Il nostro protocollo fornisce un metodo dettagliato per un'induzione affidabile e una valutazione completa della discinesia indotta da levodopa in un modello di ratto della malattia di Parkinson. Il vantaggio principale della nostra scala di valutazione della discinesia è che consente di quantificare sia l'intensità di un dato movimento involontario anormale sia la quantità di tempo trascorso a mostrare quel comportamento. Modelli animali affidabili di discinesia indotta da levodopa sono fondamentali per realizzare l'obiettivo finale di trovare trattamenti efficaci per ridurre o eliminare l'effetto collaterale negli individui con malattia di Parkinson.
Inizia la preparazione per l'esperimento pesando i ratti settimanalmente per calcolare la quantità di farmaco appropriata in base alle variazioni di peso. Fornire ai ratti prelibatezze nutrizionalmente complete e altamente appetibili. Il primo giorno di trattamento con L-DOPA, trasferire i ratti in un unico alloggio fornito con l'arricchimento approvato dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali.
E mantenere i ratti nel singolo alloggiamento durante lo studio per evitare interferenze tra pari con le valutazioni comportamentali. Nei giorni di valutazione della discinesia, rimuovere le bottiglie d'acqua, i rack di cibo e l'arricchimento nella gabbia per evitare interferenze con le valutazioni comportamentali e posizionare le gabbie su una griglia di acciaio con un angolo di circa 45 gradi, quindi capovolgere le etichette di identificazione verso l'alto. Prima dell'iniezione di L-DOPA, aggiungere il volume appropriato di soluzione salina sterile alla miscela di L-DOPA e benserazide liofilizzata pre-pesata nel flaconcino ambrato e agitare bene per 10 secondi.
Immediatamente dopo la preparazione, riempire il volume richiesto della miscela L-DOPA-Benserazide per ogni animale in singole siringhe montate con un ago calibro 26 ed etichettare ogni siringa con un'identificazione individuale dell'animale. Dopo aver portato la prima gabbia al banco di iniezione, rimuovere il ratto dalla sua gabbia per posizionarlo sulla superficie di iniezione. Usa la mano non dominante per trattenere la testa e le spalle del ratto con il palmo contro la superficie e scruffare la pelle sul retro sovrastante le scapole con il pollice e l'indice.
Utilizzare la mano dominante per iniettare il volume di L-DOPA nello spazio sottocutaneo tra le dita, mantenendo l'ago parallelo al corpo per evitare l'iniezione intramuscolare. Dopo l'iniezione, sposta il topo nella gabbia. Quindi, impostare il timer per uno o due minuti e ripetere la procedura iniettando un ratto ogni uno o due minuti fino a quando tutti i ratti non vengono iniettati.
Il giorno della valutazione, posizionare un timer accanto alla gabbia per osservare la discinesia indotta da levodopa o l'intensità del comportamento LID mentre si stima la frequenza di un determinato comportamento durante il periodo di valutazione. Valutare l'intensità e la frequenza dei movimenti di discinesia distonica e ipercinetica, tra cui l'insorgenza iniziale del comportamento LID, il comportamento di picco e la fase di declino al numero desiderato di punti temporali. Se si utilizzano intervalli di valutazione di un minuto, impostare un timer per un minuto per valutare il primo ratto e continuare la valutazione attraverso tutti i ratti a intervalli di un minuto.
La valutazione LID per comportamenti involontari anormali nei ratti parkinsoniani è stata classificata per includere l'intensità e la frequenza dei comportamenti. Nei ratti sono stati osservati una serie di movimenti involontari anormali, tra cui comportamenti distonici, ipercinetici e stereotipati. L'analisi rappresentativa fornisce un esempio dei dati presentati come LID a dose di picco nell'intera sequenza temporale sperimentale e nello schema posologico.
Il LID della dose di picco è stato definito come un momento in cui il punteggio LID medio del gruppo era il più alto. Inoltre, i dati di valutazione LID sono stati esaminati in ogni corso di valutazione giornaliero a diverse concentrazioni di L-DPOA con i gruppi combinati e tracciati come singoli animali. Il tessuto post-mortem proveniente da soggetti valutati comportamentalmente può essere utilizzato per esplorare i meccanismi molecolari associati alle discinesie indotte da levodopa e l'impatto degli interventi terapeutici su tali meccanismi molecolari.
I modelli animali di discinesia indotta da levodopa sono stati utili per chiarire diversi meccanismi che si pensa siano alla base di questa malattia comportamentale. Tale comprensione ha portato alla valutazione preclinica e clinica di diversi obiettivi.
