Questo modello fornisce un protocollo standard per stabilire modelli animali di malattia coronarica. La procedura del modello animale stabilita da questo metodo è standard e il risultato è stabile. Per iniziare, dividere i maialini maschi di tre mesi del peso di 30-35 chilogrammi nei gruppi di malattia da trapianto fittizia e venosa di cinque animali ciascuno.
Dopo aver anestetizzato l'animale, stabilire l'accesso all'orecchio inserendo un catetere venoso permanente nella vena dell'orecchio marginale. Ora, trasferire il maiale sul tavolo operatorio in posizione supina. Eseguire l'intubazione tracheale con un tubo di calibro francese da 7,0 a 7,5 e collegarlo al circuito respiratorio dell'anestesia.
Immobilizzare gli arti con bende ed elevare la testa con un drappo sterile. Dopo aver iniettato bromuro di vecuronio per via endovenosa per il rilassamento muscolare, monitorare la frequenza cardiaca, i livelli di ossigeno nel sangue e la temperatura corporea utilizzando un elettrocardiogramma. Dopo aver rasato e sterilizzato l'area chirurgica, posizionare un drappo chirurgico sterile attorno ad esso.
Dopo aver effettuato l'incisione ed esposto la vena mammaria interna come descritto nel testo, individuare la vena mammaria interna e l'arteria mammaria interna sinistra sul lato sinistro dello sterno ed eseguire la dissezione smussata della vena mammaria interna con una pinza vascolare. Eseguire l'emostasi mediante elettrocoagulazione dei rami della vena mammaria interna sinistra con un coltello elettrico. Se l'emostasi è incompleta, usando filo di cotone, legare e segnare le due estremità della vena mentre viene raccolta.
Una volta rimossa la vena, iniettare eparina, soluzione salina normale nella vena per il pre-trattamento. Quindi, inserire la vena nella normale soluzione salina, tenerla per il backup e incidere allo stesso modo la vena mammaria interna del gruppo fittizio. Quindi, aprire il pericardio, chiudere la parete toracica e utilizzare la vena mammaria interna per il controllo patologico senza innesto di bypass coronarico.
Fare un'incisione di circa sette centimetri con un coltello elettrico sul pericardio per esporre il tronco coronarico destro. Sospendi il pericardio e cuci la pelle sul lato omolaterale con suture chirurgiche 1-0. Ora, separare il tronco dell'arteria coronaria destra dai tessuti circostanti.
Successivamente, utilizzando un gancio metallico, bypassare la banda di blocco sotto l'estremità prossimale dell'arteria coronaria destra isolata vicino all'aorta. Quindi, trattare il miocardio con tre cicli di ischemia di due minuti e cinque minuti di riperfusione stringendo e rilassando la fascia bloccante. Inoltre, monitorare l'attività elettrica del cuore con l'elettrocardiogramma durante il pre-condizionamento della riperfusione dell'ischemia.
Quindi, tagliare l'epicardio che copre i vasi sanguigni dopo aver stretto la fascia per bloccare il flusso sanguigno coronarico destro. Esporre la parete dell'arteria coronaria, tagliata longitudinalmente con la punta di una lama chirurgica contro il centro della parete anteriore dei vasi sanguigni. Dopo aver tagliato il lume e allargato l'incisione e posizionato uno shunt coronarico, inserire un'estremità dello shunt con una bobina nell'arteria coronaria distale attraverso la lacrima.
Ora, deviare il sangue nelle arterie coronarie nello shunt coronarico cavo per garantire un campo operativo chiaro ed eseguire una sutura continua end-to-side tra la vena mammaria interna e la parete aortica con la sutura in polipropilene 6-0. Nel mezzo dell'aorta ascendente, occludere la parete anterolaterale sinistra dell'aorta ascendente con un morsetto semi-occlusivo. Dopo aver praticato una piccola incisione con la lama chirurgica nella parete aortica in cui è stata tagliata l'avventizia, inserire l'estremità della testa dell'albero scorrevole all'estremità della testa del punzone nella cavità aortica attraverso questa incisione.
Quindi, contrai l'albero di scorrimento verso l'esterno e il coltello circolare taglia un pezzo della parete arteriosa. Una volta estratto lo shunt, eseguire una sutura continua end-to-side tra la vena mammaria interna e l'arteria coronaria destra con la sutura in polipropilene 6-0. Dopo aver aperto il morsetto semi-occlusione, registrare il flusso di bypass del tronco coronarico destro prossimale al sito di anastomosi utilizzando gli ultrasuoni.
Preparare l'animale per l'intervento chirurgico come dimostrato in precedenza. E con un coltello elettrico, fai un'incisione sternale mediana di 10 centimetri per dividere lo sterno e raccogliere la vena 30 giorni dopo l'intervento. Durante la separazione, evitare i principali vasi sanguigni, il cuore e separare i vasi sanguigni innestati strato per strato.
Tagliare rapidamente i grandi vasi sanguigni che si collegano al cuore e posizionare il cuore e l'aorta ascendente su trucioli di ghiaccio. Una volta rimosso il ponte vascolare dell'innesto, l'aorta collegata e l'arteria coronaria destra, sciacquare tutti i campioni con soluzione salina normale a quattro gradi Celsius. Dopo aver preso l'intero recipiente di innesto di circa tre o quattro centimetri e averlo diviso in quattro o cinque parti uguali, trasferirlo a CryoTubes per congelare rapidamente l'azoto liquido.
Per l'analisi, fissare l'innesto ghiacciato e risciacquato con soluzione salina in soluzione di paraformaldeide al 4%. Dopo 12 ore di fissazione del tessuto, macchiare le sezioni in 50 millilitri di una soluzione acquosa di ematossilina per tre minuti. Quindi, separare le sezioni lavando con 50 millilitri di acido cloridrico-etanolo allo 0,5% e acqua ammoniacale allo 0,2% per 10 secondi ciascuna.
Una volta che le sezioni sono state risciacquate per un'ora con acqua corrente, pulirle immergendole in acqua distillata per tre minuti. Dopo aver disidratato le sezioni in etanolo al 70% e al 90% per 10 minuti, metterle in 50 millilitri di soluzione colorante di eosina alcolica allo 0,5% per due o tre minuti. Una volta che le sezioni colorate sono disidratate in etanolo puro, immergere i campioni in xilene puro per 10 minuti per renderli trasparenti.
Infine, gocciolare le sezioni trasparenti con colla neutra prima di coprirle con un vetrino di copertura. Osservare sezioni patologiche al microscopio ottico con un ingrandimento di 40 volte. L'esame ecografico ha mostrato che la direzione complessiva del flusso sanguigno era normale nell'estremità prossimale, nella cavità vascolare e nell'estremità distale del vaso dell'innesto.
Tuttavia, le estremità prossimali e distali del vaso dell'innesto hanno mostrato un flusso retrogrado di sangue. L'analisi istologica della vena mammaria interna ha rivelato che nel gruppo sham la tunica intima, la tunica media e la parete venosa dell'innesto venoso apparivano normali. Tuttavia, 30 giorni dopo il trapianto di arteria coronaria, l'intima della nave è stata ispessita e il lume è stato ristretto.
Tra i gruppi di malattia da trapianto sham e venoso, quattro indici biochimici, aspartato aminotransferasi, bilirubina sierica, bilirubina totale e creatinina, hanno mostrato cambiamenti statisticamente significativi. Il chirurgo deve esporre completamente la vena mammaria interna e assicurarsi che non sia attaccata al tessuto circostante. La tecnica fornisce un processo di modellazione standardizzato per lo studio delle malattie del trapianto venoso in modelli animali.
