Questo video mostrerà la tecnica di dissezione e i punti di riferimento anatomici rilevanti per il ganglio pelvico maggiore e i nervi autonomici associati nel ratto maschio e femmina. La prima dissezione viene mostrata per il lato sinistro di un ratto maschio immediatamente postmortem. Accedi all'addome e al bacino attraverso un'incisione ventrale della linea mediana.
Spostare delicatamente gli organi addominali su un lato usando forcep o applicatori con punta di cotone. Si noti la posizione dei lobi ventrali della ghiandola prostatica e della vescica urinaria. Spostare la vescicola seminale sul lato contralaterale.
Taglia i deferenti vas per fornire un migliore accesso all'area che sovrascriva il ganglio. Da questo punto della dissezione, il tessuto non deve asciugarsi, quindi mantieni il tessuto umido con soluzione salina fisiologica. Per visualizzare il ganglio, cancellare con cura i tessuti vicino e sovrascrivono il ganglio.
Se necessario, utilizzare un riavvolgitore per mantenere libero il campo di dissezione. Rimuovere un aggregato vicino di tessuto adiposo e aprire la fascia laterale del bacino. Identificare il nervo pelvico visualizzando la vena iliaca interna ed è un ramo fine che si proietta verso il ganglio pelvico maggiore e la vescica.
Questo ramo corre parallelo e talvolta incorporato all'interno del nervo pelvico, quindi attraversa il ganglio. Posizionare delicatamente le forcelle angolate a punta fine sotto il nervo pelvico e far scorrere le forcep lungo per liberarlo dal tessuto circostante. Potrebbe anche essere possibile isolare il nervo pelvico dal piccolo vaso che corre parallelo ad esso.
Identificare il nervo cavernoso seguendo il nervo pelvico alla sua giunzione con il ganglio, quindi seguire il nervo cavernoso mentre viaggia attraverso la prostata e quindi caudally verso i corpi cavernosi del pene. Identificare dove il nervo ipogastrico si unisce al ganglio a questo bordo cranico dopo aver viaggiato lungo l'otorinole. Identificare il ganglio pelvico maggiore e confermare la posizione di ogni nervo maggiore.
Identificare i nervi accessori sul bordo ventrale del ganglio proiettandosi verso i tratti urinari e riproduttivi. Per rimuovere il ganglio pelvico maggiore con i suoi nervi associati, far scivolare delicatamente le pinie tra il ganglio e la ghiandola prostatica sottostante facendo attenzione a non forare la capsula sottile della prostata. Cancellare eventuali connessioni finali con i tessuti circostanti, quindi tagliare ogni nervo.
Sposta il ganglio con i suoi nervi alla soluzione appropriata per il tuo esperimento e conferma che ciascuno dei nervi principali è intatto. La seconda dissezione viene mostrata per il lato sinistro di un topo femmina immediatamente dopo il mortem. Spostare delicatamente gli organi addominali su un lato notando la posizione del corno uterino, della vescica urinaria e del retto.
Tagliare i vasi ovarico e uterino e ritrarre il corno uterino. Entra nello spazio peritoneale e cancella delicatamente un aggregato di tessuto adiposo situato vicino alla cervice uterina. Identificare la parete laterale della cervice uterina appena caudale alla sua giunzione con le corna uterine.
Questa regione è il punto di riferimento principale per definire la principale posizione del ganglio pelvico sull'asse rostrocaudale dell'animale. Rimuovere con cura qualsiasi tessuto che ostacoli la visione completa delle strutture neurali evitando danni ai vasi principali. Identificare il nervo pelvico trovando la vena iliaca interna e il suo ramo fine che si proietta verso il ganglio pelvico maggiore e la vescica.
Questo ramo corre parallelo e talvolta incorporato all'interno del nervo pelvico, quindi trasversa il ganglio. Identificare il nervo ipogastrico in cui si unisce al ganglio sul bordo cranico dopo aver viaggiato lungo l'ureter. Identificare il nervo cavernoso seguendo il nervo pelvico alla sua giunzione con il ganglio, quindi seguire il nervo cavernoso mentre viaggia caudally lungo la parete laterale della cervice verso la vagina.
I nervi accessori sono difficili da vedere, ma proiettano dall'aspetto mediale del ganglio pelvico maggiore. Infine, identificare il ganglio pelvico maggiore e confermare la posizione di ogni nervo maggiore. Per rimuovere il ganglio pelvico maggiore con i nervi associati, far scivolare delicatamente le forcep tra il ganglio e la cervice sottostante e interrompere eventuali connessioni tra il ganglio e la cervice.
Cancellare eventuali connessioni finali con i tessuti circostanti per la lunghezza dei nervi necessari per l'esperimento, quindi tagliare ogni nervo. Sposta il ganglio con i suoi nervi alla soluzione appropriata per il tuo esperimento e conferma che ciascuno dei nervi principali è intatto. Un esempio della principale struttura del ganglio pelvico è illustrato qui mostrando diverse caratteristiche dei gangli formaldeide-fissi usando l'immunoistochimica convenzionale.
Questa immagine mostra l'intero ganglio pelvico principale con i suoi nervi associati visualizzato come un intero supporto a pieno spessore. Questa immagine mostra una criosezione immunoetichettata per dimostrare i neuroni noradrenergici con la loro espressione di tirosina idrossilasi. Questa immagine mostra i neuroni colinergici visualizzati dalla loro espressione di ossido nitrico neuronale sintasi.
In conclusione, questo protocollo e schemi correlati forniscono ai ricercatori interessati alla funzione viscerale pelvica gli strumenti per identificare e sezionare il ganglio pelvico maggiore nei ratti maschi e femmine. Queste abilità possono essere applicate a molti tipi di manipolazione sperimentale in vitro e in vivo.
