Diese Arbeit wurde von NIH R15 1R15DK106666-01A1 (, J. Liu) und NIH RO1 HL071556 (, J.I Shapiro) unterstützt.

alle Tierpflege und Experimente wurden von der Marshall University institutionelle Pflege der Tiere und Nutzung Committee (IACUC) gemäß dem National Institute of Health (NIH)-Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren genehmigt. Männliche C57BL/6 Mäusen (10-12 Wochen alt) untergebracht waren, in ein Erreger frei Tierstation in bestimmten Zimmern ausgestattet mit Käfigen, die gereinigte Luft unter einer 12 h hell/dunkel-Zyklus zu liefern. Nahrung und Wasser waren mitgelieferten Ad Libitum.
 1. Vorbereitung der Operation Hinweis: die chirurgische Instrumente und Materialien stammen aus verschiedenen Quellen, die nicht speziell für Chirurgie Operationen. Instrumente und Materialien aus anderen Quellen können auch für den gleichen Zweck verwendet werden. Siehe die Tabelle der Materialien für eine Liste von chirurgischen Instrumenten.
<ol><li>Vorbereitung auf die Operation <ol><li>Ort innerhalb der Reichweite der Betrieb folgende Tabelle: Erwärmung Pad, Halogenlampe, Sauerstofftank und Isofluran Tank, Verdampfer Isoflurane, Haarschneider, Haarentfernung Creme, Waagen, sterilisiert Satz, sterilisierten chirurgischen Leinen, Wattestäbchen, 70 % Alkohol, Polyhydroxydine Lösung (1 % jodhaltigen), 0,9 % NaCl-Lösung, 1 mL Spritzen und Nadeln (30 G), 3: 0 und 4: 0 Seide Nahtmaterial, Buprenorphin und Penicillin, antibiotische Salbe, Betrieb und Schmierstoff Augensalbe.</li>
		<li>Reinigen Sie einen Käfig und setzen ein Wärmekissen unter die Einstreu für Mäuse Gehäuse nach der Operation.</li>
	</ol></li></ol> 2. Schritt eine Operation: Pole Ligatur der linken Niere Hinweis: sterile Bedingungen während der Operation zu erhalten. Decken Sie die autoklaviert chirurgische Instrumente mit einem sterilen Pad. Halten Sie mehr als einen Satz von chirurgischen Instrumenten in der hand für mehr als eine Operation, um Kreuzkontaminationen während der Operation zu verhindern. Wenn die Instrumente wieder verwendet werden müssen, bei mehreren Operationen Desinfektion von Instrumenten mit Betadine Lösung und 70 % Ethanol und dann in einem Germinator Glas Bead Sterilisator für 5 min. im OP-Bereich mit 70 % Ethanol desinfizieren sterilisieren. Eine Kleid zu tragen, Maske (zur Abdeckung Nase und Mund), Kappe (Kopfbedeckung), und ein paar sterile Handschuhe. Handschuhe nach jeder Operation ändern.
<ol><li>Waschen und desinfizieren der Hände und sterile OP-Handschuhe zu tragen. Tragen Sie einen Kopf Kappe und eine Maske.</li>
	<li>Desinfizieren Sie die Tabelle mit 70 % Alkohol. Beide Augen der Maus Augentrockenheit unter Narkose zu verhindern Schmiermittel Augensalbe zuweisen.</li>
	<li>Platzieren Sie den Mauszeiger in eine Kammer der Induktion eines Isofluran-Vaporizer-Systems und induzieren Anästhesie mit einer Mischung aus 2,5 % Isofluran mit 100 % Sauerstoff (0,8 - 1,2 L/min) für 1 – 2 min. 
	Hinweis: Die Wirksamkeit der Betäubung wurde bestimmt durch die Abwesenheit von Schmerz-Reflex ausgelöst durch Kneifen das Heck, sowie durch das Fehlen von palpebrale Reflex durch Berühren des Augenlids.</li>
	<li>Spritzen Penicillin (40.000 Einheit/kg-Körpergewicht, IM) und Buprenorphin (0,02 mg/kg Körpergewicht, SC), um Infektionen und Schmerzen während der Operation zu verhindern.</li>
	<li>Platzieren Sie den Mauszeiger auf eine wärmende Unterlage (anfänglich bei 42 ° C) mit einer rektalen Thermometer gewartet und überwacht die Körpertemperatur um 37 ° C während des Verfahrens. Platzieren Sie die Maus-Nase in die Bugnase und lüften Sie mit einer Mischung von 0,8-1,2 % Isofluran mit 100 % Sauerstoff (0,8-1,2 L/min) während der Operation.</li>
	<li>Platzieren Sie die Maus auf der rechten Seite. Rasieren Sie die Haare der OP-Bereich mit einem Haarschneider und dann mit der Enthaarungscreme entfernen. Desinfizieren Sie die Website mit Polyhydroxydine-Lösung (1 % jodhaltigen) gefolgt von 70 % Ethanol. Autoklaviert chirurgische Bettwäsche auf den OP-Bereich auszurichten.</li>
	<li>Einen ~1.0 cm lumbale Einschnitt machen und trennen Sie den Muskel und Faszie, die linke Niere mit Skalpell und Pinzette ( Abbildung 1a) verfügbar zu machen.</li>
	<li>Ziehen Sie aus der linken Niere sehr sanft auf das Tubulussystem Fett mit kleinen stumpfen Pinzette. In den Prozess, um nicht zu stören der Nebenniere, bewegen der Nebenniere nach oben aus der Niere, mit der Pinzette.</li>
	<li>Mit stumpfen Pinzette, sanft zu necken, des Bindegewebes und Nebenniere von überlegenen Ende der Niere in Richtung der mittleren Pylorus der Niere, wo Blutgefäße betreten und verlassen. Identifizieren und isolieren den Harnleiter. 
	Hinweis: Der Harnleiter liegt um die schlechtere Hälfte der Niere eingebettet in das Bindegewebe und deutlich sichtbar unter Licht.</li>
	<li>Sanft schnappen Sie sich das Bindegewebe und trennen von Nierengewebe um sicherzustellen, dass die Harnleiter nicht ligiert ist.</li>
	<li>Vor polar grundsätzlich mit einer sterilen Herrscher den oberen und unteren 1/3 Teil der Niere bestimmt werden. Die Mausniere ist in der Regel um 1,25-1,5 cm lang</li>
	<li>Ligate mit eine 3-0 Seide Zeichenfolge Naht und mit der richtigen Kraft, ca. 0,4 cm von der überlegenen Teil in der Mitte des Pylorus und ebenso 0,4 cm aus dem minderwertigen Teil in Richtung der Pylorus ( Abbildung 1a, punktiert Linien).</li>
	<li>Nach Ligation beide Pole ( Abbildung 1 b), ermöglichen eine Beobachtungszeit von 2 min um sicherzustellen, dass es keine Blutung gibt. 
	Hinweis: Dabei ist es sehr wichtig, Unterbindung der Nierenarterien, Nebenniere und Harnleiter zu vermeiden. Der linken Harnleiter ligiert ist, stirbt die Maus nach der Entfernung von der rechten Niere in der zwei-Schritt-Chirurgie. Die Ligatur Kraft kann Blutfluss zu den Polen einschränken, ohne dass Intra renale Blutungen. Innerhalb von 1-2 Minuten nach Ligatur, die Polen aufgrund der Begrenzung des Blutflusses zu den Polen verfärbt sind.</li>
	<li>Drücken Sie die linke Niere zurück an den ursprünglichen Ort. Schließen Sie Muskel und Haut mit 4: 0 und 3: 0 Seide Naht Saiten, bzw.. Antibiotische Salbe auf den OP-Bereich für eine bessere Erholung und Desinfektion anwenden.</li>
	<li>Nach Unterbindung, Haus die Maus einzeln in einem Käfig mit einer Wärmelampe über den Käfig so, dass die Betten in der Nähe von 37 ° C (mit einem Thermometer überwacht), befindet sich vor dem Einlegen der Tiere in einzelnen Käfigen. 
	Hinweis: Überwachen die Maus, bis es ausreichend Bewusstsein zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wiedererlangt hat.</li>
	<li>Ermöglichen einfachen Zugang zu Wasser und Nahrung während der Wiederherstellung. Verwaltung von Penicillin und Buprenorphin alle 12 h für die ersten 3 Tage nach der Operation, Infektion und Schmerzen zu verhindern. 
	Hinweis: Die Maus sollte innerhalb von 2-3 Tagen aus dem Trauma der Operation erholen und sollte wieder normal essen, trinken und bewegen. Zu diesem Zeitpunkt Haus der Maus individuell für vollständige Genesung. Folgendes muss überwacht werden: trinken, Essen, Wandern, Muster, unbeholfen Gang, Rundrücken, okuläre und/oder nasale Entladung und aggressives Verhalten. Die Maus einschläfern, wenn es Anzeichen einer Beschlagnahme, Koma, behandelbare Infektionen, Schwierigkeiten zeigt zu Fuß, Verlust des Gehens, nicht in der Lage zu essen und zu trinken, und Verlust von mehr als 15 % vor der Operation Gewicht.</li>
</ol> 3. Schritt zwei Operation: Entfernung der rechten Niere <ol><li>sieben Tage später, aussetzen die rechte Niere, wie bei der linken Niere Schritte 2.1 bis 2.10, außer die Maus auf der linken Seite zu platzieren.</li>
	<li>Legen Sie die rechte Niere auf die Wäsche und klare umgebenden Fett- und Bindegewebe mit stumpfen Pinzette.</li>
	<li>Identifizieren die renale Arterie und Vene, und legen Sie zwei Ligaturen (3: 0 Seide) jeweils mit einem einzelnen losen Knoten um die Gefäße. Sanft zu necken, des Bindegewebes und der Nebennieren Drüse von überlegenen Ende der Niere in Richtung der mittleren Pylorus der Niere mit stumpfen Pinzette. Sanft den Harnleiter vom unteren Ende zu verdrängen und binden alle Schiffe zusammen (3: 0 Seide) ohne Blutungen.</li>
	<li>Bewegen Sie die beiden losen Ligatur Knoten entlang der Gefäße. Eine in Richtung der Bauchschlagader-Seite und eine auf die Niere Seite.</li>
	<li>Zuerst binden Sie die Ligatur Knoten (in Richtung der Bauchschlagader Seite) mit Doppelknoten; ein fester Knoten ändert sich die Farbe der rechten Niere. Binden Sie den Knoten der Ligatur (zur Niere hin) mit Doppelknoten. Lassen Sie genug Raum zwischen diesen zwei Doppelknoten um die Schiffe zwischen den beiden Knoten ohne schneiden die Ligatur Knoten schneiden.</li>
	<li>Schneiden die renale Schiffe zwischen zwei Knoten und die rechte Niere zu entfernen. Überprüfen Sie auf mögliche Blutungen der renalen Schiffe.</li>
	<li>Trocknen die rechte Niere mit steriler Gaze und wiegen it.</li>
	<li>Schließen den Muskel-Schnitt mit 4: 0 Seide Naht Zeichenfolge und anschließend der Hautschnitt mit 3: 0 Seide Naht Zeichenfolge.</li>
	<li>Haus die Maus separat in einem sauberen einsame Käfig mit einer Wärmelampe über den Käfig (Schritt 2.15) mit einfachem Zugang zu Wasser und Nahrung für mindestens 24 Stunden zur Erholung. Verwaltung von Penicillin und Buprenorphin alle 12 h für 3 Tage, Infektionen und Schmerzen zu verhindern. 
	Hinweis: Die Maus sollte aus dem Trauma der Operation innerhalb von 2-3 Tagen zu erholen, und sollte zurück zu normal essen, trinken und bewegen.</li>
	<li>Nach der Operation überwachen die Mäuse zweimal täglich für drei Tage und dann einmal täglich für die Dauer des Experiments. Die postoperative Überwachung und Behandlung nachfolgend beschriebenen Schritt 2.16 folgen.</li>
</ol> 4. Sham Chirurgie <ol><li>für die Schein-Chirurgie, führen Sie die gleichen Eingriffe, einschließlich der Exposition der Niere, Dissektion der Gewebe und Wundverschluss, aber ohne die Pol-Ligatur der linken Niere oder Entfernung der rechten Niere.</li></ol>
 5. Auswertung der experimentellen urämischen Kardiomyopathie <ol><li>Opfer, am Vortag durchführen einer transthorakalen Echokardiographie und erfassen Bilder 18. 
	Hinweis: Hier wurde der transthorakalen Echokardiographie mit einer Maus Umgang mit Tisch und rektalen Thermometer durchgeführt. Die echokardiographischen Bilder wurden aufgenommen mit einer 18-38 MHz operative Frequenz Wandler ein bildgebendes System zugeordnet. Relative Wanddicke (RWT), myokardiale Performance-Index (MPI) und linken Ventrikel-mass-Index (LVMI) wurden berechnet, wie wir 18.</li>
	<li>Zur Zeit des Opfers, das Körpergewicht zu messen. Hämatokrit (HKT) mit einer Zentrifuge HCT gemäß Hersteller messen &#39; Anweisungen. Bereiten Sie die Plasmaproben mit Heparin-beschichtete Rohre durch Zentrifugieren der Blutproben für 10 min bei 1.500 x g bei 4 ° C in einer Tischplatte gekühlten Zentrifuge. Messen, Cystatin C, Kreatinin und BUN mit Anschluss an den Hersteller-Kits &#39; Anweisungen. Führen Sie die Messungen in zweifacher Ausfertigung.</li>
	<li>Am Ende des Experiments, die Mäuse mit Ketamin (90 mg/kg, IP) und Xylaxine (10 mg/kg, IP) zu betäuben und durch Thorakotomie zu opfern. Messen Sie die Herz-Gewicht nach der Entfernung der Brustkorbes. Herzstillstand (LV) sowie Nieren Homogenates und Bestimmung von Typ-1-Kollagen (COL-1), Phosphorylierung von c-Src und Protein Carbonylierung vorbereiten, wie beschrieben, 18 , 19.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Sarnak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+Disease+as+a+Risk+Factor+for+Development+of+Cardiovascular+Disease:+A+Statement+From+the+American+Heart+Association+Councils+on+Kidney+in+Cardiovascular+Disease,+High+Blood+Pressure+Research,+Clinical+Cardiology,+and+Epidemiology+and+Prevention.">Kidney Disease as a Risk Factor for Development of Cardiovascular Disease: A Statement From the American Heart Association Councils on Kidney in Cardiovascular Disease, High Blood Pressure Research, Clinical Cardiology, and Epidemiology and Prevention.</a> Circulation. 108 (17), 2154-2169 (2003).</li><li>Levey, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+the+epidemic+of+cardiovascular+disease+in+chronic+renal+disease:+what+do+we+know?+What+do+we+need+to+learn?+Where+do+we+go+from+here?+National+Kidney+Foundation+Task+Force+on+Cardiovascular+Disease.">Controlling the epidemic of cardiovascular disease in chronic renal disease: what do we know? What do we need to learn? Where do we go from here? National Kidney Foundation Task Force on Cardiovascular Disease.</a> Am J Kidney Dis. 32 (5), 853-906 (1998).</li><li>Schiffrin, E. L., Lipman, M. L., Mann, J. F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Kidney+Disease.">Chronic Kidney Disease.</a> Effects on the Cardiovascular System. 116 (1), 85-97 (2007).</li><li>Foley, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+echocardiographic+disease+in+patients+starting+end-stage+renal+disease+therapy.">Clinical and echocardiographic disease in patients starting end-stage renal disease therapy.</a> Kidney Int. 47 (1), 186-192 (1995).</li><li>Foley, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prognostic+importance+of+left+ventricular+geometry+in+uremic+cardiomyopathy.">The prognostic importance of left ventricular geometry in uremic cardiomyopathy.</a> J Am Soc Nephrol. 5 (12), 2024-2031 (1995).</li><li>Alhaj, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uremic+cardiomyopathy:+an+underdiagnosed+disease.">Uremic cardiomyopathy: an underdiagnosed disease.</a> Congest Heart Fail. 19 (4), 40-45 (2013).</li><li>Gulati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+fibrosis+with+mortality+and+sudden+cardiac+death+in+patients+with+nonischemic+dilated+cardiomyopathy.">Association of fibrosis with mortality and sudden cardiac death in patients with nonischemic dilated cardiomyopathy.</a> JAMA. 309 (9), 896-908 (2013).</li><li>London, G. M., Parfrey, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+disease+in+chronic+uremia:+pathogenesis.">Cardiac disease in chronic uremia: pathogenesis.</a> Adv Ren Replace Ther. 4 (3), 194-211 (1997).</li><li>Mohmand, B., Malhotra, D. K., Shapiro, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uremic+cardiomyopathy:+role+of+circulating+digitalis+like+substances.">Uremic cardiomyopathy: role of circulating digitalis like substances.</a> Front Biosci. 10, 2036-2044 (2005).</li><li>Himmelfarb, J., McMonagle, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manifestations+of+oxidant+stress+in+uremia.">Manifestations of oxidant stress in uremia.</a> Blood Purif. 19 (2), 200-205 (2001).</li><li>Okamura, D. M., Himmelfarb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tipping+the+redox+balance+of+oxidative+stress+in+fibrogenic+pathways+in+chronic+kidney+disease.">Tipping the redox balance of oxidative stress in fibrogenic pathways in chronic kidney disease.</a> Pediatr Nephrol. 24 (12), 2309-2319 (2009).</li><li>Himmelfarb, J., Stenvinkel, P., Ikizler, T. A., Hakim, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elephant+in+uremia:+oxidant+stress+as+a+unifying+concept+of+cardiovascular+disease+in+uremia.">The elephant in uremia: oxidant stress as a unifying concept of cardiovascular disease in uremia.</a> Kidney Int. 62 (5), 1524-1538 (2002).</li><li>Becker, B. N., Himmelfarb, J., Henrich, W. L., Hakim, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessing+the+cardiac+risk+profile+in+chronic+hemodialysis+patients:+a+hypothesis+on+the+role+of+oxidant+stress+and+other+non-traditional+cardiac+risk+factors.">Reassessing the cardiac risk profile in chronic hemodialysis patients: a hypothesis on the role of oxidant stress and other non-traditional cardiac risk factors.</a> J Am Soc Nephrol. 8 (3), 475-486 (1997).</li><li>Drummond, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+Na/K-ATPase+affects+cardiac+remodeling+and+increases+c-kit+cell+abundance+in+partial+nephrectomized+mice.">Reduction of Na/K-ATPase affects cardiac remodeling and increases c-kit cell abundance in partial nephrectomized mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 306 (12), 1631-1643 (2014).</li><li>Kennedy, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+nephrectomy+as+a+model+for+uremic+cardiomyopathy+in+the+mouse.">Partial nephrectomy as a model for uremic cardiomyopathy in the mouse.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 294 (2), 450-454 (2008).</li><li>Haller, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+against+marinobufagenin+reverses+cardiac+fibrosis+in+rats+with+chronic+renal+failure.">Monoclonal antibody against marinobufagenin reverses cardiac fibrosis in rats with chronic renal failure.</a> Am J Hypertens. 25 (6), 690-696 (2012).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spironolactone+attenuates+experimental+uremic+cardiomyopathy+by+antagonizing+marinobufagenin.">Spironolactone attenuates experimental uremic cardiomyopathy by antagonizing marinobufagenin.</a> Hypertension. 54 (6), 1313-1320 (2009).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+of+Na/K-ATPase+Mediated+Oxidant+Amplification+with+pNaKtide+Ameliorates+Experimental+Uremic+Cardiomyopathy.">Attenuation of Na/K-ATPase Mediated Oxidant Amplification with pNaKtide Ameliorates Experimental Uremic Cardiomyopathy.</a> Sci Rep. 6, 34592 (2016).</li><li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+reactive+oxygen+species+in+a+feed-forward+mechanism+of+Na/K-ATPase-mediated+signaling+transduction.">Involvement of reactive oxygen species in a feed-forward mechanism of Na/K-ATPase-mediated signaling transduction.</a> J Biol Chem. 288 (47), 34249-34258 (2013).</li><li>Leelahavanichkul, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+overcomes+strain-dependent+resistance+of+rapid+CKD+progression+in+a+new+remnant+kidney+mouse+model.">Angiotensin II overcomes strain-dependent resistance of rapid CKD progression in a new remnant kidney mouse model.</a> Kidney Int. 78 (11), 1136-1153 (2010).</li><li>Ma, L. J., Fogo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+of+robust+induction+of+glomerulosclerosis+in+mice:+importance+of+genetic+background.">Model of robust induction of glomerulosclerosis in mice: importance of genetic background.</a> Kidney Int. 64 (1), 350-355 (2003).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Die Ratte 5/6th PNx Modell ist weit verbreitet, CKD zu studieren. Aufgrund der viel kleineren Niere Größe in der Maus sind die klassischen Arterie Ligatur und Pol Resektion in Mausmodellen mit möglichen hohen Sterblichkeitsraten und unerwartete Blutungen/Blutverlust sehr anspruchsvoll.
Wir beschlossen ein Mausmodell PNx mit Pol Ligatur der Blutungen/Blutverlust zu überwinden. Dieses PNx-Modell nimmt weniger Zeit mit verbesserten Überlebensrate und hohe Reproduzierbarkeit. Diese...

CKD, auch bekannt als chronische Niereninsuffizienz ist eine fortschreitende Verlust der Nierenfunktion im Laufe der Zeit, die schließlich zur ständigen Nierenversagen entwickelt. CKD, vom frühen Stadium Nierenkrankheit Staaten terminaler Niereninsuffizienz (ESRD), ist ein großer Risikofaktor für Herz-Kreislauf-Krankheit und Sterblichkeit, und entwickelt sich zunehmend zu der klinischen Phänotyp genannt "urämischen Kardiomyopathie"1, 2,3. Die urämische Kardiomyopathie bei Patienten mit CKD oder terminaler Niereninsuffizienz ist verbunden mit Herz-Kreislauf-Anomalien, hauptsächlich verursacht durch Überlastung des linken Ventrikeldruck (LV) und/oder Volumen, was zu LV-Hypertrophie (LVH), LV-Dilatation und LV systolische Dysfunktion4 ,5,6. Kardialer Fibrose ist eine weitere gemeinsame pathologischen Prozess der urämischen Kardiomyopathie, die kardialen Compliance LV diastolische Dysfunktion wiederum reduziert. Schwere kardiale Fibrose führt zu plötzlichen Herztod sogar in diesen ohne kardiale Symptome7.
5/6th PNx ist eine häufig verwendete CKD-Tiermodell für Tierversuche mit Nierenversagen, urämischen Kardiomyopathie und Bluthochdruck. PNx wird durch Ablation von 5/6 renale Parenchym erreicht. Die Rattenmodell entwickelte sich zunächst mit den beiden am häufigsten Protokolle eingesetzt, chirurgische Resektion oder Infarkt. PNx Rattenmodell ist ein äußerst nützliches Modell urämischen Kardiomyopathie mit erheblichen Erhöhungen des Blutdrucks, Herzhypertrophie und Beeinträchtigung der diastolischen Funktion zu studieren. Später wurden PNx Mausmodelle, betrieben mit ähnlichen Techniken wie die Rattenmodell, aufgrund der breiten Verfügbarkeit und Benutzerfreundlichkeit machen genetische Manipulationen im Maus-System entwickelt.
Es ist gut dokumentiert, dass systemische oxidativen Stress ein konstantes Merkmal der beiden klinischen und experimentellen urämischen Kardiomyopathie8,9 ist. Des weiteren oxidativen Stress trägt zur urämischen Syndrom10und spielt eine entscheidende Rolle in der Pathogenese der kardialen Anomalien gesehen im urämischen Kardiomyopathie11,12,13. Zu diesem Punkt haben wir gezeigt, dass das Nagetier 5/6th PNx Modell bewirkt, dass physiologische, morphologische und biochemische Funktionen von urämischen Kardiomyopathie14,15,16, 17. in dem PNx Mausmodell hier beschriebenen, PNx betrieben Mäuse entwickelten bedeutenderen oxidativen Stress, zumindest teilweise vermittelte von Na/K-ATPase Signalisierung-Funktion, die in PNx-vermittelten experimentelle urämischen Kardiomyopathie ankommt. Dämpfung der Na/K-ATPase Signalisierung nicht nur reduziert oxidativen Verstärkung, sondern auch mildert die phänotypischen Veränderungen in PNx-vermittelten experimentelle urämischen Kardiomyopathie18.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="873">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Iris Scissors, 11.5 cm, Straight</td>
			<td style="width:235px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:172px;">501758</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">WPI Swiss Tweezers #5 11 cm, 0.1x0.06 mm Tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:299px;">Jewelers #5 Forceps, 11cm, Straight, Titanium</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>555227F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Iris Forceps, 10cm, Straight, Serrated</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tweezers #3, 11cm, 0.2x0.4mm Tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Medesy Iris 4.5&#34; Curved Scissors, Stainless Steel</td>
			<td>Net23</td>
			<td>3512</td>
			<td>www.Net32.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dr. Slick Iris Scissors; 3.5&#34;</td>
			<td>Avid Max</td>
			<td style="width:172px;">220-1-965-IrisScsrs-P&#160;</td>
			<td>www.Avid Max.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Miltex Iris Scissors 4 1/8&#34; Curved</td>
			<td>4mdmedical</td>
			<td style="width:172px;">V95-306</td>
			<td>www.4mdmedical.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5&#34; Hemostat clap, curved jaw</td>
			<td>PJTool</td>
			<td>4355</td>
			<td>www.pjtool.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">sklar Knapp Iris scissors, straight and sharp/blunt 4&#34;</td>
			<td>Medical Device depot</td>
			<td>64-3430</td>
			<td>www.medicaldevicedepot.com</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Kelly Hemostatic Forceps straight 5.5&#34;</td>
			<td>Pilgtimmedical</td>
			<td>FA710-50</td>
			<td>www.pilgtimmedical.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C57BL/6 mice</td>
			<td>Hilltop Lab Animals Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Mouse Handling Table and rectal thermometer</td>
			<td>Visualsonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MicroScan transducer&#160;</td>
			<td>Vevo 1100</td>
			<td>MS400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vevo 1100 Imaging System&#160;</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cystatin C ELISA kit and mouse creatinine kit&#160;</td>
			<td>Crystal Chem. Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse BUN ELISA kit&#160;</td>
			<td>MyBioSource Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse 5/6th nephrectomy model that induces experimental uremic cardiomyopathy

Chronische Niereninsuffizienz (CNI) ist ein großer Risikofaktor für Herz-Kreislauf-Krankheit und Sterblichkeit und entwickelt sich zunehmend zu der klinischen Phänotyp "urämischen Kardiomyopathie" genannt. Wir beschreiben hier ein experimentelle CKD Maus-Modell namens 5/6th partiellen Nephrektomie (PNx) mit Pol Ligatur, die urämischen Kardiomyopathie auf vier Wochen nach der Operation entwickelt. Dieses PNx-Modell wurde von einer Operation in zwei Schritten durchgeführt. In Schritt eins Chirurgie waren beide Pole der linken Niere ligiert. In Schritt zwei Operationen, die 7 Tage nach der Schritt-eine Operation durchgeführt wurde, wurde die rechte Niere entfernt. Für die Schein-Chirurgie die gleichen Eingriffe erfolgten aber ohne Pol Ligatur der linken Niere oder Entfernung von der rechten Niere. Chirurgische Eingriffe sind einfacher und zeitsparender, im Vergleich zu anderen Methoden. Aber der Rest funktionellen Niereninsuffizienz Masse ist nicht so leicht als der Nierenarterie Ligatur gesteuert. Vier Wochen nach der Operation im Vergleich zu den Schein betrieben Mäusen die PNx Mäuse entwickelt, eingeschränkter Nierenfunktion, Anämie, Herzhypertrophie, kardialer Fibrose und sank der systolische und der diastolische Herzfunktion.

Die Daten zeigten, dass dies geändert 5/6th PNx durch Pol Ligatur ist ein einfaches und effektives Modell urämischen Kardiomyopathie zu untersuchen. Vier Wochen nach der Operation dieses Model präsentiert PNx beeinträchtigte Nierenfunktion, Anämie, Herzhypertrophie, kardialer Fibrose und sank der systolische und der diastolische Herzfunktion. Die Ergebnisse sind nachfolgend zusammengefasst.
Vier ...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy at JoVE.com

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

Diese Handschrift enthält eine detaillierte zweistufigen chirurgische Prozedur zum Maus 5/6th partiellen Nephrektomie (PNx) mit Pol Ligatur durchzuführen. Vier Wochen nach der Operation im Vergleich zu Schein betrieben Mäuse, die PNx Mäuse entwickelt, eingeschränkter Nierenfunktion, Anämie, Herzhypertrophie, kardialer Fibrose und sank der systolische und der diastolische Herzfunktion.

5/6th Nephrektomie Mausmodell, die experimentelle urämischen Kardiomyopathie induziert

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

a-mouse-56th-nephrectomy-model-that-induces-experimental-uremic

Research

JoVE Journal

Biology

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

20.2K Aufrufe.  Marshall University. Diese Handschrift enthält eine detaillierte zweistufigen chirurgische Prozedur zum Maus 5/6th partiellen Nephrektomie (PNx) mit Pol Ligatur durchzuführen. Vier Wochen nach der Operation im Vergleich zu Schein betrieben Mäuse, die PNx Mäuse entwickelt, eingeschränkter Nierenfunktion, Anämie, Herzhypertrophie, kardialer Fibrose und sank der systolische und der diastolische Herzfunktion.

Serie: A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In-vivo-Imaging und therapeutische Behandlungen in einem orthotopen Mausmodell des Eierstockkrebs

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Forschung

Biologie

Oct4GiP Reporter Assay to Study Genes that Regulate Mouse Embryonic Stem Cell Maintenance and Self-renewal

Pluripotency and self-renewal are two defining characteristics of embryonic stem cells (ES cells). Understanding the underlying molecular mechanism will greatly facilitate the use of ES cells for developmental biology studies, disease modeling, drug discovery, and regenerative medicine (reviewed in 1,2).
To expedite the identification and characterization of novel regulators of ES cell maintenance and self-renewal, we developed a fluorescence reporter-based assay to quantitatively measure the self-renewal status in mouse ES cells using the Oct4GiP cells 3. The Oct4GiP cells express the green fluorescent protein (GFP) under the control of the Oct4 gene promoter region 4,5. Oct4 is required for ES cell self-renewal, and is highly expressed in ES cells and quickly down-regulated during differentiation 6,7. As a result, GFP expression and fluorescence in the reporter cells correlates faithfully with the ES cell identity 5, and fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis can be used to closely monitor the self-renewal status of the cells at the single cell level 3,8.
Coupled with RNAi, the Oct4GiP reporter assay can be used to quickly identify and study regulators of ES cell maintenance and self-renewal 3,8. Compared to other methods for assaying self-renewal, it is more convenient, sensitive, quantitative, and of lower cost. It can be carried out in 96- or 384-well plates for large-scale studies such as high-throughput screens or genetic epistasis analysis. Finally, by using other lineage-specific reporter ES cell lines, the assay we describe here can also be modified to study fate specification during ES cell differentiation.

We describe a fluorescence reporter assay to quickly identify and characterize genes that regulate mouse embryonic stem cell maintenance and self-renewal.

Oct4GiP Reporter Assay auf Gene, die Maus embryonalen Stammzellen Wartungs-und Self-Study Erneuerung Regulate

Pluripotency and self-renewal are two defining characteristics of embryonic stem cells (ES cells). Understanding the underlying molecular mechanism will ...

An Analytical Tool that Quantifies Cellular Morphology Changes from Three-dimensional Fluorescence Images

The most common software analysis tools available for measuring fluorescence images are for two-dimensional (2D) data that rely on manual settings for inclusion and exclusion of data points, and computer-aided pattern recognition to support the interpretation and findings of the analysis. It has become increasingly important to be able to measure fluorescence images constructed from three-dimensional (3D) datasets in order to be able to capture the complexity of cellular dynamics and understand the basis of cellular plasticity within biological systems. Sophisticated microscopy instruments have permitted the visualization of 3D fluorescence images through the acquisition of multispectral fluorescence images and powerful analytical software that reconstructs the images from confocal stacks that then provide a 3D representation of the collected 2D images. Advanced design-based stereology methods have progressed from the approximation and assumptions of the original model-based stereology1 even in complex tissue sections2. Despite these scientific advances in microscopy, a need remains for an automated analytic method that fully exploits the intrinsic 3D data to allow for the analysis and quantification of the complex changes in cell morphology, protein localization and receptor trafficking. 
Current techniques available to quantify fluorescence images include Meta-Morph (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) and Image J (NIH) which provide manual analysis. Imaris (Andor Technology, Belfast, Northern Ireland) software provides the feature MeasurementPro, which allows the manual creation of measurement points that can be placed in a volume image or drawn on a series of 2D slices to create a 3D object. This method is useful for single-click point measurements to measure a line distance between two objects or to create a polygon that encloses a region of interest, but it is difficult to apply to complex cellular network structures. Filament Tracer (Andor) allows automatic detection of the 3D neuronal filament-like however, this module has been developed to measure defined structures such as neurons, which are comprised of dendrites, axons and spines (tree-like structure). This module has been ingeniously utilized to make morphological measurements to non-neuronal cells3, however, the output data provide information of an extended cellular network by using a software that depends on a defined cell shape rather than being an amorphous-shaped cellular model. To overcome the issue of analyzing amorphous-shaped cells and making the software more suitable to a biological application, Imaris developed Imaris Cell. This was a scientific project with the Eidgen&ouml;ssische Technische Hochschule, which has been developed to calculate the relationship between cells and organelles. While the software enables the detection of biological constraints, by forcing one nucleus per cell and using cell membranes to segment cells, it cannot be utilized to analyze fluorescence data that are not continuous because ideally it builds cell surface without void spaces. To our knowledge, at present no user-modifiable automated approach that provides morphometric information from 3D fluorescence images has been developed that achieves cellular spatial information of an undefined shape (Figure 1). 
We have developed an analytical platform using the Imaris core software module and Imaris XT interfaced to MATLAB (Mat Works, Inc.). These tools allow the 3D measurement of cells without a pre-defined shape and with inconsistent fluorescence network components. Furthermore, this method will allow researchers who have extended expertise in biological systems, but not familiarity to computer applications, to perform quantification of morphological changes in cell dynamics.

We developed a software platform that utilizes Imaris Neuroscience, ImarisXT and MATLAB to measure the changes in morphology of an undefined shape taken from three-dimensional confocal fluorescence of single cells. This novel approach can be used to quantify changes in cell shape following receptor activation and therefore represents a possible additional tool for drug discovery.

Ein analytisches Werkzeug, das zelluläre Morphologie Änderungen von Dreidimensionale Fluorescence Images Quantifiziert

The most common software analysis tools available for measuring fluorescence images are for two-dimensional (2D) data that rely on manual settings for ...

Strategies for Tracking Anastasis, A Cell Survival Phenomenon that Reverses Apoptosis

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) refers to the recovery of dying cells. Before these cells recover, they have passed through important checkpoints of apoptosis, including mitochondrial fragmentation, release of mitochondrial cytochrome c into the cytosol, activation of caspases, chromatin condensation, DNA damage, nuclear fragmentation, plasma membrane blebbing, cell shrinkage, cell surface exposure of phosphatidylserine, and formation of apoptotic bodies. Anastasis can occur when apoptotic stimuli are removed prior to death, thereby allowing dying cells to reverse apoptosis and potentially other death mechanisms. Therefore, anastasis appears to involve physiological healing processes that could also sustain damaged cells inappropriately. The functions and mechanisms of anastasis are still unclear, hampered in part by the limited tools for detecting past events after the recovery of apparently healthy cells. Strategies to detect anastasis will enable studies of the physiological mechanisms, the hazards of undead cells in disease pathology, and potential therapeutics to modulate anastasis. Here, we describe effective strategies using live cell microscopy and a mammalian caspase biosensor&#160;for identifying and tracking anastasis in mammalian cells.

The term anastasis refers to the phenomenon in which dying cells reverse a cell suicide process at a late stage, repair themselves, and ultimately survive. Here we demonstrate protocols for detecting and tracking cells that undergo anastasis.

Strategien für die Spurhaltung Anastasis, einer Zelle Überleben Phänomen, das Apoptose Kehrt

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) refers to the recovery of dying cells. Before these cells recover, they have passed through important ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

Trans-innere Zelle Masse Injektion von embryonalen Stammzellen führt zu höheren Chimerism Raten

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

Ein Maus-Modell der teilweisen Darmverschluss

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Purification of Platelets from Mouse Blood

Platelets are purified from whole blood to study their functional properties, which should be free from red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), and plasma proteins. We describe here purification of platelets from mouse blood using three-fold more iohexol gradient medium relative to blood sample volume and centrifugation in a swinging bucket rotor at 400 x g for 20 min at 20 &#176;C. The recovery/yield of the purified platelets were 18.2-38.5%, and the purified platelets were in a resting state, which did not contain any significant number of RBC and WBC. The purified platelets treated with thrombin showed up to 93% activation, indicating their viability. We confirmed that the purified platelets are sufficiently pure using flow cytometric and microscopic evaluation. These platelets can be used for gene expression, activation, granule release, aggregation, and adhesion assays. This method can be used for purification of platelets from the blood of other species as well.

Here, mouse blood was collected in the presence of an anti-coagulant. The platelets were purified by iohexol gradient medium using low speed centrifugation. The platelets were activated with thrombin to investigate if they were viable. The quality of the purified platelets was analyzed by flow cytometry and microscopy.

Reinigung von Plateletten aus dem Mausblut

Platelets are purified from whole blood to study their functional properties, which should be free from red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), ...

A Laser Capture Microdissection Protocol That Yields High Quality RNA from Fresh-frozen Mouse Bones

RNA yield and integrity are decisive for RNA analysis. However, it is often technically challenging to maintain RNA integrity throughout the entire laser capture microdissection (LCM) procedure. Since LCM studies work with low amounts of material, concerns about limited RNA yields are also important. Therefore, an LCM protocol was developed to obtain sufficient quantity of high-quality RNA for gene expression analysis in bone cells. The effect of staining protocol, thickness of cryosections, microdissected tissue quantity, RNA extraction kit, and LCM system used on RNA yield and integrity obtained from microdissected bone cells was evaluated. Eight-&#181;m-thick frozen bone sections were made using an adhesive film and stained using a rapid protocol for a commercial LCM stain. The sample was sandwiched between a polyethylene terephthalate (PET) membrane and the adhesive film. An LCM system that uses gravity for sample collection and a column-based RNA extraction method were used to obtain high quality RNAs of sufficient yield. The current study focusses on mouse femur sections. However, the LCM protocol reported here can be used to study in situ gene expression in cells of any hard tissue in both physiological conditions and disease processes.

A laser capture microdissection (LCM) protocol was developed to obtain sufficient quantity of high-quality RNA for gene expression analysis in bone cells. The current study focusses on mouse femur sections. However, the LCM protocol reported here can be used to study gene expression in cells of any hard tissue.

Ein Laser Capture Microdissection Protocol, das hochwertige RNA aus frisch gefrorenen Mausknochen liefert

RNA yield and integrity are decisive for RNA analysis. However, it is often technically challenging to maintain RNA integrity throughout the entire laser ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Massenspektrometrieanalyse zur Identifizierung der Ubiquitylierung von EIFP-A mit EYFP-Tags (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding the pathological processes and evaluating new drugs. Here, we introduced a surgically induced lumbar spine instability (LSI) mouse model that develops IDD starting from 1 week post operation. In detail, the mouse under anesthesia was operated by low back skin incision, L3&#8211;L5 spinous processes exposure, detachment of paraspinous muscles, resection of processes and ligaments, and skin closure. L4&#8211;L5 IVDs were chosen for the observation. The LSI model develops lumbar IDD by porosity and hypertrophy in endplates at an early stage, decrease in intervertebral disc volume, shrinkage in nucleus pulposus at an intermediate stage, and bone loss in lumbar vertebrae (L5) at a later stage. The LSI mouse model has the advantages of strong operability, no requirement of special equipment, reproducibility, inexpensive, and relatively short period of IDD development. However, LSI operation is still a trauma that causes inflammation within the first week post operation. Thus, this animal model is suitable for study of lumbar IDD.

We developed a lumbar intervertebral disc degeneration mouse model by resection of L3&#8211;L5 spinous processes along with supra- and inter-spinous ligaments and detachment of paraspinous muscles.

Ein Mausmodell der Lumbar Spine Instability

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

5/6^th Nephrektomie Mausmodell, die experimentelle urämischen Kardiomyopathie induziert

Zusammenfassung

Weitere Videos entdecken

Kapitel in diesem Video