Questo protocollo fornisce informazioni dettagliate su come pianificare, eseguire e analizzare le risposte del tronco uditivo evocato click e tone-burst nei topi. Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente una profilazione uditiva complessa e veloce di modelli di topi farmacologici e mutanti. Le nuove intuizioni sull'APP iniziale e sui relativi cambiamenti nell'elaborazione uditivo nei topi e nei ratti possono essere tradotte nell'uomo.
Pertanto, questo metodo è di importanza centrale nella caratterizzazione e nella fenotipizzazione di malattie uditivi, neurologiche e. Questo metodo è molto importante per l'identificazione di disacusi, ipoacusi e anacusi. Ad esempio, nella perdita dell'udito metabolica, congenita e aspi-met-acury causata dal rumore, nonché nei deficit udizionali dovuti a deformità o malformazioni, lesioni e neoplasie.
Gli utenti nuovi alla tecnica, dovrebbero prestare particolare attenzione al corretto elettro-posizionamento e alla calibrazione pre-sperimentale del sistema. La dimostrazione visiva del metodo è fondamentale per illustrare l'anestesia, la registrazione ABR, i processi di filtraggio ABR e i neur-o-lass-es ABR automatizzati. Iniziare accendendo il preamplificatore collegato al microfono, almeno cinque minuti prima della calibrazione, per consentire l'equilibrazione del sistema.
Accendere l'oscilloscopio. Quindi posizionare il microfono, collegato a un preamplificatore all'interno del cubicolo attenuante del suono, per imitare l'orecchio murino sperimentale. Successivamente, aprire i software di elaborazione e acquisizione disponibili in commercio e programmare i protocolli di stimolo per i clic e i tone burst.
Inizia con l'entità di stimolo del clic per l'analisi e determinare le soglie dei clic. Seguito dalla simmetria ABR dell'orecchio sinistro e destro. E ampiezze e latenze dell'ABR in seguito.
Successivamente, utilizzare lo stesso software per verificare il protocollo di stimolazione del tone burst utilizzando il software di progettazione degli stimoli Sig-Gen RZ. E controlla le impostazioni di stimolo, sotto il software di acquisizione Bio-Sig RZ. Programmare l'intervallo di frequenza appropriato da testare, a seconda della domanda scientifica, e assicurarsi che le gamme di frequenza da applicare soddisfino le capacità tecniche dell'altoparlante.
Per la media, impostare il numero di stimoli acustici sequenziali, ad esempio clic o raffiche di tono, a 300 volte, con una velocità di 20 al secondo;una durata media di 25 millisecondi e il fattore di amplificazione del preamplificatore, 20 volte. Successivamente, verificare la frequenza di campionamento appropriata per l'acquisizione dei dati ABR e quindi passare il filtro utilizzando un filtro del valore del burro a sei sondaggi. Attivare il filtro tacca, se necessario.
Avviare la calibrazione del tone burst selezionando il file calibrazione:CAL200K;all'interno del software, per attivare la modalità di configurazione della calibrazione. E scegliere i perimetri in base alle condizioni sperimentali. Utilizzare il sistema del processore per eseguire la procedura di calibrazione.
Assicurarsi che le specifiche tecniche del microfono e dell'altoparlante, in termini di livello di pressione sonora o limiti SPL, gamma di frequenza e distribuzione, si armonizzno. Quindi, selezionare e avviare il protocollo di stimolazione dei clic predefiniti. Eseguire un singolo clic SPL per verificare che lo spettro degli stimoli sonori sia analizzato dalla rapida trasformazione online a quattro ay dell'oscilloscopio, corrisponde ai requisiti.
Selezionare e avviare il protocollo di stimolazione burst di tono predefiniti, nell'intervallo da uno a 42 kilohertz. Confermare lo spettro di frequenza degli stimoli di prova acustici registrati, utilizzando un oscilloscopio e fft online. Infine, completare la calibrazione del tone burst caricando il file di calibrazione creato nel protocollo di stimolo burst del tono.
Inizia posizionando il mouse anestetizzato all'interno di un cubicolo attenuante del suono, rivestito con schiuma acustica. Per la registrazione dello stelo cerebrale mono evocato potenziali uditivi, inserire elettrodi sub-dermici in acciaio inossidabile al vertice, assiali dell'occhio-spillo e ventrale-laterale della pinna destra o sinistra a seconda dell'orecchio da misurare. Dall'altra parte, per le registrazioni binaurale, posizionare gli elettrodi negativi sia all'apice destro che sinistro.
Posizionare l'elettrodo di terra all'anca dell'animale. Prima dell'inserimento, formare una forma a gancio sulla punta dell'elettrodo in acciaio inossidabile che è la fissazione sub-dermica degli elettrodi è garantita. E una volta inserito, posizionare correttamente il rostro del mouse di 10 centimetri di fronte all'altoparlante.
Collegare tutti gli elettrodi allo stadio della testa e verificare la loro impedenza. Quindi, eseguire misurazioni di impedenza di tutti gli elettrodi, prima di ogni registrazione, per verificare il corretto posizionamento e conducibilità degli elettrodi. Registrare gli ABOR in condizioni di campo libero utilizzando un singolo altoparlante.
Infine, condurre analisi ABR tramite il rilevamento automatico delle soglie e l'analisi della latenza delle onde per determinare picchi positivi e onde negative. Come primo passo nell'analisi delle prestazioni generali dell'udito, gli ABR evocati a clic per diversi SMR, tra zero e 90, sono stati esaminati utilizzando il sistema automatizzato di rilevamento delle soglie ABR. Sono state analizzate potenziali alterazioni nei livelli di soglia ABR evocate da diverse frequenze di burst del tono.
Nelle linee del mouse esemplari, Cav3.2 più, meno e Cav3.2 meno, meno mostrato aumentato click e tone burst relative alle soglie udizioni rispetto ai controlli. Infine, la funzione di crescita dell'ampiezza ABR evocata da clic e l'analisi della latenza della forma d'onda ABR sono state effettuate tramite approccio basato su wavelet. Quest'ultimo consente di comprendere la possibile influenza spacio-temporale del gene di interesse sull'elaborazione delle informazioni uditivo all'interno dell'orecchio interno e del tronco encefalico.
Un corretto posizionamento degli elettrodi ABR nella misurazione di Pinna e nella calibrazione del sistema sono essenziali per eseguire questa tecnica. L'approccio uditivo qui presentato, può essere utilizzato anche in combinazione con un sistema di telemetria per analizzare potenzialità complesse, a media latenza e evocate tardive. Questo aiuta nella caratterizzazione e nella fenotipizzazione delle malattie uditivo, neurologico e neurologico.
