay to Study Genes that Regulate Mouse Embryonic Stem Cell Maintenance and Self-renewal

Pluripotency and self-renewal are two defining characteristics of embryonic stem cells (ES cells). Understanding the underlying molecular mechanism will greatly facilitate the use of ES cells for developmental biology studies, disease modeling, drug discovery, and regenerative medicine (reviewed in 1,2).
To expedite the identification and characterization of novel regulators of ES cell maintenance and self-renewal, we developed a fluorescence reporter-based assay to quantitatively measure the self-renewal status in mouse ES cells using the Oct4GiP cells 3. The Oct4GiP cells express the green fluorescent protein (GFP) under the control of the Oct4 gene promoter region 4,5. Oct4 is required for ES cell self-renewal, and is highly expressed in ES cells and quickly down-regulated during differentiation 6,7. As a result, GFP expression and fluorescence in the reporter cells correlates faithfully with the ES cell identity 5, and fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis can be used to closely monitor the self-renewal status of the cells at the single cell level 3,8.
Coupled with RNAi, the Oct4GiP reporter assay can be used to quickly identify and study regulators of ES cell maintenance and self-renewal 3,8. Compared to other methods for assaying self-renewal, it is more convenient, sensitive, quantitative, and of lower cost. It can be carried out in 96- or 384-well plates for large-scale studies such as high-throughput screens or genetic epistasis analysis. Finally, by using other lineage-specific reporter ES cell lines, the assay we describe here can also be modified to study fate specification during ES cell differentiation.

We describe a fluorescence reporter assay to quickly identify and characterize genes that regulate mouse embryonic stem cell maintenance and self-renewal.

Oct4GiP Reporter Assay per studiare i geni che regolano il mouse sulle cellule staminali embrionali di manutenzione e di auto-rinnovamento

Pluripotency and self-renewal are two defining characteristics of embryonic stem cells (ES cells). Understanding the underlying molecular mechanism will ...

An Analytical Tool that Quantifies Cellular Morphology Changes from Three-dimensional Fluorescence Images

The most common software analysis tools available for measuring fluorescence images are for two-dimensional (2D) data that rely on manual settings for inclusion and exclusion of data points, and computer-aided pattern recognition to support the interpretation and findings of the analysis. It has become increasingly important to be able to measure fluorescence images constructed from three-dimensional (3D) datasets in order to be able to capture the complexity of cellular dynamics and understand the basis of cellular plasticity within biological systems. Sophisticated microscopy instruments have permitted the visualization of 3D fluorescence images through the acquisition of multispectral fluorescence images and powerful analytical software that reconstructs the images from confocal stacks that then provide a 3D representation of the collected 2D images. Advanced design-based stereology methods have progressed from the approximation and assumptions of the original model-based stereology1 even in complex tissue sections2. Despite these scientific advances in microscopy, a need remains for an automated analytic method that fully exploits the intrinsic 3D data to allow for the analysis and quantification of the complex changes in cell morphology, protein localization and receptor trafficking. 
Current techniques available to quantify fluorescence images include Meta-Morph (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) and Image J (NIH) which provide manual analysis. Imaris (Andor Technology, Belfast, Northern Ireland) software provides the feature MeasurementPro, which allows the manual creation of measurement points that can be placed in a volume image or drawn on a series of 2D slices to create a 3D object. This method is useful for single-click point measurements to measure a line distance between two objects or to create a polygon that encloses a region of interest, but it is difficult to apply to complex cellular network structures. Filament Tracer (Andor) allows automatic detection of the 3D neuronal filament-like however, this module has been developed to measure defined structures such as neurons, which are comprised of dendrites, axons and spines (tree-like structure). This module has been ingeniously utilized to make morphological measurements to non-neuronal cells3, however, the output data provide information of an extended cellular network by using a software that depends on a defined cell shape rather than being an amorphous-shaped cellular model. To overcome the issue of analyzing amorphous-shaped cells and making the software more suitable to a biological application, Imaris developed Imaris Cell. This was a scientific project with the Eidgen&ouml;ssische Technische Hochschule, which has been developed to calculate the relationship between cells and organelles. While the software enables the detection of biological constraints, by forcing one nucleus per cell and using cell membranes to segment cells, it cannot be utilized to analyze fluorescence data that are not continuous because ideally it builds cell surface without void spaces. To our knowledge, at present no user-modifiable automated approach that provides morphometric information from 3D fluorescence images has been developed that achieves cellular spatial information of an undefined shape (Figure 1). 
We have developed an analytical platform using the Imaris core software module and Imaris XT interfaced to MATLAB (Mat Works, Inc.). These tools allow the 3D measurement of cells without a pre-defined shape and with inconsistent fluorescence network components. Furthermore, this method will allow researchers who have extended expertise in biological systems, but not familiarity to computer applications, to perform quantification of morphological changes in cell dynamics.

We developed a software platform that utilizes Imaris Neuroscience, ImarisXT and MATLAB to measure the changes in morphology of an undefined shape taken from three-dimensional confocal fluorescence of single cells. This novel approach can be used to quantify changes in cell shape following receptor activation and therefore represents a possible additional tool for drug discovery.

Uno strumento di analisi che quantifica Modifiche morfologia cellulare dalle immagini a fluorescenza tridimensionali

The most common software analysis tools available for measuring fluorescence images are for two-dimensional (2D) data that rely on manual settings for ...

Strategies for Tracking Anastasis, A Cell Survival Phenomenon that Reverses Apoptosis

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) refers to the recovery of dying cells. Before these cells recover, they have passed through important checkpoints of apoptosis, including mitochondrial fragmentation, release of mitochondrial cytochrome c into the cytosol, activation of caspases, chromatin condensation, DNA damage, nuclear fragmentation, plasma membrane blebbing, cell shrinkage, cell surface exposure of phosphatidylserine, and formation of apoptotic bodies. Anastasis can occur when apoptotic stimuli are removed prior to death, thereby allowing dying cells to reverse apoptosis and potentially other death mechanisms. Therefore, anastasis appears to involve physiological healing processes that could also sustain damaged cells inappropriately. The functions and mechanisms of anastasis are still unclear, hampered in part by the limited tools for detecting past events after the recovery of apparently healthy cells. Strategies to detect anastasis will enable studies of the physiological mechanisms, the hazards of undead cells in disease pathology, and potential therapeutics to modulate anastasis. Here, we describe effective strategies using live cell microscopy and a mammalian caspase biosensor&#160;for identifying and tracking anastasis in mammalian cells.

The term anastasis refers to the phenomenon in which dying cells reverse a cell suicide process at a late stage, repair themselves, and ultimately survive. Here we demonstrate protocols for detecting and tracking cells that undergo anastasis.

Strategie per l&#39;inseguimento Anastasis, una cellula di sopravvivenza fenomeno che Inverte Apoptosis

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) refers to the recovery of dying cells. Before these cells recover, they have passed through important ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

Trans-inner Cell Mass iniezione delle cellule staminali embrionali porta a tassi più elevati di chimerismo

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

Un modello murino di ostruzione intestinale parziale

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Purification of Platelets from Mouse Blood

Platelets are purified from whole blood to study their functional properties, which should be free from red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), and plasma proteins. We describe here purification of platelets from mouse blood using three-fold more iohexol gradient medium relative to blood sample volume and centrifugation in a swinging bucket rotor at 400 x g for 20 min at 20 &#176;C. The recovery/yield of the purified platelets were 18.2-38.5%, and the purified platelets were in a resting state, which did not contain any significant number of RBC and WBC. The purified platelets treated with thrombin showed up to 93% activation, indicating their viability. We confirmed that the purified platelets are sufficiently pure using flow cytometric and microscopic evaluation. These platelets can be used for gene expression, activation, granule release, aggregation, and adhesion assays. This method can be used for purification of platelets from the blood of other species as well.

Here, mouse blood was collected in the presence of an anti-coagulant. The platelets were purified by iohexol gradient medium using low speed centrifugation. The platelets were activated with thrombin to investigate if they were viable. The quality of the purified platelets was analyzed by flow cytometry and microscopy.

Purificazione delle piastrine dal sangue del topo

Platelets are purified from whole blood to study their functional properties, which should be free from red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), ...

A Laser Capture Microdissection Protocol That Yields High Quality RNA from Fresh-frozen Mouse Bones

RNA yield and integrity are decisive for RNA analysis. However, it is often technically challenging to maintain RNA integrity throughout the entire laser capture microdissection (LCM) procedure. Since LCM studies work with low amounts of material, concerns about limited RNA yields are also important. Therefore, an LCM protocol was developed to obtain sufficient quantity of high-quality RNA for gene expression analysis in bone cells. The effect of staining protocol, thickness of cryosections, microdissected tissue quantity, RNA extraction kit, and LCM system used on RNA yield and integrity obtained from microdissected bone cells was evaluated. Eight-&#181;m-thick frozen bone sections were made using an adhesive film and stained using a rapid protocol for a commercial LCM stain. The sample was sandwiched between a polyethylene terephthalate (PET) membrane and the adhesive film. An LCM system that uses gravity for sample collection and a column-based RNA extraction method were used to obtain high quality RNAs of sufficient yield. The current study focusses on mouse femur sections. However, the LCM protocol reported here can be used to study in situ gene expression in cells of any hard tissue in both physiological conditions and disease processes.

A laser capture microdissection (LCM) protocol was developed to obtain sufficient quantity of high-quality RNA for gene expression analysis in bone cells. The current study focusses on mouse femur sections. However, the LCM protocol reported here can be used to study gene expression in cells of any hard tissue.

Un protocollo di microdissezione di cattura laser che produce RNA di alta qualità da ossa di mouse fresh-congelate

RNA yield and integrity are decisive for RNA analysis. However, it is often technically challenging to maintain RNA integrity throughout the entire laser ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Analisi della spettrometria di massa per identificare l'ubiquilazione del CENP-A con tag EYFP (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding the pathological processes and evaluating new drugs. Here, we introduced a surgically induced lumbar spine instability (LSI) mouse model that develops IDD starting from 1 week post operation. In detail, the mouse under anesthesia was operated by low back skin incision, L3&#8211;L5 spinous processes exposure, detachment of paraspinous muscles, resection of processes and ligaments, and skin closure. L4&#8211;L5 IVDs were chosen for the observation. The LSI model develops lumbar IDD by porosity and hypertrophy in endplates at an early stage, decrease in intervertebral disc volume, shrinkage in nucleus pulposus at an intermediate stage, and bone loss in lumbar vertebrae (L5) at a later stage. The LSI mouse model has the advantages of strong operability, no requirement of special equipment, reproducibility, inexpensive, and relatively short period of IDD development. However, LSI operation is still a trauma that causes inflammation within the first week post operation. Thus, this animal model is suitable for study of lumbar IDD.

We developed a lumbar intervertebral disc degeneration mouse model by resection of L3&#8211;L5 spinous processes along with supra- and inter-spinous ligaments and detachment of paraspinous muscles.

Un modello di topo di instabilità della colonna lombare

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...