Il nostro protocollo fornisce un modello semplice, economico, riproducibile e clinico rilevante per i ricercatori nel campo dell'iperplasia intimale venosa. Il nostro protocollo è economicamente, clinicamente e tecnicamente equilibrato. Pertanto, è altamente raccomandato per i ricercatori che desiderano applicare i loro risultati in vitro a un ambiente in vivo.
Crediamo che il nostro protocollo possa essere applicato a un modello animale più ampio per lo sviluppo di nuove strategie di trattamento nelle malattie ischemiche del cuore e degli arti inferiori. Il nostro protocollo è principalmente rilevante per il campo della chirurgia cardiovascolare. Tuttavia, può anche essere usato per affrontare i cambiamenti degenerativi nelle fistole arteriovenose in pazienti con malattia renale allo stadio finale.
Dopo somministrazione analgesica di antibiotici anestetici locali e profilattici, disinfettare il sito chirurgico con il 10%povidone-iodio. E fare un'incisione da 50 a 60 millimetri con un bisturi chirurgico nella regione cervicale del coniglio bianco giapponese maschio anestetizzato. Sezionare senza mezzi termini i tessuti sottocutanei e la fascia per esporre un segmento da 20 a 30 millimetri della vena giugulare.
E usa 4-0 suture di seta per legare tutti i rami della vena esposta. Posizionare una sutura di seta 2-0 intorno alle vene giugulare interne ed esterne e fare un'incisione di un millimetro nella parete venosa del lato distale della vena. Inserire un catetere a palloncino a 2 francesi dal taglio verso il lato prossimale della vena.
E legare la sutura di seta 2-0 nei siti distali delle vene giugulare. Gonfiare il pallone con 200 microlitri d'aria. E usa il palloncino per denudare l'intima della vena tre volte per l'esfoliazione endoteliale.
Dopo il terzo passaggio, legare l'estremità prossimale della vena e tagliare la vena nel sito distale. Quindi inserire un catetere endovenoso calibro 20 nella vena raccolta dalla direzione prossimale alla direzione prossimale e tagliare la vena nel sito prossimale. Per interporre l'arteria carotide con la vena giugulare di raccolta, esporre un segmento da 20 a 30 millimetri dell'arteria carotide ipsilaterale.
E separare attentamente l'arteria dalla vena e dal nervo vicini. Legare tutti i rami della vena esposta con sutura di seta 4-0. E somministrazione endovenosa di 200 unità internazionali per chilogrammo di sodio eparina.
Bloccare le estremità prossimali e distali dell'arteria con morsetti chirurgici in gomma. E tagliare l'arteria tra i morsetti. Iniettare la soluzione salina normale nell'arteria carotide incisa prossimamente e distally per distesa l'arteria.
E posizionare la vena di raccolta vicino all'arteria per anastomose il vaso in modo invertito end-to-end. Per anastonosio l'estremità prossimale della vena fino all'estremità distale dell'arteria, posizionare due punti di ancoraggio di 8-0 polipropilene nel sito e nel sito opposto. Aggiungere punti sul lato superiore della linea di anastomosi tra i punti di ancoraggio.
Capovolgere l'arteria e l'innesto venale a testa in giù. E aggiungere punti sulla parte rimanente della linea di anastomosi. Quindi, rimuovere il catetere endovenoso dalla vena e bloccare l'innesto venoso prossimale.
Declamp l'arteria carotide distally. E osserva se l'innesto venale si espande gradualmente. Utilizzo dell'8-0 suture interrotte in polipropilene, anastonosio l'estremità distale della vena fino all'estremità prossimale dell'arteria.
E sganciare l'arteria per verificare la presenza di sanguinamento dai siti di anastomosi. Infine, ligate l'arteria carotide interna con una sutura di seta 4-0 per simulare una cattiva condizione di deflusso e facilitare l'iperplasia intimale. Quindi pulire la ferita con soluzione salina.
Chiudere l'incisione con 3-0 poliglatina 910 a strati. E consentire al coniglio di riprendersi completamente con il monitoraggio prima di riportare l'animale nella sua gabbia domestica. In questa immagine rappresentativa, è possibile osservare un'iperplasia intimale di successo a 2 settimane dopo un intervento di interposizione venosa.
Qui, si possono osservare gli effetti terapeutici delle nanoparticelle poli(acido lattico-co-glicolico) cariche di microRNA-145 sulla morfologia intimale dell'iperplasia. Infatti, il trattamento con microRNA carichi di nanoparticelle poli(acido lattico-co-glicolico)si traduce in una significativa attenuazione dell'iperplasia intimale. Inoltre, l'immunostaining per Ki-67, un marcatore proliferatore cellulare, rivela meno cellule Ki-67-positive all'interno del gruppo trattato con microRNA-145 che indica un cambiamento fenotipo nelle cellule muscolari lisce vascolari dallo stato proliferativo immaturo allo stato contrattile maturo.
L'obiettivo principale del nostro protocollo è raggiungere la persistenza dell'innesto impiantato. È anche importante confermare che l'innesto si espande dopo aver declamato l'arteria carotide.
